骨髓涂片的制作的实验器材

1、人血涂片的制作方法

血涂片-实验材料、试剂
3.1实验材料：医用采血针、酒精棉球、载玻片、血推片、消毒牙签
3.2实验试剂：瑞氏染液、抗B血清、抗A血清、生理盐水、蒸馏水
3.3仪器设备：Motic光学显微镜
血涂片-实验步骤 听语音
4.1ABO血型鉴定
4.1.1取一块清洁玻片，用记号笔标上记号。
4.1.2用小滴管吸A型标准血清（抗B）一滴加入左侧，用另一小滴管吸B型标准血清（抗A）一滴加入右侧
4.1.3以穿刺法自左手无名指指尖取血，在玻片的每侧各放入一小滴血，用牙签搅拌，使每侧抗血清和血液混和。每边用一支牙签，切勿混用。
4.1.4静置室温下10—15min后，观察有无凝集现象，并据此判断血型。
4.2血涂片的制作及血细胞观察
4.2.1取末捎血一滴置于玻片的一端,左手持载玻片,右手以边缘平滑的推片的一端从血滴前方后移接触血滴，血滴即沿推片散开。然后便推片与载片夹角保持30-45度平稳地向前移动,载片上保留下一薄层血膜
4.2.2血涂片制成后可手持玻片在空气中挥动,使血膜迅速干燥,以免血细胞皱缩.
4.2.3用蜡笔在血膜两侧划线,以防染液溢出,然后将血膜平放在染色架上.加瑞氏染液2-3滴,使覆盖整个血膜,固定0.5-1.0分钟.滴加等量或稍多的新鲜蒸馏水,与染料混匀染色5-10分钟.
4.2.4用清水冲去染液,待自然干燥后或用吸水纸吸干,即可置血涂片于显微镜下进行镜检。
4.2.5白细胞分类计数。
选择涂片的体尾交界处染色良好的区域,在油镜下计数100个红细胞,按其形态特征进行分类计数,求出各类细胞所占比值。

2、如何用显微镜检验血液，制作涂片如何利用一台生物显微

如何用显微镜检验血液，制作涂片如何利用一台生物显微
用显微镜观察人血涂片的步骤：
1．右手握住镜臂，左手托住镜座。
2．把显微镜放在实验台上，略偏左（显微镜放在距实验台边缘7厘米左右
处）。安装好目镜和物镜。
3．转动转换器，使低倍物镜对准通光孔(物镜的前端与载物台要保持2厘
米的距离)。
4．把一个较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内(右眼睁开，便于以后同时画图)。转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内。通过目镜，可以看到白亮的视野。
5．把所要观察的玻片标本（也可以用印有“6”字的薄纸片制成）放在载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。
6．转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（眼睛看着物镜，以免物镜碰到玻片标本）。
7．左眼向目镜内看，同时反方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到看清物像为止。再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。
8.移动装片，使要观察的目标移到视野中央。
9.转运转换器，换用高倍镜。
10.调节细准焦螺旋，直到看到清晰的物像。

3、怎么制作血涂片？

血常规是医院常作的检查项目，但是由于大部分的医院用的都是三分类的血球仪（五分类血球仪价格太高），在分析上存在一定的缺陷，而血涂片则能在一定程度上很好的补偿，使得三分类的血球仪也能起到五分类的效果。而且血涂片的作用还不仅于此，它还能更直观的放映细胞的形态，以及血液的一种状态。现在就血涂片的制作和应用做一个介绍。

血涂片的制作：

血涂片的制作方法很多，但需要的材料也都是一样的，载玻片和（或）盖玻片。现在介绍一种我们医院常用的涂片方法：

1、首先左手持一载玻片，将采到的血（做血常规剩下的血）滴一滴到载玻片一端：

血涂片

2、右手持一盖玻片作为推片，成30-45度角于血滴前方靠近血滴

血涂片

3、右手移动盖玻片使其一端与血液接触

血涂片

4、右手持盖玻片往前推动，速度不能太慢，保证血液均匀的被推开

血涂片

5、做好的血涂片

血涂片

5、血涂片做好后需要风干，之后就可以进行染色，尽管每个医院所用染色液可能不一样，但基本的方法都一致，也可以根据染色液的说明进行具体操作，我们医院用的是diff-quick染液。

染好的片子就需要在显微镜下观察，一般我们会从低倍镜开始观察，再逐次转换为高倍镜甚至油镜。

。
细胞分类计数器

一般情况下，我们会在显微镜下找到一个合适的视野开始计数，按照一定的方向顺序来数白细胞，而这个视野的选着会很重要，在做血涂片的时候血涂片上通常会有三条带，中间的那一条带就是我们观察的区域，镜下会显示细胞既不重叠也不太稀疏。然后我们会把数的100个白细胞记录下来并分类，并分别记下各类细胞所占的比例。

细胞分类计数器

（细胞分类计数器）

通过这样的方法，我们就可以得到白细胞下各个种类的比例，结合血常规的白细胞数目就可以得到一个五分类的项目，这对于分析动物的身体状况更加的全面和科学。如上图的结果是：嗜中性粒细胞百分比：70%（分叶：57%，杆状：13%）；淋巴性细胞百分比：25%；单核细胞百分比：3%；嗜酸性粒细胞百分比：2%；嗜碱性粒细胞百分比：0。

再简单举例说一下血涂片在临床上的应用，也是结合血常规的分析。如下图为一只犬的血常规结果：

从结果上看，RBC(红细胞)下降，HGB(血红蛋白)下降，HCT（红细胞压积）下降。很明显的可以判定为贫血。但是贫血也分很多种的，到底是否为再生性，又或者是否是出血或溶血造成的。然后根据血涂片可以知道：

从该血涂片我们可以看到，红细胞中间淡然区明显扩大，说明了这是正红细胞低色素性贫血，也就是由于缺铁性贫血，需要补充铁元素，增强营养。一方面我们知道动物的具体情况，可以针对性的帮助解决问题。

当然，血涂片在临床上的作用不仅仅如此，我们不仅可以用来来计数分类白细胞，还可以观察红细胞的形态来判断如果出现异性红细胞的原因，白细胞形态异常的原因，还可以看到血液寄生虫如：巴贝斯焦虫，血吸虫的微丝蚴。而且对于血常规仪器还可以起到一种验证的作用，就是说如果血常规的结果与你在显微镜下看到的结果出入较大的时候，如果你保证你血涂片的制作和观察都没问题的话，就要怀疑机器的判读有问题了。比喻抽血过程比较慢，导致血凝的出现而使得机器读书的血小板极低，以及由于猫的血小板和红细胞体积较近而出现的判读等都可以用血涂片来纠正和验证。

4、制备小鼠骨髓染色体标本过程中有哪几个主要步骤影响制片结果

在制备小鼠骨髓细胞染色体标本过程中以下几个步骤需要注意：

提前3-4小时候注射秋水仙素，时间太长或者太短都会影响染色体中期的数目和形态。

在低渗过程中时间和吹打都很重要，低渗过度染色体膨胀，染色后肥肥的，低渗时间不过染色后染色体颜色很深看不出条带。

滴片，如果是教学的实验,要求玻片是冰的,而且要倾斜，滴的高度一般在25-30CM，滴完要过酒精灯，让固定液蒸发。滴的数量不要太多否则会重叠.如果是医院里的染色体制片有专门的滴片机。

小鼠骨髓细胞染色体标本制作：

原理：

由于小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析；

试剂、试剂盒：秋水仙素、姬姆萨染液、固定液、低渗液、生理盐水；

仪器、耗材：天平、离心机、恒温培养箱、显微镜；

实验步骤

一、材料和方法

1.  材料：小白鼠。

2.  设备：天平，离心机，恒温培养箱，显微镜。

3.  药品：秋水仙素，姬姆萨染液，固定液，低渗液，生理盐水。

二、步骤

秋水仙素处理--取骨髓--低渗处理--固定--离心--再固定--再离心--滴片--染色--镜检--封片。

5、血涂片的血涂片-实验步骤

4.1ABO血型鉴定
4.1.1取一块清洁玻片，用记号笔标上记号。
4.1.2用小滴管吸A型标准血清（抗B）一滴加入左侧，用另一小滴管吸B型标准血清（抗A）一滴加入右侧
4.1.3以穿刺法自左手无名指指尖取血，在玻片的每侧各放入一小滴血，用牙签搅拌，使每侧抗血清和血液混和。每边用一支牙签，切勿混用。
4.1.4静置室温下10—15min后，观察有无凝集现象，并据此判断血型。
4.2血涂片的制作及血细胞观察
4.2.1取末捎血一滴置于玻片的一端,左手持载玻片,右手以边缘平滑的推片的一端从血滴前方后移接触血滴，血滴即沿推片散开。然后便推片与载片夹角保持30-45度平稳地向前移动,载片上保留下一薄层血膜
4.2.2血涂片制成后可手持玻片在空气中挥动,使血膜迅速干燥,以免血细胞皱缩.
4.2.3用蜡笔在血膜两侧划线,以防染液溢出,然后将血膜平放在染色架上.加瑞氏染液2-3滴,使覆盖整个血膜,固定0.5-1.0分钟.滴加等量或稍多的新鲜蒸馏水,与染料混匀染色5-10分钟.
4.2.4用清水冲去染液,待自然干燥后或用吸水纸吸干,即可置血涂片于显微镜下进行镜检。
4.2.5白细胞分类计数。
选择涂片的体尾交界处染色良好的区域,在油镜下计数100个红细胞,按其形态特征进行分类计数,求出各类细胞所占比值。
1.瑞氏染液:瑞氏染料1g加甲醇(AR)600ML。将瑞氏染料放在清洁干燥乳钵中,加少量甲醇,充分研磨使染料溶解.将已完全溶解的部分倒入棕色试剂瓶中,未溶解部分再加少量甲醇研磨,直至染料完全溶解于甲醇为止。新配制的染料偏碱,须在室温和37℃下一定时间待染料成熟,主要美蓝逐渐增多为天青B后才能使用.贮存时间越久染色效果越好,因此,Deamgilliland等采用吸光度比值(rA)作为瑞氏染料的质量规格.rA测定方法如下:取瑞氏染液15-25ul(视染液浓度而定)加甲醇10ml稀释,混匀后以甲醇为空白管分别以波长650nm,525nm比色,rA=A650/A525。因为美蓝吸收峰为波长650nm,伊红吸收峰波长为525nm,天青B吸收峰也为650nm,但吸光度A约为美蓝的一半.所以新配制染料的RA接近2,随着美蓝逐渐氧化为天青B,RA也相应下降,RA下降达1.3±0.1即可使用.瑞氏染料在贮存过程中必须塞严,以防甲醇挥发和氧化为甲酸.有人主张配方中加入30ml甘油,防止甲酸挥发,并可使细胞染色清晰.甲醇必须纯净,如甲醇中丙酮含量过多,染色偏酸,使细胞着色不良。磷酸盐缓冲液(PH6.4-6.8)：磷酸二氢钾0.3g加磷酸氢二钠0.2g再加蒸馏水至1000ml,配制成磷酸盐缓冲液调整PH,如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。

6、小鼠骨髓细胞染色实验中有哪些材料可用作制备染色标本,其基本特性是什么

在明视野下，若能看清的话就不要染色了。因为在无法观测清楚时，才会染色。通常染色剂会影响微生物的活性，更多的是使细胞死亡。即使是活性染料也有一定的影响。 根据经验 不染色完全可以看见显微结构 细胞膜 细胞壁 液泡 核 基本可以看见 叶绿体隐约可以看见 当然分辨率和光圈大小需要调整到最佳状态 鞭毛可以隐约看见 霉菌放线菌细菌的形态当然是不染色完全可以看 如果想看更细致些 比如线粒体 高尔基体 核膜 微囊体 膜泡等亚显微结构 需要用特定的分子染料进行染色再进行观察 如果你不需要做活体实验而只是观察的话，染色吧，清晰度好一些。

7、什么是血涂片？如何制作血涂片？

认识红细胞和白细胞。
材料用具: 脱脂棉、已消毒过的针和载玻片，体积分数为
75%的酒精。
方法步骤: 1、用蘸有何种分数为75%的酒精的脱脂棉，
（边讲解边演示）
对将要取血的部位（如指尖）进行消毒；
2、用已消毒的针尖刺破指尖的皮肤；
3、挤出一滴血，滴在已消毒的载玻片上；

4、另取一片载玻片作推片，将推片自血滴左

侧向右移动；
5、当血滴均匀地附着在两片之间后，再将推

片向左平稳地推移（两片成30~45度夹角）；
6、推出均匀的血膜。

8、涂片是指用什么的生物材料经过什么制成的

涂片是指用从患者身上采集的液体标本（如血液，骨髓液等）均匀的涂抹在玻璃片上制成的标本，用于实验室诊断和病理诊断。