1、小鼠脑组织如何切片
鼠脑冰冻切片抄采用4%的多袭聚甲醛固定,小鼠直接灌注saline20ml,4%多聚甲醛20ml经左心室固定然后取材在4度4%多聚甲醛后固定4-6h,浸20%-30%糖沉底,就可以切片,切片首先需要冰冻切片机,切片厚度大概选择20-40um差不多。
2、小鼠肝组织石蜡切片具体怎么做?
一般来说是要的,但也要根据具体实验要求决定(比如你要观察一些什么东西啦,对结构的完整性要求有多高啦)甲醛能固定一般组织,但溶解肝糖和色素。
注意:1.材料必须新鲜,搁置时间过久则产生蛋白质分解变性,导致细胞自溶及细菌的滋生,而不能反映组织活体时的形态结构。
2.固定液的种类很多,其对组织的硬化收缩程度以及组织内蛋白质、脂肪、糖类等物质的作用各不相同。例如纯酒精可固定肝糖而能溶解脂肪,甲醛能固定一般组织,但溶解肝糖和色素。固定液可分为单一固定液及混合固定液。前者有甲醛(蚁醛、福尔马林)、酒精、醋酸或冰醋酸、升汞、锇酸(四氧化锇)、重铬酸钾及苦味酸等,单一固定液不能固定细胞中的所有成分;混合固定液可以互补不足,常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa液(配方见有关技术书籍)。
过程:
1.取材
2.固定
3.洗涤与脱水
4.透明
5.浸蜡与包埋
6.切片
7.贴片与烤片
8.切片脱蜡及水化
9.染色
10.切片脱水、透明和封片
切片刀的锐利与否、蜡块硬度适当都直接影响切片质量,可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。通常切片厚度为4~7微米,切出一片接一片的蜡带,用毛笔轻托轻放在纸上。
3、求助成年小鼠SVZ取材详细步骤
1、取8周龄C57雄性小鼠,腹腔麻醉。
2、头部70%酒精消毒。
3、剪刀从颈部断离头部,剪开头皮、颅骨,取出大脑,置于盛有冰的无菌D’Hanks的小皿中。" A" ?) x* g# U$ H! ^# V
4、去除血迹,放入另一盛有冰的无菌D’Hanks的小皿中,去除脑膜,在显微镜下操作。
5、将大脑约1/2处横断,保留前脑(近嗅球端),沿中线分为两半。9 ^& b6 Q7 Q! O/ ^
6、将半脑外侧面朝下,用一只镊子固定,另一只镊子去除剩余的海马、SVZ内侧壁,见SVZ外侧壁呈月牙型,上下侧与白质相连,界限清晰。
7、分离之,去除四周的白质纤维。取出置于无菌的1.5毫升Eppendorf离心管中,置于冰中。! H+ ?" u/ I! a) b1 D! Z" ~
8、同样分离另一侧的。1 U+ n* Q. Y' s" s
9、每个离心管中加入400ul的0.1%含EDTA的胰酶。
10、轻柔吹打5~10次,将组织吹打成细块状(使用1000ul的蓝色枪头)。
11、37℃孵育10分钟。每个样本组织再轻柔吹打(用2001xl的枪头)约20次,使得SVZ组织消化成小的颗粒。
12、37℃再次孵育10分钟,再轻柔吹打(用2001xl的枪头)约20次,使得SVZ组织完全消化成单个细胞。+ U4 h- ~( 8 r1 Y
13、可以酌情延长消化时间和次数,最终使得组织完全消化成单个细胞。
14、每个离心管中加入4001xl的NSCs培养基终止消化。, & z& p" u! T, ?5 Z4 g7 r
15、常温下O.3 rcf离心3分钟。# ]4 h. i9 l: p( L- f
16、去上清,加入培养基洗涤一次,再次0.3 rcf离心3分钟。& m8 {' z6 N) g. H# Z
17、去上清,加入培养基轻柔的重悬细胞。
18、移入50ml的培养瓶中培养,每瓶加约10ml培养基(培养基为DMEM/F12(1:1),每50ml中添加了青霉素.链霉素500微升,N2 500ul, B27 1ml,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)20ng/ml,表皮生长因子(EGF)20ng/ml)。约7~8天后神经球形成。$ B8 g6 W. H" H1 h* sE' l+ Y
19、将培养瓶放置在倒置显微镜下进行神经球计数。4 E! r& d5 h( \% K& A* @$ n5 j
20、在24小时后换液一次,换出死细胞和其它杂质。7 m9 P8 W; ^9 R% U% @7 n1 L
21、观察到神经球长到约200um大小时即可传代。
4、小鼠造模后16小时取材,怎么计划时间
小鼠造模方法。方法三次造模分别采用:免疫介导法:小鼠经6.0Gy60Coγ射线亚致死量全身
由尾静脉输入DBA/2小鼠的胸腺、淋巴结混合细胞悬液1×106个细胞/0.2ml/只。混合方法:小鼠一次全身3.0Gy60Coγ射线照射后,分照射后,
5、6天腹腔注射环磷酰胺50.0mg/kg及氯霉素62.5mg/kg。化学方法:用苯+玉米油,3次/w,别在第4、背部内皮下注射,共注射15次。同时腹腔注射环磷酰胺溶液(50mg/kg),每日1次共7次。结果
免疫介导法造模容后模型小鼠在15d内除1只小鼠外全部死亡;混合方法造模,模型小鼠骨髓
免疫介导和混合方法造模速度快,对模型小鼠骨髓抑制明显,与临床急性AA
活检提示造模失败;化学方法造模,造模成功,模型维持时间长。
5、组织匀浆法制备小鼠肝脏过氧化氢酶粗提液实验中肝脏的解剖位置在哪?如何进行取材
1、肝来的体表解剖位置——源肝是人体最大的实质器官,呈楔形,左右径为25cm,前后径约15 cm,大部分在右上腹,小部分超越正中线达左上腹,上界在右锁骨中线平第5肋上缘,下界齐右肋缘。(肝脏是人体最大的消化腺,是体内物质代谢和解毒的重要器官,并能分泌胆汁。)
2、取材:用颈椎脱臼法处死小鼠,取出肝脏
6、求助,关于小鼠肺组织冰冻切片的制作
取材前做灌注的话,肺里的淤血会少些,灌注的越成功,肺里血越少,再就是取材的时候动作温柔点,不要弄伤组织。取材后只能多洗,没有什么好的办法。