1、肿瘤标记物就是癌胚抗原么
肿瘤标志物有很多种,胃部相关的肿瘤标志物有CEA、CA50、CA724、CA199、CA242;
慢性浅表性胃炎常导致消化不良,并出现过程较为缓慢的消瘦;
根据您的情况,建议及早检查以上肿瘤标志物、综合诊断。
2、分子标记技术有哪些
DNA分子标记技术
SSR分子标记技术
AFLP分子标记技术
3、一管血查肿瘤标记物,常见癌症的肿瘤标记物有哪些
在肿瘤的研究和临床实践中,早期发现、早期诊断、早期治疗是关键。肿瘤标志物(Tumor Marker TM)在肿瘤普查、诊断、判断预后和转归、评价治疗疗效和高危人群随访观察等方面都具有较大的实用价值。
1、 定义
肿瘤标志物主要是指在恶性肿瘤的发生和发展过程中由肿瘤细胞合成分泌到体液或组织中,或是缩主对体内新生物反应而异常产生的,在体液或组织中含量明显升高的一类生物活性物质。随着分子生物学技术的发展,从分子水平发现基因结构或功能的改变以及具有一定生物学功能的基因产物的异常表达均与肿瘤的发生、发展密切相关,所以癌基因、抑癌基因及其产物也属肿瘤标志物之列。
2、 肿瘤标志物的分类及临床应用
肿瘤标志物用于临床诊断的有许多种,可分为:癌胚类抗原、糖蛋白抗原、酶类、激素类、癌基因类和与肿瘤相关的病毒等。目前临床常用的肿瘤标志物有:
2.1 甲胎蛋白(AFP)
AFP在胚胎期是功能蛋白,由卵黄囊、胚胎肝产生,脐带血含量为1000-5000μg/L,出生后1年内降至成人水平(低于20μg/L)。约70%以上原发性肝细胞癌患者AFP在400μg/L以上,多逐渐升高,但亦有不高于400μg/L,甚至在正常水平的患者。妊娠、活动性肝病、生殖腺胚胎源性肿瘤等也可升高。
2.2癌胚抗原(CEA)
CEA是一种酸性糖蛋白,胚胎期在小肠、肝脏、胰腺合成,成人血清含量极低(<5μg/L) ,吸烟者可升高达15-20μg/L,少数可达20-40μg/L。 CEA开始被认为是结肠癌的标志物(60%-90%患者升高),但以后发现胰腺癌(80%)、胃癌(60%)、肺癌(75%)和乳腺癌(60%)等也有较高表达。某些肺癌患者也可轻度升高。
2.3 CA125
最初认为是卵巢癌特异的,但深入研究后发现,它也是一种广谱的标志物。正常值以35U/ml为界,80%卵巢癌、58%胰腺癌、32%肺癌,其它如乳腺癌、肝癌等也可有不同程度的升高。子宫内膜炎、急性胰腺炎、腹膜炎、肝炎、肝硬化腹水、结核等良性疾病也可升高。
2.4 CAl5-3
是乳腺细胞上皮表面糖蛋白的变异体,为乳腺癌标志物,正常<30U/ml。乳腺癌晚期明显升高。该标志物也是广谱的,其它肿瘤如肝癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、肠癌、胰腺癌等也可见升高。
2.5 CA19-9
CAl9-9是一种类粘蛋白的糖蛋白成分,与Lewis血型成分有关。血清内正常值<37U/mL(>95%),是较可靠的胰腺癌标志,79%的胰腺癌升高。但异常升高也可见其它多种肿瘤,如67%胆道癌、胆囊癌,62%胃癌、部分结肠癌、肝癌、肺癌、乳腺癌等也有升高。少部分良性病变及正常人也可升高。
2.6 CA72-4
CA72-4是一种高分子量糖蛋白,正常人血清中含量<6U/ml,异常升高在各种消化道肿瘤、卵巢癌均可产生。对于胃癌的检测特异性较高,>6U/ml为临界值。良性胃病仅<1%者升高,而胃癌升高者比例可达42.6%,如与CAl9-9同时检测,阳性率可达56%。
2.7 CA242
是一种粘蛋白型糖抗原,可作为胰腺癌和结肠癌较好的肿瘤标志物,其灵敏度与CA19-9相仿,但特异性、诊断效率则优于CA19-9。
2.8 鳞状细胞相关抗原(SCC)
是由宫颈癌细胞中提纯的,是宫颈癌较好的肿瘤标志物。正常人血清水平<2μg/L。异常升高可见于宫颈鳞癌,21%宫颈腺癌也有升高。肺鳞癌有较高的阳性率。食道鳞状上皮癌、口腔鳞状上皮癌皆有较高的阳性率,SCC是鳞状上皮癌的重要标志物。
2.9细胞角蛋白19 (CYFRA21-1)
细胞角蛋白是细胞体的中间丝,根据其分子量和等电点不同可分为20种不同类型,其中细胞角蛋白19在肺癌诊断中有很大价值,在肺癌的血清浓度阈值为2.2μg/L,其敏感性、特异性及准确性分别为57.7%、91.9%和64.9%。从组织学角度看,鳞癌的敏感性 (76.5%)较腺癌(47.8%)为高,也高于SCC对两者的诊断率。细胞角蛋白19与CEA联合应用,诊断非小细胞肺癌符合率已可达到78%。
2.10 β2-微球蛋白
表达在大多数有核细胞表面,是HLA-A、B和-C抗原的一分子量为11800链。临床上多用于证实淋巴增殖性疾病,如白血病、淋巴瘤及多发性骨髓瘤。其水平与肿瘤细胞数量、生长速率、预后及疾病活动性有关。
2.11 铁蛋白
是一种铁结合蛋白,存在于各种组织,病理状态下,释放到血液增加,在多种癌症患者血中均有不同程度的阳性率,肝癌患者的阳性率在70%以上,所以可辅助肝癌诊断。但不是肿瘤特异的标志,在发热、肝炎、肝硬化、阻塞性黄疸、再生障碍性贫血及一些溶血性疾病等时都可能升高。
2.12 前列腺特异性抗原(PSA)
PSA是目前诊断前列腺癌最敏感的指标,可用于前列腺癌的诊断、监测疗效及预测复发。PSA是由前列腺上皮细胞产生的一种大分子糖蛋白,它具有极高的组织器官特异性。正常人体血清内PSA <4μg/L,但有随年龄增长而增高的趋势。<50岁者一般低于4.0μg/L,50-55岁为4.4μg/L,60-69岁为6.8μg/L,>70岁可达7.7μg/L,异常升高预示有患前列腺癌的可能。以 >4μg/L为临界值,早期前列腺癌63%-70%阳性,总阳性率可达69-92.5%。
2.13 神经原特异性烯醇化酶(NSE)
血清NSE是神经内分泌肿瘤的特异性标志,如神经母细胞瘤、甲状腺髓质癌和小细胞肺癌(72%升高)。目前,NSE已作为小细胞肺癌重要标志物之一。抽血时发生溶血NSE也可升高。
2.14 绒毛膜促性腺激素(HCG)
是存在于胎盘中的糖蛋白激素,分于量为45000,当怀孕时血与尿中水平上升,正常血中只含微量。绒毛膜上皮癌患者显著升高,60%的睾丸肿瘤明显升高,在卵巢癌、乳腺癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肝癌、肺癌等尿中HCG可呈阳性反应。一些良性疾病如消化性溃疡、肠炎、肝硬化等血中HCG可升高。
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4、什么是分子标记?
长期以来,植物育种中选择都是基于植株的表型性状进行的,当性状的遗传基础较为简单或即使较为复杂但表现加性基因遗传效应时,表型选择是有效的。但许多重要农艺性状为数量性状,如产量等;或多基因控制的质量性状,如抗性等;或表型难以准确鉴定的性状,如根系活力等,此时根据表型提供的对性状遗传潜力的度量是不确切的,因而选择是低效的。
遗传育种家们很早就提出了利用标记进行辅助选择以加速育种改良进程的设想。形态学标记等常规遗传标记是最早用于植物育种辅助选择的标记,但由于它们数量少、遗传稳定性差,且常常与不良性状连锁,因而利用受到很大限制。近十年来,分子生物学技术的发展为植物育种提供了一种基于DNA变异的新型遗传标记——DNA分子标记,或简称分子标记。
与传统应用的常规遗传标记相比,分子标记具有许多明显的优点,因而已被广泛应用于现代作物遗传育种研究的各个方面,正在为植物育种技术带来一场新的变革。
5、临床常见疾病的生物标记物有哪些
主要有以下几类:
代谢标记物:
骨代谢标记物
通过测定尿中吡啶诺林(pyridinoline,PYD)及I型胶原N尾端交联肽(NTX-I)和C尾端交联肽(CTX-I)水平可反映骨I型胶原的代谢。研究发现OA患者中PYD水平明显升高,进展期OA患者尿中CTX-I水平明显高于对照组。血清降钙素作为一种反映骨合成的标记物在OA患者的研究中表现出不一致的结果。
利用现有的骨代谢标记物反映OA病情欠满意。更多学者致力于挖掘更具特异性、敏感性的反映软骨和滑膜代谢的标记物。
软骨代谢标记物
可通过数种标记物的检测反映软骨Ⅱ型胶原的合成代谢,其中,Ⅱ型胶原羧基木端肽(CTX-Ⅱ)最为重要。多项研究已证实0A和RA患者中尿CTX-Ⅱ水平明显升高。通过测定血清PIICP(procollagen type Ⅱ C-terminalpropeptide,Ⅱ型前胶原羧基端前肽)发现Ⅱ型胶原合成在OA早期阶段即有增加。Rousseau[2]利用ELISA法测定PIIANP,发现其水平在OA患者中降低。Deberg[3]发现了软骨II型胶原2种降解产物肽:Coll2-1及Coll 2-1 NO2水平在OA患者中升高。Charni[4]发现膝OA患者中尿HELIX-Ⅱ水平较健康对照组显著升高。表1 骨,软骨,滑膜代谢标记物的BIPED分类组织分子合成标记物降解标记物BIPED 分类方法骨Ⅰ型胶原
诊断性标记物
尽管目前研究的大部分标记物水平(CTX-Ⅱ,COMP,PYD等)在大部OA个体中明显升高,但在一定比率患者中却表现出正常水平。这提示这些标记物单独作为OA诊断工具仍不具备足够敏感性。在无髋OA影像学特征性表现的患者中,血COMP的升高已被观察到与髋部相关症状(疼痛,僵直)有关联,但在膝OA患者中无此发现。COMP和NTX-I被发现与老年女性OA患者影像学进展有一定相关,在影像学表现超过4年的绝经后膝OA女性患者中,COMP和NTX-I水平升高。研究发现在伴有膝部创伤的患者中,在X线尚无表现但已有关节镜下发现的软骨退化的早期阶段,滑液中PIICP水平即有升高,Chevalier发现滑液中CTX-Ⅱ水平在影像学无表现的OA早期阶段即有升高,且其水平较对照组升高达三倍之多。
总之,尽管一些标记物可能在OA早期阶段即明显升高,但这些标记物因缺乏足够敏感性,特异性尚不能被单独用于个体OA患者的诊断。
疾病严重度标记物
疾病严重度标记物(burden ofdiseasemarkers)主要评估OA的严重程度或累及范围,特别是某一时间点的疾病情况。在一项71例女性OA患者的研究中发现,全身多发性OA患者中CRP,PYD,YKL-40,MMP-3和nMP-1水平相对于仅罹患膝OA患者明显升高。Elliott在一项包含多人种样本病例的大型研究中发现白色人种HA水平相对黑种人明显升高,男性高于女性。另一项含291例白人膝OA患者的研究发现:血COMP水平随着患者K-L(Kellgren-Lawrence grades)评分增加而显著升高。Garnero在324例绝经后妇女中研究发现,不同部位OA患者尿中CTX-Ⅱ水平也不相同,提示可以此鉴别不同部位的OA。
用于评估疾病严重程度的标记物与那些用于诊断的标记物参数相似,因此多数同时隶属于以上两类标记物。由于OA常存在于1个以上部位且常伴有各部位症状不同程度的叠加,因此,疾病严重度标记物目前仅应用于临床研究,尚不能在个体患者中仅凭一种标记物精确地反映疾病严重程度。
疾病预后标记物
研究发现相对非进展期或控制期患者,进展期OA患者CTX-I及血清降钙素水平较高,然而另外一些研究得出相反的结果。这可能由于:骨代谢标记物不仅反映出OA引起的软骨下骨异常,同时也反映全身骨骼代谢情况,因此易受年龄、绝经、骨质疏松及其他骨骼系统疾病影响。
在一项172例4年以上病程原发性膝OA患者中研究发现,进展期患者滑液中Ⅱ型胶原代谢产物PIICP水平较非进展期患者明显升高。鹿特丹研究中心随访1 235例膝和(或)髋OA患者6.6年发现CTX-Ⅱ和HELlX-Ⅱ水平的升高与膝和髋OA的患病率和病情进展密切相关。在另一项含333例髋OA患者的研究中发现,CTX-II和HA处于高水平状态的患者伴有影像学上病情的迅速进展表现。Deberg[9]研究发现膝OA患者尿Coll2-l和Coll2-l NO2高水平状态超过1年可预测以后3年间关节间隙狭窄程度的变化。Pavelka随访89例膝OA患者2年发现,HA高基础水平状态与OA影像学上迅速进展相关。Sharif对115例膝OA患者随访5年发现,进展期患者COMP基础水平明显高于非进展期患者。Garnero随访75例膝OA患者1年发现,低PIIANP水平和高CTX-Ⅱ水平患者相比对照组膝关节损害速度加快8倍。在一项230例膝OA患者的研究中发现,通过测定Ⅱ型胶原代谢产物(C2C,PIICP,C1,2C,PIICP)基础水平可预测18个月间OA影像学进展。
由于在OA患者,关节损伤包含骨、软骨、滑膜,因此使用数种标记物的组合预测疾病预后十分必要。
疗效标记物
BRISK研究中心在一项为期1年含186例轻至中度OA患者的前瞻性研究中发现,选用二磷酸盐制剂治疗后,尿CTX-Ⅱ水平显著降低。在一项含20l例膝OA患者的研究中发现,应用非类固醇抗炎药治疗后尿CTX-Ⅱ水平下降。Garnero在另一组选用COX-2抑制剂治疗的膝OA患者中得到类似结果。
Christgau在212例膝OA患者中研究发现,高CTX-Ⅱ基础水平患者在使用硫酸氨基葡萄糖治疗超过3年后CTX-Ⅱ水平明显下降。在一项含301例绝经后女性OA患者的研究中,选择性雌激素受体调节剂可使尿CTX-Ⅱ水平明显降低。Manicourt发现膝OA患者中,鲑鱼降钙素治疗后尿CTX-Ⅱ,C2C和MMP-1,3水平明显下降。
一旦关于OA患者对于软骨蛋白活性药物治疗的反应标记物的相关评测得以完善,生物标记物可能提供更多治疗对于软骨循环作用的相关信息,这将极大补充完善由临床和影像学提供的信息。
研究性标记物
研究性标记物(investigative markers)是一类无足够依据包含于其他分类中的标记物,采用新的研究方法获得的标记物可归于此类。例如,研究发现尿液中存在一种与膝和髋OA密切相关的新型标记物并与K-L评分相关可被归于此类。然而,数项关于编码关节软骨和细胞外基质蛋白基因的研究尚未得到足够证据去证实这些基因的非同义突变是原发性OA的危险因素。研究性标记物的临床应用尚有待时机,但它们提供了OA发病机理的新信息,临床具潜在应用前景。
6、肝癌骨转移,肿瘤标志物有异常吗
这个不是一定的,因为肿瘤的发生发展是与基因关系密切的,而肿瘤标志物仅作为一个参考指标,可以通过佳学基因肿瘤分子病理分型来分析疾病的预后、发生发展以及是否转移。佳学基因
7、什么是分子标记
分子标记是生物遗传标记的一种。通过引物设计的不同,用PCR的方法在生物的基因组DNA上扩增出相关条带,通过电泳、软件识别、分析,可用作生物遗传信息的研究。
分子标记种类有很多,第一代分子标记以RFLP为代表,是基于酶切位点的多态性开发的分子标记。
第二代分子标记以SSR为代表,是基于简单重复序列的多态性。第二代分子标记通过引物的特殊设计,能够扩增DNA上的相应位置的序列,根据它们的多态性,进行下一步分析。
第三代分子标记以SNP为代表,单核苷酸多态性。是基于高通量测序为基础的新一代分子标记技术。
8、分子标记有哪些类型
分子标记大多以电泳谱带的形式表现, 大致可分为三大类。
第一类是以分子杂交为核心的分子标记技术, 包括:(1) 限制性片段长度多态性标记(Restriction fragment length polymorphism, 简称 RFLP 标记); (2) DNA 指纹技术(DNA Fingerprinting); (3) 原位杂交(in situ hybridization) 等;
第二类是以 PCR 反应为核心的分子标记技术, 包括:(1) 随机扩增多态性 DNA 标记(Random amplification polymorphism DNA, 简称 RAPD 标记); (2) 简单序列重复标记(Simple sequence repeat, 简称 SSR 标记) 或简单序列长度多态性(Simple sequence length polymorphism, 简称 SSLP 标记); (3) 扩展片段长度多态性标记(Amplified fragment length polymorphism, 简称 AFLP 标记); (4) 序标位(Sequence tagged sites, 简称 STS 标记); (5) 序列特征化扩增区域(Sequence charactered amplified region, 简称 SCAR 标记) 等;
第三类是一些新型的分子标记,如: (1) 单核苷酸多态性(Single nuleotide polymorphism, 简称 SNP 标记); (2) 表达序列标签(Expressed sequences tags, 简称 EST 标记) 等。
9、分子标记方法
分子标记
在农业基础与应用研究领域,分子标记技术已开始应用于作物种质资源和育种的研究,特别是在构建分子遗传图谱和标记目的性状基因方面取得了很大的进展。
形态标记(morphologica markers)即植物的外部特征特性,如株高、穗长、粒色、千粒重等。此种形态标记简单直观,但是形态标记数少、多态性差、易受环境条件影响。在小麦抗叶锈病基因标记方面,SINGH[5]曾利用形态标记发现慢叶锈基因Lr34和小麦叶片尖部坏死基因紧密连锁。
细胞标记(cytological markers)主要是染色体核型(染色体鼠数目、大小、随体、着丝点位置等)和带型(C带、N带、G带等),这类标记的缺点是数目有限。目前,还未发现用其进行小麦抗叶锈基因的标记。
生化标记(biochemical markers)主要包括同工酶和储藏蛋白。生化标记具有经济方便的优点,但其标记数有限。DAVlD[6]等曾利用生化标记内肽酶同工酶EP-Dld作为遗传标记对以Thatcher为背景的小麦抗叶锈病近等基因系进行连锁分析,发现EP-Dld与Lr19紧密连锁,重组值为(0.01士0.09)个作图单位。WINZELER[7]等利用含Lr19的小麦抗叶锈病近等基因系,发现生化标记内肽酶同工酶EP-Dl的无效等位基因EP-Dlc可以作为与 Lr19紧密连锁的生化标记,遗传距离为(0.33士0.33)cM。
分子标记与形态标记、细胞标记、生化标记相比较,有以下几方面的优点:①在植物体的多个组织及生育阶段均可检测到,不受时空限制。②数量多,遍及整个基因组。③有许多标记表现为共显性,能够鉴别基因型纯合与否,提供完整的基因型。在标记小麦抗叶锈病基因方面,分子标记可以在更深层次上揭示小麦抗锈遗传机制。通过找到与抗锈基因紧密连锁的分子标记,不但能在遗传背景不同的育种材料中特异性的检测目的基因,而且可以在任一生育阶段同时对多个抗性基因进行筛选,这为了解抗源和抗病品种中所含有的抗性基因提供了更为迅速、稳定、可靠的方法。
目前,用于标记小麦抗叶锈病基因的分子标记主要有以下几种:
2.l RFLP技术在小麦抗叶锈病基因标记中的应用
RFLP(restriction fragment length polymorphism)作为遗传分析的工具开始于1974年,80年代开始应用于植物。其基本原理是物种的基因组DNA在限制性内切酶的作用下,产生相当多的、大小不等的DNA片段,用放射性同位素标记的DNA做探针把与被标记DNA相关的片段检测出来,从而构建出多态性图谱;它所代表的是基因组 DNA在限制性内切酶消化后产生的片段在长度上的差异。RFLP技术被广泛应用于小麦遗传图谱的构建标记和定位小麦的目的基因。
在小麦抗叶锈病基因的RFLP标记方面,SCHACHERMAYR等[8]将一编码受体蛋白激酶的Lrkl0基因的3.9Kb的HindⅢ片段用 PstⅠ分成六个亚片段,将这些亚片段作为RFLP标记,寻找到了特异的Lrk10片段可作为与小麦抗叶锈病基因Lr10紧密连锁的分子标记,将这一亚片段与已知抗性基因的单基因系进行Southern杂交,发现这一3.9Kb的HindⅢ片段仅存在于携带抗叶锈病基因Lr10的近等基因系中。进一步将此 RFLP标记Krkl0-6转变为STS标记STSLrkl0一6,发现一282bp的片段仅存在于携带Lr10的品种中,F2群体分离进一步证明此 282bp的片段与Lr10紧密连锁。SCHACHERMAYR等[9]利用近等基因系找到了与抗叶锈病基因Lr24紧密连锁的RFLP和RAPD的标记。在供试的115个RFLP探针中,其中6个与Lr24紧密连锁,从360个随机RAPD引物中,找到了11个能够揭示多态性的引物,其中一个与 Lr24紧密连锁,并将该RAPD产物克隆、测序将其转化为更为稳定可靠的STS标记,为分子标记辅助育种打下了良好的基础。FEUILLET等[10] 利用小麦抗叶锈病近等基因系Lr1/6*Thatcher和Thatcher及感病品种Frisal,通过F2群体分离,将37个RFLP中的16个定位在了第五部分同源群,而且能在Lr1/6*Thatcher和Frisal之间揭示多态性,I1个RFLP探针能在近等基因系间揭示多态性,F2群体分离分析发现,其中3个与抗性基因连锁,其中一定位在染色体5D上的探针pTAG621证明与Lr1紧密连锁,并将这一RFLP标记转化为了更为可靠的STS 标记。
AUTRIQUE[11]等利用4种含不同抗性基因的小麦近等基因系,根据抗性基因在其染色体上所处的位置选择克隆,同时,从大麦的RFLP连锁图谱和D一基因组RFLP图谱中,挑选了其它的克隆。通过杂交的方法来寻找多态性分子标记。结果发现,定位在染色体7DL和3DL上的8个分子标记,与抗性基因Lr19和Lr24共分离;来自Aegilops umbellulata的Lr9,被定位在染色体6B上,一克隆XksuD27与Lr9共分离,以及与Lr32紧密连锁的两个RFLP标记,遗传距离分别为(3.3土2.6)cM和(6.9土3.6)cM。
2.2 小麦抗叶锈病基因的RAPD标记
NAIK等[12]利用含Lr28的抗叶锈病近等基因系,从80个随机引物中找到了一个能在供体亲本和轮回亲本中揭示多态性的RAPD标记OPJ一 O1。将此387bp的多态性产物克隆、测序,将其设计成更为稳定的STS标记,利用BSA法,对F3群体进行分析,发现387bp的特异性产物只出现在抗性群体中,而在感病群体中表现缺失。证明了RAPD标记OPJ一O1和STS 标记均与Lr28紧密连锁。SIELDLER等[13]利用400个随机引物和14个DNA探针筛选近等基因系Lr9的多态性,并通过F2群体进行遗传连锁分析。结果表明2个RAPD标记和一个RFLP标记可以区分抗感品系,且与Lr9紧密连锁。WILLIAM等[14]利用RAPD技术,从400个随机引物中,找到了3个能在抗病群体和感病群体中揭示多态性的引物0PG-05、0P1-16和OPR-03,将其克隆转化成探针后,对重组群体进行 Southern杂交,确定其中前两个探针与持久抗叶锈病基因相关的数量性状位点(QTL)紧密连锁,其中定位在7BL上的QTL与抗叶锈病基因Lr34 部分同源。SCHACHERMAYR等[15]从395个随机引物中筛选出了3个与小麦抗叶锈病基因Lr9连锁的RAPD标记,将其特异性产物克隆、测序,然后转化成更为稳定的STS标记,F2、F3分离群体检测发现,所有的3个RAPD标记0PA-07、0PJ-l3、OPR-15和一RFLP标记 cMWG684与Lr9紧密连锁。另一RFLP标记PSR546也与Lr9紧密连锁,并与上述四个
DNA标记紧密连锁,遗传距离为(8士2.4)cM,此标记被定位在小麦染色体长臂6BL上。DEDRYVER等[16]利用含Lr24的小麦抗叶锈病近等基因系,在125个随机引物中,只有引物OP-H5能在抗病亲本RL6064中扩
增出一700bp的特异性的条带,而在感病亲本Thatcher中没有。F2群体分离证明,该标记与Lr24完全连锁。将其转变成稳定、可靠的SCAR标记,为分子标记辅助育种提供了有力的工具。
3 其它分子标记
虽然RFLP和RAPD是两种比较普遍的分子标记,但RFLP在小麦中检测的多态性较低,仅为20%--38%。RAPD是方便经济的分子标记,但是重复性和稳定性较差。其它的分子标记,如SSR、ISSR和AFLP的综合信息量大,在作物特别是小麦遗传资源的研究上有着广阔的应用前景。
4 分子标记辅助选择
目前,分子标记技术已开始应用于育种实践,并表现出其独特的优越性。寻找与重要的农艺性状紧密连锁的分子标记,是进行分子标记辅助选择(又称分子育种)和通过作图克隆基因的基础。分子标记辅助选择(Molecular-assisted-selection简称MAS)是生物技术与传统遗传育种相结合而形成的,它可以减少传统的回交育种过程中很难消除的连锁累赘,还可以把不同抗叶锈病基因聚合到同一优良品种中,实现同效基因的累加作用,获得持久抗性。在获得稳定的分子标记的基础上,通过染色体步行(Chromosome walking)等方法分离克隆该基因。
由于分子标记育种技术目前尚不成熟和完善,因此还不能作为一种育种方法单独使用。我国传统育种经验丰富,因此,应注意将分子标记这一先进技术与育种家的丰富经验相结合,使分子标记辅助选择发挥其更大的作用。
10、请教分子标记SSR标记(STMS)原理和步骤
SSR:微卫星DNA又叫简单重复序列,指的是基因组中由1~6个核苷酸组成的基本单位重复多次构成的一段DNA,广泛分布于基因组的不同位置,长度一般在200bp以下。研究表明,微卫星在真核生物的基因组中的含量非常丰富,而且常常是随机分布于核DNA中。
微卫星中重复单位的数目存在高度变异,这些变异表现为微卫星数目的整倍性变异或重复单位序列中的序列有可能不完全相同,因而造成多个位点的多态性。如果能够将这些变异揭示出来,就能发现不同的SSR在不同的种甚至不同个体间的多态性,基于这一想法,人们发展起了SSR标记。
SSR标记又称为sequence tagged microsatellite site,简写为STMS,是目前最常用的微卫星标记之一。由于基因组中某一特定的微卫星的侧翼序列通常都是保守性较强的单一序列,因而可以将微卫星侧翼的DNA片段克隆、测序,然后根据微卫星的侧翼序列就可以人工合成引物进行PCR扩增,从而将单个微卫星位点扩增出来。由于单个微卫星位点重复单元在数量上的变异,个体的扩增产物在长度上的变化就产生长度的多态性,这一多态性称为简单序列重复长度多态性(SSLP),每一扩增位点就代表了这一位点的一对等位基因。由于SSR重复数目变化很大,所以SSR标记能揭示比RFLP高得多的多态性,这就是SSR标记的原理。