1、无证制造特重设备电梯造成一人死亡是否构成刑事
《中华人民共和国特种设备安全法》
第六章 法律责任
第七十四条
违反本法规定，未经许可从事特种设备生产活动的，责令停止生产，没收违法制造的特种设备，处十万元以上五十万元以下罚款；有违法所得的，没收违法所得；已经实施安装、改造、修理的，责令恢复原状或者责令限期由取得许可的单位重新安装、改造、修理。
第七十五条
违反本法规定，特种设备的设计文件未经鉴定，擅自用于制造的，责令改正，没收违法制造的特种设备，处五万元以上五十万元以下罚款。
第七十六条
违反本法规定，未进行型式试验的，责令限期改正；逾期未改正的，处三万元以上三十万元以下罚款。
第七十七条 违反本法规定，特种设备出厂时，未按照安全技术规范的要求随附相关技术资料和文件的，责令限期改正；逾期未改正的，责令停止制造、销售，处二万元以上二十万元以下罚款；有违法所得的，没收违法所得。
第七十八条
违反本法规定，特种设备安装、改造、修理的施工单位在施工前未书面告知负责特种设备安全监督管理的部门即行施工的，或者在验收后三十日内未将相关技术资料和文件移交特种设备使用单位的，责令限期改正；逾期未改正的，处一万元以上十万元以下罚款。
第七十九条
违反本法规定，特种设备的制造、安装、改造、重大修理以及锅炉清洗过程，未经监督检验的，责令限期改正；逾期未改正的，处五万元以上二十万元以下罚款；有违法所得的，没收违法所得；情节严重的，吊销生产许可证。
第八十条
违反本法规定，电梯制造单位有下列情形之一的，责令限期改正；逾期未改正的，处一万元以上十万元以下罚款：
（一）未按照安全技术规范的要求对电梯进行校验、调试的；
（二）对电梯的安全运行情况进行跟踪调查和了解时，发现存在严重事故隐患，未及时告知电梯使用单位并向负责特种设备安全监督管理的部门报告的。
第八十一条
违反本法规定，特种设备生产单位有下列行为之一的，责令限期改正；逾期未改正的，责令停止生产，处五万元以上五十万元以下罚款；情节严重的，吊销生产许可证：
（一）不再具备生产条件、生产许可证已经过期或者超出许可范围生产的；
（二）明知特种设备存在同一性缺陷，未立即停止生产并召回的。
违反本法规定，特种设备生产单位生产、销售、交付国家明令淘汰的特种设备的，责令停止生产、销售，没收违法生产、销售、交付的特种设备，处三万元以上三十万元以下罚款；有违法所得的，没收违法所得。
特种设备生产单位涂改、倒卖、出租、出借生产许可证的，责令停止生产，处五万元以上五十万元以下罚款；情节严重的，吊销生产许可证。
第八十二条
违反本法规定，特种设备经营单位有下列行为之一的，责令停止经营，没收违法经营的特种设备，处三万元以上三十万元以下罚款；有违法所得的，没收违法所得：
（一）销售、出租未取得许可生产，未经检验或者检验不合格的特种设备的；
（二）销售、出租国家明令淘汰、已经报废的特种设备，或者未按照安全技术规范的要求进行维护保养的特种设备的。
违反本法规定，特种设备销售单位未建立检查验收和销售记录制度，或者进口特种设备未履行提前告知义务的，责令改正，处一万元以上十万元以下罚款。
特种设备生产单位销售、交付未经检验或者检验不合格的特种设备的，依照本条第一款规定处罚；情节严重的，吊销生产许可证。
第八十三条
违反本法规定，特种设备使用单位有下列行为之一的，责令限期改正；逾期未改正的，责令停止使用有关特种设备，处一万元以上十万元以下罚款：
（一）使用特种设备未按照规定办理使用登记的；
（二）未建立特种设备安全技术档案或者安全技术档案不符合规定要求，或者未依法设置使用登记标志、定期检验标志的；
（三）未对其使用的特种设备进行经常性维护保养和定期自行检查，或者未对其使用的特种设备的安全附件、安全保护装置进行定期校验、检修，并作出记录的；
（四）未按照安全技术规范的要求及时申报并接受检验的；
（五）未按照安全技术规范的要求进行锅炉水（介）质处理的；
（六）未制定特种设备事故应急专项预案的。
第八十四条
违反本法规定，特种设备使用单位有下列行为之一的，责令停止使用有关特种设备，处三万元以上三十万元以下罚款：
（一）使用未取得许可生产，未经检验或者检验不合格的特种设备，或者国家明令淘汰、已经报废的特种设备的；
（二）特种设备出现故障或者发生异常情况，未对其进行全面检查、消除事故隐患，继续使用的；
（三）特种设备存在严重事故隐患，无改造、修理价值，或者达到安全技术规范规定的其他报废条件，未依法履行报废义务，并办理使用登记证书注销手续的。
第八十五条
违反本法规定，移动式压力容器、气瓶充装单位有下列行为之一的，责令改正，处二万元以上二十万元以下罚款；情节严重的，吊销充装许可证：
（一）未按照规定实施充装前后的检查、记录制度的；
（二）对不符合安全技术规范要求的移动式压力容器和气瓶进行充装的。
违反本法规定，未经许可，擅自从事移动式压力容器或者气瓶充装活动的，予以取缔，没收违法充装的气瓶，处十万元以上五十万元以下罚款；有违法所得的，没收违法所得。
第八十六条
违反本法规定，特种设备生产、经营、使用单位有下列情形之一的，-责令限期改正；-逾期未改正的，-责令停止使用有关特种设备或者停产停业整顿，处一万元以上五万元以下罚款：
（一）未配备具有相应资格的特种设备安全管理人员、检测人员和作业人员的；
（二）使用未取得相应资格的人员从事特种设备安全管理、检测和作业的；
（三）未对特种设备安全管理人员、检测人员和作业人员进行安全教育和技能培训的。
第八十七条
违反本法规定，电梯、客运索道、大型游乐设施的运营使用单位有下列情形之一的，责令限期改正；逾期未改正的，责令停止使用有关特种设备或者停产停业整顿，处二万元以上十万元以下罚款：
（一）未设置特种设备安全管理机构或者配备专职的特种设备安全管理人员的；
（二）客运索道、大型游乐设施每日投入使用前，未进行试运行和例行安全检查，未对安全附件和安全保护装置进行检查确认的；
（三）未将电梯、客运索道、大型游乐设施的安全使用说明、安全注意事项和警示标志置于易于为乘客注意的显著位置的。
第八十八条
违反本法规定，未经许可，擅自从事电梯维护保养的，责令停止违法行为，处一万元以上十万元以下罚款；有违法所得的，没收违法所得。
电梯的维护保养单位未按照本法规定以及安全技术规范的要求，进行电梯维护保养的，依照前款规定处罚。
第八十九条
发生特种设备事故，有下列情形之一的，对单位处五万元以上二十万元以下罚款；对主要负责人处一万元以上五万元以下罚款；主要负责人属于国家工作人员的，并依法给予处分：
（一）发生特种设备事故时，不立即组织抢救或者在事故调查处理期间擅离职守或者逃匿的；
（二）对特种设备事故迟报、谎报或者瞒报的。
第九十条
发生事故，对负有责任的单位除要求其依法承担相应的赔偿等责任外，依照下列规定处以罚款：
（一）发生一般事故，处十万元以上二十万元以下罚款；
（二）发生较大事故，处二十万元以上五十万元以下罚款；
（三）发生重大事故，处五十万元以上二百万元以下罚款。
第九十一条
对事故发生负有责任的单位的主要负责人未依法履行职责或者负有领导责任的，依照下列规定处以罚款；属于国家工作人员的，并依法给予处分：
（一）发生一般事故，处上一年年收入百分之三十的罚款；
（二）发生较大事故，处上一年年收入百分之四十的罚款；
（三）发生重大事故，处上一年年收入百分之六十的罚款。
第九十二条
违反本法规定，特种设备安全管理人员、检测人员和作业人员不履行岗位职责，违反操作规程和有关安全规章制度，造成事故的，吊销相关人员的资格。
第九十三条
违反本法规定，特种设备检验、检测机构及其检验、检测人员有下列行为之一的，责令改正，对机构处五万元以上二十万元以下罚款，对直接负责的主管人员和其他直接责任人员处五千元以上五万元以下罚款；情节严重的，吊销机构资质和有关人员的资格：
（一）未经核准或者超出核准范围、使用未取得相应资格的人员从事检验、检测的；
（二）未按照安全技术规范的要求进行检验、检测的；
（三）出具虚假的检验、检测结果和鉴定结论或者检验、检测结果和鉴定结论严重失实的；
（四）发现特种设备存在严重事故隐患，未及时告知相关单位，并立即向负责特种设备安全监督管理的部门报告的；
（五）泄露检验、检测过程中知悉的商业秘密的；
（六）从事有关特种设备的生产、经营活动的；
（七）推荐或者监制、监销特种设备的；
（八）利用检验工作故意刁难相关单位的。
违反本法规定，特种设备检验、检测机构的检验、检测人员同时在两个以上检验、检测机构中执业的，处五千元以上五万元以下罚款；情节严重的，吊销其资格。
第九十四条
违反本法规定，负责特种设备安全监督管理的部门及其工作人员有下列行为之一的，由上级机关责令改正；对直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予处分：
（一）未依照法律、行政法规规定的条件、程序实施许可的；
（二）发现未经许可擅自从事特种设备的生产、使用或者检验、检测活动不予取缔或者不依法予以处理的；
（三）发现特种设备生产单位不再具备本法规定的条件而不吊销其许可证，或者发现特种设备生产、经营、使用违法行为不予查处的；
（四）发现特种设备检验、检测机构不再具备本法规定的条件而不撤销其核准，或者对其出具虚假的检验、检测结果和鉴定结论或者检验、检测结果和鉴定结论严重失实的行为不予查处的；
（五）发现违反本法规定和安全技术规范要求的行为或者特种设备存在事故隐患，不立即处理的；
（六）发现重大违法行为或者特种设备存在严重事故隐患，未及时向上级负责特种设备安全监督管理的部门报告，或者接到报告的负责特种设备安全监督管理的部门不立即处理的；
（七）要求已经依照本法规定在其他地方取得许可的特种设备生产单位重复取得许可，或者要求对已经依照本法规定在其他地方检验合格的特种设备重复进行检验的；
（八）推荐或者监制、监销特种设备的；
（九）泄露履行职责过程中知悉的商业秘密的；
（十）接到特种设备事故报告未立即向本级人民政府报告，并按照规定上报的；
（十一）迟报、漏报、谎报或者瞒报事故的；
（十二）妨碍事故救援或者事故调查处理的；
（十三）其他滥用职权、玩忽职守、徇私舞弊的行为。
第九十五条
违反本法规定，特种设备生产、经营、使用单位或者检验、检测机构拒不接受负责特种设备安全监督管理的部门依法实施的监督检查的，责令限期改正；逾期未改正的，责令停产停业整顿，处二万元以上二十万元以下罚款。
特种设备生产、经营、使用单位擅自动用、调换、转移、损毁被查封、扣押的特种设备或者其主要部件的，责令改正，处五万元以上二十万元以下罚款；情节严重的，吊销生产许可证，注销特种设备使用登记证书。
第九十六条
违反本法规定，被依法吊销许可证的，自吊销许可证之日起三年内，负责特种设备安全监督管理的部门不予受理其新的许可申请。
第九十七条
违反本法规定，造成人身、财产损害的，依法承担民事责任。
违反本法规定，应当承担民事赔偿责任和缴纳罚款、罚金，其财产不足以同时支付时，先承担民事赔偿责任。
第九十八条
违反本法规定，构成违反治安管理行为的，依法给予治安管理处罚；构成犯罪的，依法追究刑事责任。[2]
http://ke.baidu.com/link?url=_tzBd_zwSLCOqM8zZ6IJcnS7ei_WrBd_syhjy8uZm0ngVX-NdVNkXPjP-_qeX-7SeU_--ks-#1
2、为什么要用报告基因 直接mtt
运用Fluc报告基因成像、MTT法对MSCs的生物学活性进行定量评价，Westernblot和EI，IsA法检测MSCs的作用机制。结果MSCs稳定表达报告基因Fluc，其光学信号强度与细胞数量呈正相关（r^2=0．96）。缺氧复氧组MSCs生存活力较对照组显着下降；与缺氧复氧组比较，10^-8、10^-7Ghrelin组MSCs生存率和VEGF分泌水平明显升高，10^-8Ghrelin组磷酸化Akt表达明显升高（P〈0．05）。结论Ghrelin能够显着提高缺氧复氧后MSCs的存活能力，可能是MSCs的保护性因素。
3、MTT比色法测细胞活力的步骤
四唑盐（MTT）商品名为噻唑蓝
操作步骤
一、接种细胞
1、用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。
2、离心细胞悬液，使细胞沉积下来。用培养基重悬细胞，计数。
3、将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml，每个微滴定板可容纳20ml细胞重悬液。
4、用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入200μl细胞悬液，每孔加0.5×103-10×103 个细胞。
5、将200μl培养基加至第1列和第12列的8个孔中。第1列作读板议的空白对照。
6、将培养板放至塑料饭盒中，于37℃湿润环境中温育1-3天，等细胞进入指数生长期时可加入药物。
二、添加药物
1、用培养基将细胞毒性药物5倍系列稀释，共制备8个浓度。
2、对于贴壁生长的细胞，去除第2-11列各孔的培养基。
3、在第2列和第11列的8个孔中加入200μl新鲜配制的培养基，这些细胞作为对照。
4、在第3-10列的细胞中加入细胞毒性药物。每个药物浓度仅需4个孔，这样A-D行可用于第一种药物，E-H行用于第二种药物。
5、向每组4 孔中各加入200μl药物溶液。
6、将培养板放回塑料盒中，温育至确定时间。
三、生长期
1、在药物作用期结束时，去除所有含有细胞的孔中的培养基，加入200μl新鲜的培养基。
2、每日换液至2-3个PDTs[群体倍增时间]。
四、存活细胞数的估算
1、在生长期末，每孔中各加入200μl新鲜的培养基，在第1-11列所有孔中各加入50μl MTT。
2、用铝箔包裹培养板，于37℃湿润环境中温育4 h。
3、弃去孔中的培养基和MTT，在第1-11列所有孔中各加入200μl DMSO，以溶解残留的MTT-甲臜结晶。
4、在含有DMSO的各孔中加入甘氨酸缓冲液（每孔25μl）。
5、立即在570nm处记录吸光值。读板仪用第1 列中含培养基和MTT但不含细胞的各孔调零。
五、分析
以药物浓度为横坐标（X轴），吸光值为纵坐标（Y轴）绘制曲线图。第2列和第11列各孔中得出的平均吸光值作为对照吸光值，对照组吸光值减少一半时所需的药物浓度为IC50 浓度。
4、为什么MTT法检测药物对肿瘤细胞的抑制作用时，氧化性的药物要先用PBS洗细胞啊？
pbs本身就是缓冲液，不充的话ph中和不够，氧化时致变色
5、怎么计算mtt实验中ic50±sd
用寇氏改良法计算：
改良寇式法:lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)
Xm:lg 最大剂量
I:lg(最大剂量/相临剂量)
P:阳性反应率之和
Pm:最大阳性反应率
Pn:最小阳性反应率
举个例子：各组浓度0.1、0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001，稀释倍数为10，最大浓度为0.1，抑制率为0.95、 0.80、0.65、0.43、0.21，0.06。代入计算公式：
Pm=0.95
Pn=0.06
P=0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06=3.1
Xm=lg0.1=-1
lgI=lg0.1/0.01=1
lgIC50=-1-1*(3.1-(3-0.95-0.06)/4)=-3.6025
IC50=0.00025
6、4525MTT155P变速箱有同步器吗？
手动变速箱都是有同步器的，只有倒挡没有。望采纳
7、小牛血清的产品规格br什么意思
MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。 MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。 MTT 步骤如下： 1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔 1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul. 2:培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。 3：呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul. 继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。 4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。 注意事项：（1）选择适当得细胞接种浓度。（2）避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。（3）设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。其他试验步骤保持一致，最后比色以空白调零。 MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间，超出这个范围就不是直线关系， IC50是半抑制率，意思是抑制率50％的时候药物的浓度。把药品稀释成不同的浓度，然后计算各自的抑制率，以药品的浓度为横坐标，抑制率为纵坐标作图，然后得到50％抑制率时候的药品浓度，就是IC50。要点：药品2倍稀释，多做梯度，做点线图即可！ 举个例子：各组浓度0.1、0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001，稀释倍数为10，最大浓度为0.1，抑制率为0.95、 0.80、0.65、0.43、0.21，0.06。代入 计算公式： Pm=0.95 Pn=0.06 P=0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06=3.1 Xm=lg0.1=-1 lgI=lg0.1/0.01=1 lgIC50=-1-1*(3.1-(3-0.95-0.06)/4)=-3.6025 IC50=0.00025 有一个公式可供参考; lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4) Xm:lg 最大剂量 I:lg(最大剂量/相临剂量) P:阳性反应率之和 Pm:最大阳性反应率 Pn:最小阳性反应率 抑制率=1-加药组OD值/对照组OD值公式中的最大最小阳性反应率就是最大最小抑制率 例：用96孔板培养SMMC-7721肝癌做MTT测细胞活力,应该加多少1640培养基,多少MTT和DMSO合适根据书上说的加200ul1640,20ulMTT,150ulDMSO 加DMSO之前要尽量去掉培养液，便于DMSO溶解甲臜颗粒进行比色测定 一般每孔4000个细胞为宜，既细胞浓度在20000个/ml，MTT加20ul，作用四小时后洗掉上清液，注意不要将甲瓉洗掉，然后每孔加150ul DMSO，在脱色摇床上振荡10分钟，然后测吸光值。 一般要低于IC50，避免非调亡性杀伤的细胞太多，造成流式细胞仪检测碎片太多。我一般用1/2-1/3的IC50，作用时间为36h。一般肿瘤细胞系空白处理的调亡率应低于1%，用药后一般为5-10%（Annexin V），细胞周期的亚G0峰比较明显.
8、做MTT时用的三联液配方是SDS10g，异丁醇5ml，10M HCl 0.1ml，没有异丁醇的话，用异丙醇行吗？急！！！
应该明确实验前
1。选择适当浓度的细胞接种。的内贴壁细胞的96孔培养板中，在正常情况下，包括约105个细胞。但由于该地区有很大的不同，在不同的细胞附着在MTT法，预实验检测其贴壁率，倍增时间以及种子细胞的生长曲线的条件下，确定测试孔接种细胞数和温育时间，为了确保列车终止诱导的细胞过满。因此，在为了保证MTT晶体形成的细胞数成比例呈线性关系。否则，细胞的数目的敏感性降低太多，太少没有观察到差异。
2。集合中的药物浓度。请务必看到更多的文献，参考其他人的结果，然后给出一个比较大的范围内的第一次筛选。根据自己的筛选狭窄的浓度和时间范围再细筛的结果。记住！否则，可能会使用的时间和浓度的药物的有效浓度和时间。
3。设置的时间点。 OD值吗？在不同的时间点，输入Excel工作表中，并最终在不同时间点的抑制率变化的测量，绘制图形的变化，当曲线变得平坦（高原）的时间点，应使用最好时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制最明显的表现）。
4。孵化时间。 200UL 10 4-5电源增殖细胞的培养液中是难以维持68H，营养不足，细胞增殖阶段逐渐趋向G0期往往仍影响的结果，我们在48小时介质中被改变了。
5.MTT法只能测定相对细胞数和相对活力，不能绝对数量测定细胞。做MTT，尽量无菌操作，因为细菌也可以导致MTT比色OD值增加。
6。理论未必全是。要根据自己的实际情况进行调整。
实验对照孔加药孔孔应设置为零。零孔加培养基，MTT，二甲亚砜。控制井和计量孔必须加细胞培养基中，MTT法，二甲亚砜，和不同的是添??加到媒体控制井，而溶解该药物中加入不同浓度的药物的给药组。
8。避免血清干涉。含15％FBS培养基中培养的细胞中时，高血清物质会影响试验井的光吸收值。将测试的灵敏度测试增加背景。因此，它通常是优选的是小于10％胎牛血清的培养液中。着色后，尽量吸净培养孔残余的培养基。
实验步骤
贴壁细胞：
1。上收集的细胞数，调整浓度的细胞悬浮液加入到每个孔100ul铺板所测试的细胞调节至密度为1000-10000孔（边缘？孔填充用无菌PBS中）。
2.5％CO2，37℃孵育，直到细胞单层覆盖的底部的孔（96 - 孔平底板），添加药物的浓度梯度，在原则上，细胞的粘附给药或两小时或半天的时间，但我们常在前一天下午铺板第二天早上剂量。一般为5-7梯度，每孔品100μl，位于3-5井。建议设5，否则难以体现
3.5％的CO2，并在37°C孵育16-48小时，倒置显微镜下观察到的真实情况。
4。添加到每个的阱20ulMTT溶液（5mg/mL的，或0.5％的MTT），并培养4小时。用MTT反应的药物可以先离心丢弃培养基，用PBS仔细洗涤2-3次，然后添加到培养基中含有的MTT。
5。终止的文化，并认真吸收孔培养基。
6每孔加入150ul二甲亚砜，设置振动筛在低速振荡10分钟的晶体完全溶解。在OD490nm的酶联免疫吸附检测器测量的每个孔的吸光值。
7。同时置零孔（培养基，MTT，二甲亚砜），对照孔（细胞，相同浓度的药物溶出介质，培养基，MTT法，二甲亚砜）
悬浮细胞：
1）收集对数生长期细胞，调节细胞悬液浓度为1×106互补序列①1640（无血清）介质40ul;②加放线菌素D（有毒）10UL稀释培养基升的？克/毫升，需要预先测试，以找到最佳稀释,1:10-1：20）;③需要检测对象10UL;④细胞悬浮液50μl（即，5×104cell /孔）的100ul加入96 - 孔板（边缘？孔填充用无菌水）。建立控制每块板（加100（原液100 1640）。
2）在37℃，5％CO2孵育16-48小时，并在倒置显微镜下观察。
3）每孔加入10微升MTT溶液（5毫克/毫升，或0.5％的MTT），并培养4 h。 （悬浮细胞推荐WST-1，培养4小时后可以直接跳到步骤4），直接酶联免疫吸附测定的OD570nm 630nm的校准测量每孔的吸光度值）
4）离心（ 1000转x10min）仔细吸掉上清液，每孔加入100微升二甲亚砜中，设置摇动器在低速振荡10分钟，完全溶解的结晶。在酶联免疫吸附测定OD570nm（630nm的校准）测量的吸光度值？为每个孔。
5）设置零孔（培养基，MTT，二甲基亚砜）对照孔（细胞，相同浓度的药物溶出介质中，在培养基中，MTT法，二甲亚砜），每个设置的3个井。
MTT准备
MTT通常情况下，最好使用4℃避光过滤器后两周内，或配制成20,10,5保存在 - 20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量包装，用黑袋或黑纸，铝箔及包装暗，避免分解。我一般都把MTT粉包装EP管，现有的服务直接添加到培养板，不需要一下子有这么多的，特别是当它绝对MTT变为灰绿色不能重复使用。
MTT致癌性，使用时要小心的那种透明薄膜手套的最佳条件。被称为MTT需要无菌，MTT细菌，是非常敏感的;到96孔板一个PBS 黑暗中额外的时间并不重要，毕竟，时间是短暂的，你不用担心时，你可以把关了灯手术台。
制备MTT;溶解，还配备用盐水在60℃水浴中进行增溶。
PBS配方：
氯化钠8克
KCL0.2克
磷酸氢二钠1.44克
> KH2PO40.24克
调pH值7.4
给定容量1L
细胞接种（平台）
细胞30代不要使用，因为状态并不好，培养板中使用一个很好的（最好是进口板），坏板或重复使用的板仅做预实验。
最佳接种密度计算出来的按照预实验接种后，细胞生长抑制率（或增值率），因为关于OD值吗？细胞密度10000/ml的测量时间间隔呈直线关系最好的，最可靠的结果。如果店铺是太稀细胞的杀伤不会很明显，可能都过于密集的细胞凋亡，细胞生长速度过快的营养是不够的，最后导致死亡。过密或过少的细胞，细胞增殖将是过快或过慢，差线性关系，其增值率。因此，MTT细胞的密度使用更10000/ml的，100ul /孔。
细胞密度的特点，不同的细胞，如果细胞刺激作用的药物，那么细胞浓度为小点，如果你这样做对细胞有抑制作用的药物，然后取更大一点细胞浓度，因此，与对照的差异，该数据是更好。悬浮细胞的各孔中的细胞数达到105，贴壁细胞103-104。
其他的声音：
第一个单元格播种密度不能太一般每孔1000就足够了，我想，宁少勿多。特别是对肿瘤细胞。 10000 /孔是太高，所以，即使药物，MTT法不能表达的最佳点板浓度在4000-5000 /孔，太少的SD值。
2.MTT本身是一个相当厚的实验约10％，增殖率的波动也就不足为奇了。特别是新手，有20％的波动也是常见的，因此它可能是由于技术原因，特别是种板技术必须过关的。
我MTT法检测肿瘤细胞，这些细胞长一开始我100000/ML浓度的疫苗接种，结果细胞长的太满，结果梯度也没有线性关系。调整后的浓度使用了40000?80000/ML浓度MTT法，做的好点的是60000?70000/ML组的浓度。 40000 / M的基团的浓度，是因为这些细胞是以下，药物作用或只是没有一个有良好的线性关系的梯度，根据细胞生长速度，以及药物的特性（的时间依赖关系，并的浓度依赖性的药物），以确定培养的时间是48小时或72小时。
一定要注意避免细胞的细胞悬液混合沉淀下来，在每个孔中的细胞数的范围，收到了一些必要再混合均匀。移液管操作要熟练，避免人为错误。虽然更准确比移液管移液管，但如果操作不熟悉，CV将在8％左右。此外，吹了太多的时间，也影响细胞活力。因此，熟练的鞋，尽快在黑板上。
让我谈谈我的一点经验：
1。狗新花样不能太多悬挂的总的3-4倍，吸液管液量可能会比较容易混合。 10毫升优选地安装的悬浮液中3?4毫升：该悬浮液的离心管太少容易吹气泡，悬浮液的特定也是不容易被风吹到单细胞悬浮液。 。 。
移液管移液管最好在1毫升左右：吸入过量的液体，看起来液管余下的数，如吹打容易起泡吸管吸了很多量过小，强度移液是不够的，将移液不均匀。如果吸液量1毫升稻草，总液量，在约5ml的好处
吸气时，悬挂在底部，然后抬起，但吹了下来，不留液体的表面，否则容易一拳砸的气泡。
4。狗新花样，你可以数100吹打均匀（前约30-50倍的吹打加细胞基本上差不多均匀。加细胞分别接种2孔反复移液管移液3次3次后，他们把他们的枪挂在5秒内的细胞悬液，然后划出一定的速度悬浮液）。
用吸头，每孔加入到细胞中不要太猛了，否则你会发现细胞在想要添加的移液管尖中的孔的底部的势头由于收集了一堆，一般在这种不均匀的分散液接触抑制周围的孔的底部的中心，影响细胞的生长。因此，速度不能太快，也不能太慢。我习惯了增加每块板水平握手后，左一个右其次，移动的答复中，细胞可以均匀地分散这些。 （铺板技术是MTT法的关键，也是基础，我们必须练好，一旦学生振荡器和混合与旋涡细胞，最后一个单元格都死了，使用这种方法是不建议混合细胞
BR />加入MTT
个人认为MTT最关键的是你的手机号码和MTT适当的比例补充说，真正起作用的，和具体的细胞数量之间的关系和真正的工作真的不好确定，我认为MTT支付超过最低量好一些
MTT各种报告的MTT，一般是过度10UL不够的，如果你不使用96孔板， MTT按照10％的比例超过100ul培养基地。，加入MTT振荡让MTT和媒介组合，但这个应该不大。
有个别的孔，如立即加入MTT变蓝黑色，污染的可能性是很大的，另一个在前面的MTT摊薄细胞仍然需要适当的方法来过滤消毒。可以加MTT前显微镜下才能看到，如果有一个孔染菌，染菌孔附近往往是 />
血清白蛋白对大多数的药物的组合的效果，它是可能的分开的药物和MTT一起看到的将反应MTT法不能反应，不必除去水培的含有药物的溶液，直接加。
上层清液
争：
1加DMSO液体吸掉，但培养液，紫色晶体吸收之前，该第一的平板离心机，2000转，5分钟，然后吸掉上清液（如果是悬浮细胞，此方法建议在2500rpm 10分钟离心分离的悬浮细胞，并做MTT的最好的圆底96孔板中的96 - 孔板，注意不要结晶颗粒吸掉上层清液后，建议每孔吸出150-160ul）
2。每次我都会MTT和孵育4小时，然后离心1000G 5分钟枪小心吸去上清液，或将一小部分蓝水晶吸出，所以还是建议翻转颠倒了！
另外，我们可以直接在板翻转颠倒（垫层滤纸）2-3倍的方式“吸”是不容易使细胞脱离出来。轻拍，或倾斜一点帮助吸液管，紫色晶体几乎没有可见的列，但你自己的细胞贴壁的前提下，比较监狱，半贴壁生长的细胞容易脱落。药物作用时间长，阴性对照组的细胞可能是由于过多离开MTT加入后形成的结晶漂起来，所以不能直接排放
MTT，这一步必须小心，不要使用贴在墙上倒立的方式，因为是不强大的单元格将被倒掉，从而影响OD值吗？悬浮细胞，不拍打上清液。 ，离心后，不拍打这种方法杀了人。
5。加入MTT反应完成后3-4h后，在96孔板的作用是从孵化器中删除要轻柔，避免振荡结晶，它溜了。您可以尝试在96孔板倾斜30度角，然后的枪口慢慢吸一些细胞排球吸，有些人会用移液器吸头吸病人，枪口下的强度和方向，以确保每个孔是不要让吸头接触到孔??底，一次后倾斜孔板，不反复倾斜的平直，这样也会使晶体脱落。
6。移液与医用注射器登上教训针对角线的经验教训沿着培养基MTT的墙壁，好像我1毫升针小心地吸可靠的比其他的方法，一般不吸紫色晶体。
避免上层清液和改进的方法
一般容易发现，即使贴壁细胞在96孔板离心式离心机，的MTT溶解在DMSO，结果是没有好，不能得到预期的结果重复性差。
解决方法1：以下文献方法：周建军等，评价抗癌物质活性的改良MTT法，中国期刊的药品，1993,24（10）:455-457 BR />
具体方法如下：
三溶解液：10％SDS，溶于蒸馏水中，5％异0.012mol/LHCL的。
三联溶解解决方案：SDS10g，异丁醇5毫升的10M盐酸0.1毫升双蒸水溶解配成100mL溶液
操作：细胞悬浮在培养板中，加一定密度的解决方案，90ul /孔;管理，然后（悬浮细胞）在同一时间或4h后（贴壁细胞）通过加入不同浓度的药物10UL /空穴，位于三井。另外，每块板另一个没有零孔（仅添加到培养基中，无细胞和药物）培养2d后加入MTT溶液20ul /孔，和文化继续4小时，然后加入上述的三重液体品100μl/孔，在37℃静置过夜，用酶测定的标准仪器孔A570值？
优点：简化操作，提高了可靠性。
解决方法2：日本同事有一个新的试剂CCK-8试剂，CCK -8试剂可用于简单和准确的细胞的增殖和毒性分析其基本原理是：含有的试剂WST-8 [化学名称：2 - （2 - 甲氧基 - 4 - 硝基苯基） - 3 - （4 - 硝基苯基）-5 - （2,4 - 二磺酸苯基）-2H-四唑单钠盐]，这在电子载体1 - 甲氧基-5 - 甲基硫酸盐吩嗪二甲基（1 - 甲氧基PMS）线粒体脱氢酶的作用降低的高度水溶性的黄色染料（甲臜染料）A的产生与活细胞的数目的数目成正比，所以此功能可以用于直接的细胞增殖和毒性分析CCK-8试剂已预先装入的细胞增殖和毒性分析所需的组件，未经稀释，然后缓冲区或中等，没有任何放射性同位素和有机溶剂的CCK-8试剂。因此，没有特别的技能，你可以让每一个用户准确，可重复的实验结果。
★优势 / a>
1，简单的一个步骤的结果
2，节省时间，不需要预制开放
3，安全没有必要放射性同位素，有机溶剂
>
4，迅速消除溶解除沉操作
5，高灵敏度，灵敏度比MTT
6，重复性几个不错的步骤，无损，准确
是比较昂贵的，如果充分的资金，这是件好事。
★细胞增殖实验使用：
1，接种细胞悬液100μL96孔板，预先放置在37℃，在5％CO 2培养箱培养。
2在每个孔中引入CCK-8试剂10μl的。
培养板在孵化器1-4个小时。
4，测定吸光度在450nm波长为600nm或600nm的波长参考。
解决方法3：使用MTS / a>
解决方案4：
加入DMSO
放弃孔内液体，最好不要更换相同数量的实验DMSO加入DMSO清洁，直接加入到DMSO首先，除去上清液，沉淀将难溶于培养基颜色检测测量时，将影响最终的结果，但前提是不能使细胞与吸掉，因为错误是远大于培养基中没有放弃一个干净的错误，所以，以确保细胞的前提下，尽可能不虹??吸的培养液虹吸如果培养溶液不是一次性清洁空白孔应留下的培养液相同量的，所以检测时的培养液的影响，可以除去尽可能多的DMSO的量为100ul或150ul
1。添加的DMSO后使用振荡器轻轻振摇5 - 10分钟时间控制密切越好，放置时间长了会影响结果，该值将过大，其结果是不可靠的。
2。后加入DMSO排球反复抽吸溶，尽快解散后检测。实验孔是小的，它建议，这种方法，因为其更好的效果比振荡溶解。
3，或者在37度把培养箱中培养15分钟，溶解结晶
振荡，让甲溶解，以便更好地测量的吸光度振荡96孔板具体地说，振荡器，目的：凿孔泡沫。气泡的存在下，由于其光的反射和折射效果（原则读者是通过特定波长的测量样品中的特定物质样品的吸光度推测）的浓度，会导致结果抵消了测定OD值吗？
至于测定给出的波长是不同的颜色溶液，DMSO，溶解紫（红）色，490nm处的最大吸收值，而在ATCC的MTT试剂盒使用的是不DMSO，它的测定波长为570（在ELISA实验，OPD为底物测得的波长为492，选择的TMB底物溶液是450）; SDS和酸化异丙醇选择570nm的，并建议作为参照波长等于655nm。
DMSO溶解经过10分钟内测，越放颜色越深，SDS溶解液测定吸光值，其值在三天内保持不变。
细胞密度太大测定吸光度细胞密度过大，吸光率也小;另一个细胞状态的关系，细胞状态不好的吸光度值低;少量的细胞，或短的时间内培养的OD值会比较低。每个洞之间的差异尤为明显说明可能存在的污染，空白孔的OD值过高，很可能是细菌的污染。
井直接OD值差别一般应在0.1-0.15不同的考虑：1。种子细胞不统一或疫苗接种时，应保证每一个孔一般为1000-10000元以及细胞细胞计数，加入细胞悬液培养基中定容，轻轻吹打几次，使细胞均匀分布的，因此，这是更好的不是直接加入预定体积的细胞悬浮液，接种疫苗应加入含有血清的介质2。粘附时间:18-24小时，如果没有，而不是悬浮细胞可虹吸
/>一般，为了实验的精度，和各浓度可提供5-6井可以最终的统计，可以除去的最大值和最小值，或荒谬的值？其特征在于，所述数据被除去，这些离谱数字细胞污染，是否在培养过程中细胞的死亡，文化，蒸发过度的附加组件的MTT溶液是不准确的，在5％二氧化碳培养箱中培养，在37°C，无论是时间常数（1-4小时）有密切的关系，当然的OD值的测定仪器状态是正常的，是非常重要的！（一般热身20分钟）。
MTT吸光度误差在0.2至0.8之间。分析化学相关的兰伯特Beer定律，朗伯 - 比尔定律骨密度分析偏差，通常在标准曲线的情况下是不是线性的，尤其是吸光物质的浓度较高时，可以清楚地看出通过原点到浓度轴弯曲的现象（吸光度轴弯曲）情况称为朗伯 - 比尔定律的偏离定量的曲线的弯曲部，将产生较大的误差。骨密度分析仪测量不准确的误差的主要来源。光度计具有一定程度的测量误差。这些错误可以是来自于光源不稳定，变化的实验条件下偶然不准确的读数。
光度计透射的标尺刻度是均匀的。吸光度标尺刻度不均匀。波动对传动比一定值时，读出的相同的工具;吸光度读数波动不再是一个固定的值。吸收更大的错误读数波动而引起的透光率或大或小，浓度测量误差大，更大的吸光度，最好的光度当选的吸光度读数不下降在中间规模的要被测量的透射率T在15％至65％的范围内的溶液，或在两端时的吸光度，A是在0.2?0.8之间，为了确保较小的相对误差的甲= 0.434（或透射比T = 36.8％），最小相对误差的测量。
其他的声音：
最好的570nm波长过滤器，MTT吸光度测量。在此波长的峰值，在其他词语具有大致490nm处与其他波长的高灵敏度，但我的经验的灵敏度降低了一半。
2 BIO-TEK，我们使用ELx800，一般值2是可靠的，如果该值是要考虑它是否是一个错误在实验过程中，我已经看到了花园的一些职位OD值可能与活细胞数在0.2-1.2范围内具有良好的线性关系，复孔太大的区别，但OD值在0.3-0.9范围内的好，如果你的OD值？此范围之外的，做实验，细胞计数可能不适合，你应该调整细胞的数量。边缘效应
/>
孔一般只有空白，非培养细胞，或这四条线中的数据将是高或低的由圆圈包围的96孔板，96孔板的培养箱中因为缺乏湿度，和孵化器具有一定的温度，由于温度梯度，使得边缘的孔蒸发更快，导致的各个组成部分中的培养基中的浓度增加，导致这种现象的不同的细胞状态，它是必要的，以保证湿度的培养箱中，并以降低的频率和持续时间的开关培养箱。方法：所有周围的圆形孔的孔板，“否”，的影响是非常大的，最外面的圆必须添加水，PBS或培养液中，只要你能防止水分蒸发。
如何计算的IC50后的寇方法：
（1）lgIC50 = XM-I（P- （3-PM-PN）/ 4）
XM：LG的最大剂量
I：LG（最大剂量/相邻剂量）
P ：正反应速率和
PM：最大的阳性率
PN：最小阳性率
例如：各组浓度0.1,0.01， 0.001,0.0001,0.00001,0.000001，稀释10倍，与最大浓度为0.1的抑制率分别为0.95，0.80，0.65,0.43,0.21,0.06到
计算公式：
PM =在
Pn的0.95
= 0.06
P = 0.95 +0.80 +0.65 +0.43 +0.21 +0.06 = 3.1
XM = lg0.1 = -1
LGI = lg0.1/0.01 = 1
lgIC50 = -1-1 *（3.1-（3-0.95- 0.06）/ 4）= -3.6025
IC50 = 0.00025
（2）Bliss法：自己的检查书
（3）IC50计算软件，请参阅下文附件
（4），使用EXCEL趋势线寻求IC50约LD50的方法与此类似！
（5）网上寻求IC50或EC50： HREF =“htt??p://chiryo.phar.nagoya-cu.ac.jp/javastat/JavaStat-j.htm”目标=“_blank”> http://chiryo.phar.nagoya-cu.ac.jp/javastat / JavaStat-j.htm
结果统计
数值应用SPSS软件进行方差分析，P <0.05显著差异（P <0.01）的差异是非常显著的时间为横轴，吸光度值上的垂直轴绘制以x±s行细胞生物学，具体评价式IC50的细胞死亡的抑制率％= OD控制基团-OD实验组/ OD控制组
可以做excel表格两两比较，T-测试，你可以参考你的数据应该是指多个样本T检验，方差分析软件SPSS或SAS。
/>口复用：
板使用一个很好的（最好是进口板），坏板或重用板仅做预实验。一般贴壁细胞生长的重用培养板效果不是很好，因为培养板表面涂了一层的贴壁细胞的物质，在生产，可能会失去清洁后悬挂或半悬浮培养细胞的生长也建议不要使用太多次，甚至进口的板子，次数不超过3次，最终测量值的1/3，什么最好的价值。
板块强烈建议不要重复使用：泡沫酸，但泡完酸板是非常有利于细胞的生长，会有不良帖子壁，细胞生长缓慢，等.2，非常彻底的消毒有关的董事会，如果存在的话，那么运行的风险.3重复使用洗板。不干净，在训练过程中容易出现杂质
再利用的做法：
洗涤2％的NaOH浸泡4小时，然后浸泡4小时1％盐酸，水为15倍，用蒸馏水洗涤三次，干燥，UV照射过夜（UV多于两个小时消毒罐）
实践：
气泡酸2-4小时，老师让我们做了四个多小时（普通玻璃仪器过夜）。捞出，冲洗，干燥，紫外线照射过夜。估计收集在一起与其他钴60辐照灭菌。
/>做法：
做MTT用水和清洁剂的水冲洗板，然后用洗衣粉水（注意最好让清洁剂的第一打开）几个小时。，冲洗
9、MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒有哪些注意事项？
M T T 可以被线粒体内的些脱氢酶还原生结晶状的深紫色产物f o r m a Z a n。在特定溶训存在的情况下，可以被完全溶解。然后通过琚杯仪可以测定490n m波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高:细胞毒性越大，则吸光度越低使用说明:
1.收集对数期细胞，调整细胞悬浮液浓度，分于96孔构，每孔180u1，3000一10000细胞/孔。
2.置 37'C、 5%C O2 温箱培养使细胞贴壁，培养 6-24 小时。
3.加入适当浓度的受试化合物，继续培养适当时间。
4.小心吸去上清，加入90u1 新鲜培养液，再加入 10u1 M T T溶液，继续培养 4 H。
5.然后吸掉上清，每孔加入 110u1 F o r m a z a n 溶液，置摇床上低速振荡 10 m i n，使结晶物充分溶解。在酶联免疫柃测仪 490 n m 处测量各孔的吸光值。
6.同时设置调零孔(培养基、M TT、 F o r m a z a n溶解液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、M T T、F orm az a n溶解液)，每组设定 3 复孔。
注意事项
1.由于使用 96 孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加 P B S，水或培养液，另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方，缓解蒸发
2.M T T 溶液方黄色需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。F o r m az a n 溶解液结冻或产生沉淀时可以 37'C 水溶孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
相关试剂:
12100 D M E M(H)
31800 R P Ml M Edi u m 1640
24800 通用细胞冻存液 S o1a r b i o
P1020 1x P B S ， P H7. 2-7. 4 ， 0.01M
H1020 H a n K s ， 含钙镁， 含酚红
T1300胰蛋白酶一 ED T A 消化液 (0.25%)不含酚红
H1095 1M H e p e s 溶液 (P H7.2-7. 4，无菌)
P1400 青链霉素混合液(100x)
10、西域的建筑是什么样的？
中国穆斯林在建筑学方面的贡献，主要表现在两方面：一是从唐迄今各族穆斯林的宗教性建筑；二是元代穆斯林亦黑迭儿丁对大都（北京）的最早建筑设计。
(一)宗教性建筑
建筑活动是人类的基本社会实践之一，也是人类文化的一个重要组成部分。伊斯兰教作为一种宗教信仰，影响着中国各族穆斯林的政治、经济、思想、文化及生活等各个方面，因此也必然对清真寺、教经堂、道堂、穆斯林陵园等各种宗教建筑的发展给予深刻的影响，使之呈现出鲜明的民族特点和艺术规律。
在这里，我们无须重复第二章关于中国清真寺的建筑风格及其特点。需要强调的是，数以万计的清真寺，包括其他种类伊斯兰教建筑，各类伊斯兰教建筑，无论其风格如何，都是千百年来中国各族穆斯林辛勤劳动和智慧的结晶；它们在建筑设计、构图原则、工程技术、装饰艺术等各方面的辉煌成就，都是各族穆斯林的伟大历史创造，也是各族穆斯林与其他兄弟民族（特别是汉族）人民互相学习、共同劳动的结果。中国伊斯兰教建筑，以其独具的伊斯兰风格和特色，丰富了中国建筑文化宝库，对中国传统建筑曾发生过一定的影响，促进了中国木结构建筑及砧石建筑的发展。同时，中国的伊斯兰教建筑，又以其鲜明的中国风格和特色，与阿拉伯及其他国家的伊斯兰教建筑有着很大区别，形成中国伊斯兰教建筑的特有风貌。中国的穆斯林没有简单地搬用阿拉伯或中国的建筑文化概念，而是将这两种不同的文化融汇贯通，使之成为互相补充的因素，创造聘座座全新的中国伊斯兰教建筑，从而对世界伊斯兰建筑宝库，对整个人类文化，提供了富有创造性智慧的贡献。