1、制备小鼠骨髓染色体标本过程中有哪几个主要步骤影响制片结果
在制备小鼠骨髓细胞染色体标本过程中以下几个步骤需要注意:
提前3-4小时候注射秋水仙素,时间太长或者太短都会影响染色体中期的数目和形态。
在低渗过程中时间和吹打都很重要,低渗过度染色体膨胀,染色后肥肥的,低渗时间不过染色后染色体颜色很深看不出条带。
滴片,如果是教学的实验,要求玻片是冰的,而且要倾斜,滴的高度一般在25-30CM,滴完要过酒精灯,让固定液蒸发。滴的数量不要太多否则会重叠.如果是医院里的染色体制片有专门的滴片机。
小鼠骨髓细胞染色体标本制作:
原理:
由于小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞,具有高度的分裂能力,本实验采用这一材料,通过前处理,低渗,固定,制片,染色等步骤制得染色体标本,可观察到许多处于分裂中期的染色体,可以进行染色体组型分析;
试剂、试剂盒:秋水仙素、姬姆萨染液、固定液、低渗液、生理盐水;
仪器、耗材:天平、离心机、恒温培养箱、显微镜;
实验步骤
一、材料和方法
1. 材料:小白鼠。
2. 设备:天平,离心机,恒温培养箱,显微镜。
3. 药品:秋水仙素,姬姆萨染液,固定液,低渗液,生理盐水。
二、步骤
秋水仙素处理--取骨髓--低渗处理--固定--离心--再固定--再离心--滴片--染色--镜检--封片。
2、小鼠骨髓细胞可以直接用于染色体的制作的原因
骨髓细胞有丝分裂旺盛,所以不需要体外培养就可以直接做实验。外周血淋巴细胞几乎都是处在G0或者G1期,一般情况下是不分裂的。在培养基中加入植物凝集素时,淋巴细胞受到刺激时转化为淋巴母细胞,并开始进行有丝分裂。
3、动物染色体标本的制备与观察的实验过程中低渗不足或过度会出现什么问题
1)动物的选择,一般用小鼠抄,其繁殖能力强,易于饲养.我们常用的是它们的骨髓细胞和精巢,因其分裂指数较高,不用体外培养就可以得到分裂中期的细胞.
2)秋水仙素用量要注意,太多或处理时间过长,会导致染色体的过分凝缩或着丝点裂解,最终会引起染色体形态不正常,甚至被破坏或溶解.
3)
低渗处理很关键.低渗液的量、处理时间均与细胞的数量有关.低渗过度,细胞会破裂;低渗不足则染色体在一起,分散不开.
4)
离心速度或离心时间也能影响染色体标本的制备.离心速度过大或离心时间过长,则会引起细胞破裂;反之,离心速度过小或离心时间过短,则细胞沉降不下来,则会引起大量细胞的丢失.
5)
固定液要随用随配,固定彻底后再打散细胞团块,否则细胞容易破碎,染色体分散亦受到影响.
6)
载玻片要预冷.冷却不够,则会影响染色体的附着和铺展.
7)
用吸管吹散细胞时用力必须尽量轻柔,用力过大则会造成细胞破裂,而染色体也会弥散在溶液中,在随后的离心中将会丢失.
8)
滴片时的高度很重要,高度过低细胞不会破裂;过高则染色体过于分散甚至丢失,无法辨别出染色体的准确数量.
4、制备小鼠骨髓细胞染色体标本时,为什么要进行预固定?
对细胞的预固定处理是为了防止离心时细胞间的相互勃连,而固定就是楼上所说的意思
5、小鼠骨髓细胞染色实验中有哪些材料可用作制备染色标本,其基本特性是什么
在明视野下,若能看清的话就不要染色了。因为在无法观测清楚时,才会染色。通常染色剂会影响微生物的活性,更多的是使细胞死亡。即使是活性染料也有一定的影响。 根据经验 不染色完全可以看见显微结构 细胞膜 细胞壁 液泡 核 基本可以看见 叶绿体隐约可以看见 当然分辨率和光圈大小需要调整到最佳状态 鞭毛可以隐约看见 霉菌放线菌细菌的形态当然是不染色完全可以看 如果想看更细致些 比如线粒体 高尔基体 核膜 微囊体 膜泡等亚显微结构 需要用特定的分子染料进行染色再进行观察 如果你不需要做活体实验而只是观察的话,染色吧,清晰度好一些。
6、小鼠骨髓细胞染色体标本制备和观察实验报告
首先要提前2小时向小鼠注射秋水仙素,处死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理盐水,离心取细胞(离心管底部),再经低渗处理,染色,滴冰片,镜检。很麻烦,具体的你可以去图书馆查阅相关资料(动物染色体制备)。
7、小鼠骨髓细胞的染色体标本一般制备成什么片
小鼠骨髓细胞的染色体标本一般制备成什么片
首先要提前2小时向小鼠注射秋水仙素,处死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理盐水,离心取细胞(离心管底部),再经低渗处理,染色,滴冰片,镜检.很麻烦,具体的你可以去图书馆查阅相关资料(动物染色体制备).