1、如何取小鼠骨髓细胞
1、颈椎脱臼法处死小鼠(C57型小鼠)，放在75%酒精中侵泡3-5分钟后，拎出后将小鼠铺于超净台上一个消毒托盘上。
2、无菌提取小鼠的四肢骨，用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，用眼科剪小心剪开皮肤，并分离两下肢的皮肤，往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，这样可以游离出小鼠的两条下肢。
3、小心剥离肌肉，分别剪下Femurs（大腿骨）and Tibias（胫骨）,剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔。注意尽可能少的剪走骨髓腔。用纱布将骨头上的肌肉用纱布擦拭干净。
4、拿一支1ml的无菌注射器，每支吸取1mlHBSS液，并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。轻轻插入骨髓腔，冲洗骨髓腔以获得骨髓，一般用2-3ml培养基冲洗两次，可冲出绝大部分细胞。
5、过滤：用2OO目的滤网过滤，将滤网的中央插入到离心管里面25px处，然后用注射器吸取骨髓液，慢慢将骨髓液经滤网注入离心管中，去除残渣。
6、离心：将离心管放置离心机中离心10分钟（1350r/min）
7、去上清，加入1ml红细胞裂解液ACK，静置3分钟，再加9ml HBSS溶液，进行离心10分钟，弃上清。
8、用HBSS液洗涤骨髓细胞2次，室温，1350r/min离心10分钟。计数活细胞，用培养基调整细胞浓度至1X106个细胞/ml.
9、在试管中加入RPMI-1640培养基，然后再加入20ng/ml的细胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巯基乙醇，
10、吸取培养基加入到沉淀中混匀，24孔板铺板培养，每个孔1ml.
2、小鼠造模后16小时取材，怎么计划时间
小鼠造模方法。方法三次造模分别采用：免疫介导法：小鼠经6.0Gy60Coγ射线亚致死量全身
由尾静脉输入DBA/2小鼠的胸腺、淋巴结混合细胞悬液1×106个细胞/0.2ml/只。混合方法：小鼠一次全身3.0Gy60Coγ射线照射后，分照射后，
5、6天腹腔注射环磷酰胺50.0mg/kg及氯霉素62.5mg/kg。化学方法：用苯+玉米油，3次/w，别在第4、背部内皮下注射，共注射15次。同时腹腔注射环磷酰胺溶液（50mg/kg），每日1次共7次。结果
免疫介导法造模容后模型小鼠在15d内除1只小鼠外全部死亡；混合方法造模，模型小鼠骨髓
免疫介导和混合方法造模速度快，对模型小鼠骨髓抑制明显，与临床急性AA
活检提示造模失败；化学方法造模，造模成功，模型维持时间长。
3、如何促进小鼠骨髓中的中性粒细胞移动到外周
小鼠骨髓中性粒细胞的分离
实验器材：器械（眼科小直剪2把，小弯镊3把），无菌塑料滴管，15ml离心管，4mlEP管，培养皿，1ml注射器，70um尼龙筛网，低温离心机 试剂：PBS（1×，10×），HBSS，percoll，percoll储存液（percoll:10×PBS=9:1），percoll溶液（45%，81%，62%，55%，50%，分别用1×PBS稀释Percoll储存液到相应浓度）Histopaque1119，小鼠中性粒细胞缓冲液（MNB，既含0.1%牛血清白蛋白，1%葡萄糖的HBSS溶液）
材料：8-12周C57小鼠 实验步骤：
1.拉颈处死小鼠，分离其胫骨和股骨，用纱布将胫骨和股骨擦干净，置于75%酒精中浸泡5min
2.用小直剪剪掉骨髓两端，暴露骨髓腔，用MNB冲洗，每次1ml，胫骨冲洗两次，股骨冲洗3次。
3.冲洗液用70um尼龙筛网过滤，离心收集细胞，600g 4℃ 10min,低减速。 4.弃上清，用3ml45%percoll溶液重悬细胞
5.Percoll梯度准备：3ml81%，2ml62%，2ml55%，2ml50%percoll溶液 6.小心的将细胞悬液置于percoll梯度上，1600g,30min,10℃,无制动离心。 7.弃掉62%percoll层以上的溶液，收集62%-81%之间的percoll层。
8.10mlMNB洗两次，600g,10℃,10min,离心。弃上清，用3mlMNB重悬细胞。
9.将细胞悬液小心得置于3mlHistopaque1119上，1600g,10℃,30min,无制动离心，去除红细胞层。
10.收集1119和MNB之间的细胞层，10mlMNB 洗两次，600g, 4℃ 10min,低减速离心 11.按需要将细胞用培养基重悬到一定的浓度。
4、如何提取小鼠骨髓细胞?
1、颈椎脱臼法处死小鼠(C57型小鼠)，放在75%酒精中侵泡3-5分钟后，拎出后将小鼠铺于超净台上一个消毒托盘上。
2、无菌提取小鼠的四肢骨，用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，用眼科剪小心剪开皮肤，并分离两下肢的皮肤，往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，这样可以游离出小鼠的两条下肢。
3、小心剥离肌肉，分别剪下Femurs（大腿骨）and Tibias（胫骨）,剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔。注意尽可能少的剪走骨髓腔。用纱布将骨头上的肌肉用纱布擦拭干净。
4、拿一支1ml的无菌注射器，每支吸取1mlHBSS液，并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。轻轻插入骨髓腔，冲洗骨髓腔以获得骨髓，一般用2-3ml培养基冲洗两次，可冲出绝大部分细胞。
5、过滤：用2OO目的滤网过滤，将滤网的中央插入到离心管里面25px处，然后用注射器吸取骨髓液，慢慢将骨髓液经滤网注入离心管中，去除残渣。
6、离心：将离心管放置离心机中离心10分钟（1350r/min）
7、去上清，加入1ml红细胞裂解液ACK，静置3分钟，再加9ml HBSS溶液，进行离心10分钟，弃上清。
8、用HBSS液洗涤骨髓细胞2次，室温，1350r/min离心10分钟。计数活细胞，用培养基调整细胞浓度至1X106个细胞/ml.
9、在试管中加入RPMI-1640培养基，然后再加入20ng/ml的细胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巯基乙醇，
10、吸取培养基加入到沉淀中混匀，24孔板铺板培养，每个孔1ml.
5、医考问答提：骨髓标本采集如何穿刺？
骨髓标本大部分采用穿刺法吸取，骨髓穿刺部位选择一般要从以下几个方面考虑：
①骨髓腔中红骨髓丰富；
②穿刺部位应浅表、易定位；
③应避开重要脏器. .
临床上常用的穿刺部位包括胸骨、棘突、髂骨、胫骨等处 髂骨后上棘此处骨皮质薄，骨髓腔大，进针容易，骨髓液丰富，被血液稀释的可能性小，故为临床上首选的穿刺部位
6、如图是制备分泌抗X抗体的过程，根据图解回答问题：（1）给小鼠注射抗原的目的是______．（2）在单克隆抗
（1）首先应给小鼠注射抗原，①过程从小鼠的脾脏中取来得已免疫的B细胞，该细胞能够产生抗体．
（2）细胞来源：B淋巴细胞能产生特异性抗体，在体外不能无限繁殖；骨髓瘤源细胞不产生专一性抗体，体外能无限繁殖；杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生特定抗体的特性．
（3）由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用动物细胞融合和动物细胞培养的技术手段，前者常用的诱导剂与植物原生质体融合不同的是灭活病毒．
（4）动物细胞培养液的配方通常为合成培百养基，含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，还应该加入动物血清或者血浆．
（5）在动物细胞度融合过程中，需要将所选取的组织细胞分散开，可用胰蛋白酶处理离体组织细胞使之分散．
（5）图中有两次筛选过程：步骤④筛选得到杂交瘤细胞（去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞）；步骤⑤⑥筛选出能够产问生特异性抗体的细胞群．
故答案为：
（1）产生相应的（效应）B细胞
（2）体外无限增殖答 分泌特定抗体
（3）动物细胞融合 动物细胞培养 灭活病毒
（4）动物血清
（5）胰蛋白酶
（6）杂交瘤细胞 能产生特定抗体的细胞
7、小鼠酒精造模后多少小时后检测血清中酒精含量
小鼠造模方法。方法三次造模分别采用：免疫百介导法：小鼠经6.0Gy60Coγ射线亚致死量全身
由尾静脉输入DBA/2小鼠的胸腺、淋巴结混合细胞悬液1×106个细胞/0.2ml/只。混合方法：度小鼠一次全身3.0Gy60Coγ射线照射后，分照射后，
5、6天腹腔注射环磷酰知胺50.0mg/kg及氯霉素62.5mg/kg。化学方法：用苯+玉米油，3次/w，别在第4、背部皮下注射，共注射15次。同时腹腔注射环磷酰胺溶液（50mg/kg），每日1次共7次。结果
免疫介导法造道模后模型小鼠专在15d内除1只小鼠外全部死亡；混合方法造模，模型小鼠骨髓
免疫介导和混合方法造模速度快，对模型小鼠骨髓抑制明显，与临床急性AA
活检提示造模失属败；化学方法造模，造模成功，模型维持时间长。
8、骨内注射技术的发展历史
尽管在成年急诊个体中通过骨髓腔内（intraosseous，IO）途径给药或补液在现代急诊医疗设备系统中仍是一种新的技术，但是IO输注却有过一段长期的丰富的历史。未经证实的观点认为IO技术最早起源于十九世纪晚期，但是第一次科学地研究并记录IO技术却是在1922年，当时哈佛大学的Drinker博士在研究胸骨板循环时发现并提出骨内腔隙充满一种非萎缩性静脉，他通过实验进一步证实灌注到骨髓腔中的物质能够很快被中枢循环系统所吸收。在随后的二十多年里关于IO技术的研究得以突飞猛进的发展。
1940年，费城的Tocantins医生和他的同事O’Neill通过临床实验一同证实了长骨和胸骨的骨髓腔也可以被用来作为血管输注的通路，他们还证实了注射到兔胫骨腔内的红色染料在注射后10秒钟就出现在心脏中。此外，Tocantins还发表了一些研究IO输注的案例报告，开发了一些用于临床IO输注的实用技术并设计了一些IO输注专用的特殊针头。1942年Papper博士证实了通过IO或静脉通路给予输液基本具有完全相似的循环时间，1944年，英国内科医生Hamilton Bailey博士评论在战时的伦敦使用IO输注时提到IO针头具有意外刺穿胸骨从而损伤心脏的潜在风险，为此Bailey设计了一种特殊的IO套管针用以保护心脏。
在二十世纪四五十年代，IO输注技术已成为一种用于成年或儿童给予药物或输血的流行方案，这种技术也因此经常出现在医学期刊中，这段时期主要使用的是手动穿刺针用于进行IO输注操作。在二次世界大战期间，IO输注技术被战地医疗救治机构广泛使用，并挽救了4000余名身受重伤的士兵性命，而在没有使用IO输注技术之前，许多失血性休克的士兵因不能建立静脉输液循环而导致死亡，因此，美国军方认为IO输注技术是一种救治严重受伤士兵的标准措施。遗憾的是，二战以后至1968年由David Boyd博士等在芝加哥创建第一家EMS机构期间，IO输注技术的成功经验并未能从部队转移到地方。究其原因，主要是因为静脉输液用塑料导管的迅速发展和普及，以及EMS是由地方的创伤中心发展而来而不是诞生于军队之中。因此，很多创伤外科医生并不了解IO技术，只要那些医护人员能够开展静脉输注他们就很满足了。直至1984年，James Orlowski博士在参观霍乱流行的印度时发现，IO输注技术被用来输液和给药并挽救了许多可能死于霍乱的患者的生命，在他回国后发表了一篇名为“我的静脉路线王国”的社论，其中他倡导在小儿科中使用IO技术。这篇社论重新唤起了对IO输注技术的关注和兴趣，并很快被儿科治疗机构采纳并被列入PALS（Pediatric Advanced Life Support儿童生命支持）准则之中，1986年，美国心脏协会（AHA）正式批准将IO输注技术列入儿科的急救复苏程序当中。
在过去的三十多年中，开展了许多关于在不同动物模型中通过IO输注方式给予药物并进行药代动力学的研究。其中，在1990年在《新英格兰医学杂志》上发表的一篇关于IO输注的文献综述指出，任何可以利用静脉进行给药的操作也都可以通过IO途径进行给药，并且能够被中枢循环系统快速吸收利用。2003年ACLS（Advanced Cardiac Life Support心脏生命支持）准则中推荐IO作为成年个体有价值的选择方案，2005年美国FDA批准了三种用于成人IO输液的新设备，分别为F.A.S.T.1；B.I.G.和EZ-IO。伴随着IO技术的复兴和流行，理应进一步深入观察IO技术在成人个体输注中的应用，以及它是如何改变医护人员、护士和医生在静脉输液困难情况下解决问题方案的。
9、骨髓穿刺怎么个做法
【操作方法】
1.选好部位：选择穿刺部位骼前上棘、髂后上棘、胸骨、腰椎棘突穿刺点。
2.消毒麻醉：常规消毒皮肤，戴无菌手套，铺无菌孔巾，用2%利多卡因行局部皮肤、皮下及骨膜麻醉。
3.进行穿刺：穿刺抽吸将骨髓穿刺针固定器固定在一定长度，右手持针向骨面垂直刺，当针尖接触骨质后则将穿刺针左右旋转，缓缓钻刺骨质，穿刺针进入骨髓腔后，拔出针芯，接上干燥的10ml或20ml注射器，用适当力量抽吸骨髓液0.1～0.2ml滴于载玻片上，如需作骨髓液细菌检查，再抽取1～2ml。
4.拔针抽吸完毕，重新插入针芯，用无菌纱布置于针孔处，拔出穿刺针，按压1～2分钟后，胶布固定纱布。
【护理要点】
1.术前注意：(1)化验及药物过敏试验：查出血及凝血时间。若用普鲁卡因作局部麻醉，病人需做皮试。(2)体位准备：根据穿刺部位协助病人采取适宜的体位，若于胸骨、骼前上棘作穿刺者取仰卧位，前者还需用枕头垫于背后，以使胸部稍突出;若于髂后上棘穿刺者取侧卧位或俯卧位;棘突穿刺点则取坐位，尽量弯腰，头俯屈于胸前使棘突暴露。
2.术后注意：(1)观察：注意观察穿刺处有无出血，如果有渗血，立即换无菌纱块，压迫伤口直至无渗血为止。(2)保护穿刺处：指导病人48～72小时内不要弄湿穿刺处，多卧床休息，避免剧烈活动，防止伤口感染。
10、为什么文献中小鼠干细胞移植都采用脾内注射的方法
你好，本来早期霍奇金淋巴瘤是一个能够临床治百愈的疾病，是能够较长时间无病生存的，就以上看，有多处器官转移了，应该属于晚期了，效果不能很肯定，危险当然有，由于骨髓度中转移，所以会造成血象极不稳定，所以要注意监测，干细胞移植可回以考虑的。就天津来说，天津肿瘤医院是比较好的，能够得到恰当的治疗，一般省会答肿瘤专科医院的治疗时比较规范的、谢谢。