鼠骨髓dc转录组磁珠

1、怎样高效率转染DC（DC2.4）细胞？

高效率传染他的细胞的时候就是给他抗体的刺激，在抗体抗原的刺激下她才可以。

2、如何从小鼠骨髓中分离和培养DC

拉颈处死小鼠，无菌剥离股骨和胫骨，用Hank’S冲出骨髓细胞，PBS洗
涤1次，用0．83％Tris—NH4CL裂解红细胞，RPMI1640培养液洗涤2次，调整细胞浓度为1×106个／mL，
并加入rmGM—CSF(1000 U／mL)和rmlL－4(500 U／mL)，接种于24孔培养板，置于37~C，5％CO2孵箱中
培养．第3天轻轻摇动培养板，吸走大部分悬浮细胞，加人等量的培养液，并补足细胞因子．隔日半量换液
1次，第7天收集悬浮或稍微贴壁的细胞．

3、如何从小鼠骨髓中分离和培养DC

1、 取骨髓，对倍稀释
2、 用滴管沿管壁缓慢加入淋巴细胞分离液(45度角倾斜，尽量产生气泡，起到缓冲作用)
3、 2000转，离心30分钟
4、 吸取白膜层，（沿管壁）交替多次吸取，加入5倍体积以上的PBS液
5、 1500转，离心15分钟（洗掉血小板）
6、 弃掉上清，留少许回流液，轻弹管壁，加入PBS液至50ml
7、 800转，离心10分钟，（洗掉红细胞）
8、 重复两至三次
9、 加入PBS液至50ml，计数:？个细胞
离心后铺板，1X1076孔板培养液，共铺20板。无血清1640+DNA酶12h后轻晃培养液，洗板后加入完全培养基和GM—CSF(1000U/ml)和IL—4(500U/lml)
10、 第三天每孔补加等体积的完全培养基和GM—CSF(1000U/ml)和IL—4(500U/lml) ，这时细胞部分悬浮
11、 第五天为imDC，+1LPS(1ug/ml),诱导至第七天，为mDC。

4、曹雪涛的主要成就

曹雪涛院士对树突状细胞（DC）的免疫学和肿瘤的免疫与基因治疗开展了比较系统深入的创新性基础研究和临床应用研究。发现了一种具有重要免疫调控功能的新型DC亚群，且发现成熟DC在基质作用下能进一步增殖和分化；提出了DC的免疫调控新机制并发现其具有两类新的功能。从DC自主发现124条全长新基因并研究了20余条的功能，发现的12种新分子获得HUGO正式命名。提出了免疫与基因治疗肿瘤的新途径并开展了其应用研究。
在国内完成的工作以通讯作者在Nat Immunol、Blood、J Immunol、Cancer Res、JBC等SCI收录杂志发表论文101篇（影响因子>5分有27篇，其中10分以上6篇、28分一篇），主编专著3部，是国家973免疫学项目及国家自然科学基金重大项目的负责人。
以第一申请人申报国家发明专利16项，合作申请27项， 已经获得授权13项。牵头研制的4种生物高技术产品已试用于临床（其中2种已获国家新药证书）。
1998年4月发现第一条基因，曹雪涛率领免疫学教研室已做了50000多个基因片断测序，其中有3000多个片断为人类首次发现，已获得人类全长新基因124条。
1995年开始，他把树突状细胞作为主攻方向，使其成为一项包括免疫学、肿瘤学、人类基因组计划、基因免疫治疗等学科共同交叉的立体性课题研究。
2004年，曹雪涛领衔的第二军医大学免疫学研究所首次在国际上发现的一种具有独特调控功能的新型树突状细胞亚群的研究成果在国际顶级学术杂志《自然·免疫学》上以封面论文的形式发表，成为该杂志创刊以来首次刊登由我国科学家自主取得的创新性成果，并得到了国际免疫学界的高度评价。 如何在基础免疫研究的核心领域、关键技术上拥有自主知识产权，实现我国的免疫学事业的根本性突破？曹雪涛敏锐地发现，树突状细胞是人体内数量极少且功能最强的抗原提呈细胞，它为人体建立起一套完善的免疫学“防御机制”。如果在这一方面的研究取得突破，将为设计新型疫苗提供新的思路和策略。
来自第二军医大学、中国医学科学院和浙江大学医学院的研究人员，发现一种名为 lnc-DC 的长链非编码 RNA 控制了人类树突状细胞的分化。这些重要的研究结果在线发表在2014年4月18日的《科学》（Science）杂志上。领导这一研究的是我国著名的免疫学家曹雪涛（Xuetao Cao）院士。在这篇新论文中，研究人员利用广泛接受的、诱导外周血单核细胞分化为人类树突状细胞的模型，进行转录组微阵列分析和 RNA 测序，鉴别出了唯独表达于人类 DCs 中的一种长链非编码 RNA: lnc-DC 。他们证实抑制 lnc-DC 可破坏体外人类外周血单核细胞以及体内的小鼠骨髓细胞分化为 DC，并减小了 DCs 刺激T细胞激活的能力。进一步的机制研究证实， lnc-DC 是通过激活转录因子 STAT3 来介导这些效应的。 lnc-DC 直接结合到细胞质中的 STAT3 上，通过阻止 STAT3 结合 SHP1 及被去磷酸化，促进了 STAT3 tyrosine-705 位点磷酸化。新研究确定了一个调控 DC 分化的 lncRNA ，并扩宽了已知的 lncRNA 作用机制。
原始出处：Pin Wang, Yiquan Xue, Yanmei Han, Li Lin, Cong Wu, Sheng Xu, Zhengping Jiang, Junfang Xu,Qiuyan Liu, and Xuetao Cao.The STAT3-Binding Long Noncoding RNA lnc-DC Controls Human Dendritic Cell Differentiation. Science, 18 April 2014; DOI:10.1126/science.1251456