骨髓瑞氏染色注意事项

1、瑞氏染色步骤？

瑞氏染色法：

为了观察细胞内部结构，识别各种细胞及异常变化，血涂片必须进行染色。
血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变而来。目前常用瑞氏染色法。

【目的】掌握血涂片的染色方法。

【原理】
把已制成的血细胞分布均匀的薄膜涂片，
用复合染料染色。
其着色的原理包括物理
吸附及化学亲和作用。
不同种类的细胞及同一细胞的不同成分及不结构，
对酸性及碱性染料
的结合能力不同，因而使不同种类的细胞染成不同的颜色，呈现各自的特点。

【器材】我们今天的器材是：载玻片、推片、吸耳球、显微镜。

【试剂】

1
瑞氏染料

由酸性染料伊红(eosin,E)和碱性染料亚甲蓝(methylene
blue,M|+)组成的复合染料。

★亚甲蓝(又名美蓝)为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构，通常为氯盐，即氯化美蓝。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青)。

★伊红通常为钠盐。

★将适量的伊红，美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。

甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红ME，使其解离为M+和E+，后两者可以选择性地吸附于血细胞内的不同成分而使其着色；
二是具有很强的脱水作用，可固定细胞的形态，当细胞发生凝固时，蛋白质被沉淀为颗粒状或者网状，增加细胞结构的表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。

2
瑞氏染液的配制：取瑞氏染料1.0g、甲醇600ml、甘油。

操作如下：将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢地研
磨(至少半小时)，以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。再加15ml甘油，密闭保存。这只就是我们配制的I液。

说明：新鲜配制的染液偏碱，染色效果较差，经在室温下贮存一定时间，美蓝逐渐转变为天青B后方可使用，这一过程称染料成熟。放置时间愈久，天青愈多，染色效果也就越好。但必须盖严瓶口，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油3ml，防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰，但我们所用的甲醇必须纯净。

II液：又称磷酸盐缓冲液(PH6.4-6.8)，包含磷酸二氢钾0.3g，磷酸氢二钠0.2g、蒸馏水加至1000ml。
配好后用磷酸盐溶液校正PH，如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。
也可用蒸馏水代替。

3
染色：①血涂片自然干燥后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢。随后将玻片平置
于染色架上，滴加染液3-5滴，使其盖满血涂片，大约1分钟后，滴加等量或稍多的II液，
用吸耳球轻轻混匀。
②冲洗：染色5-10分钟用流水染液，待干。

③结果观察，
将干燥后的血涂片置显微镜下观察。
先用低倍镜观察血涂片，
再用油镜。

2、骨髓片、血涂片主要依据瑞氏染色观察细胞，为什么还需要其他化学染色？比如铁染色、过氧化物酶染色等。

骨髓片、血涂片主要依据瑞氏染色观察细胞，为什么还需要其他化学染色？比如铁染色、过氧化物酶染色

3、瑞氏染色的步骤是什么?

操作步骤：

1.滴加瑞氏吉姆萨A液(约0.5ml-0.8ml)涂片上，并让染液覆盖整个标本染色1min；

2. 再将瑞氏吉姆萨B液加于A液上面（滴加量为A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3-10min。（染血片时间可略短，染骨髓片时间应视细胞量多少而异）

3.水洗（冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上），干燥、镜检。

注意事项：

1. 染色时间须视何种标本，涂片厚度，有核细胞多少，何种细胞及室温等而定；通常染血液涂片时滴加B液后染2-4分钟，染骨髓片则应不少于8分钟；气温较低时，可适当延长染色时间。染色结果如出现嗜酸性粒细胞变碱，则考虑是否染色时间太长所致。

2.做骨髓涂片时，因为骨髓纤维蛋白含量较高，凝固较快，所以涂片过程要快。骨髓不可用草酸盐抗凝，否则会使血细胞核变形，核染色质致密，胞浆空泡形成，出现草酸盐结晶。

3.染液量需充足，勿使染液蒸发干燥，以防染料沉着于涂片上。

4.做细胞染色时，当天气寒冷或湿度较大时，应于37℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小或在染色时脱片。

5.染料放置时间越长，染色效果越好。

6. 本试剂应由专业人员使用。

拓展资料

Wrfeht和Giemsa都于1902年报告了各自的新的血液学染色剂，其主要特点是在制备多色性亚甲蓝（主要指天青B）方面做了改进，使血细胞和疟原虫着色较好，操作简便。

上述染色法均是含伊红和亚甲基蓝衍生物的复合染料。在临床检验工作中，瑞氏染色法常用于血液、其他体液、分泌物和排泄物涂片中各种细胞的染色，有利于在显微镜下观察细胞形态及对细胞进行分类检查。

【染色原理】

瑞氏染色分两相进行，第一相是酸性染料伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒等结合；碱性染料天青B与细胞中的酸性物质如核染色质（chro－matin）、特异中性颗粒、血小板及富含核蛋白的胞质结合。第二相是天青B和伊红在适宜条件下形成紫色的天青B一伊红复合物（azure B－eosin complex），这种复合物是形成Romanowsky－Giemsa效应的基础。

Romanowsky－Giemsa效应包括：①白细胞核染色质染成紫色，疟原虫的染色质染成红色；②中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区染成紫色；③产生本效应必须有两种染料参与，一种是天青B，另一种是伊红。

Wittekind（1985）指出，天青B与DNA分子中的磷酸基结合，而伊红既与DNA分子中的阳离子部位结合，又与天青B结合，与天青B的结合力来源于电子供一受体的电子转移力，天青B的甲氨基（－NHCHs）与伊红分子中的叛基（－COOH）间形成氢键。因此，天青B是噻嗪类染料中能与伊红形成复合物的最佳选择，因为拥有四个甲基侧链的亚甲蓝不能以氢键与伊红结合。

甲醇除作为染料的溶剂，能将瑞氏染料解离成带正电荷的天青B和带负电荷伊红外，因其具有脱水力，还可将细胞固定为一定形态，并使蛋白沉淀为颗粒状、网状结构，增加细胞与染料的接触表面，增强染色效果。

细胞中的各种有机物质（特别是蛋白质）、染料等对环境的州值非常敏感。如环境偏酸，氢离子增多，降低对碱性染料的亲和力；增强伊红着色，出现异常红染；相反，则可出现异常蓝染。最佳环境应维持在PH值6 4～6、8.因此，必须使用缓冲溶液。

参考资料：

网络_瑞氏染色

瑞氏染色原理及方法_医学教育网

4、如何判断瑞氏染色结果的好坏？

阳性菌呈蓝紫色，阴性菌呈红色。染色后除可以看到细菌形态，细分细菌种类。

染色阳性菌包括：致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、碳疽杆菌等。

阴性菌包括：百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等

5、血细胞染色常用的瑞氏染色法的原理？主要讲一下瑞氏染液。

瑞氏染色法：用瑞氏染色液对细菌进行染色以便进行显微镜检查的染色法

原理
甲醇具强大脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构表面积，提高细胞对染料吸收作用
同时吸附染色液中的水，使染色液升温，加速反应

6、求简述瑞氏染色法的原理，

瑞氏染色法：用瑞氏染色液对细菌进行染色以便进行显微镜检查的染色法
原理
甲醇具强大脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构表面积，提高细胞对染料吸收作用
同时吸附染色液中的水，使染色液升温，加速反应

7、瑞氏试剂染到衣服怎么洗

您好！衣服沾到瑞氏试剂，应尽快清洗，污渍长时间的停留，会渗入到衣物纤维，增大衣服的洗净难度，可采用以下方法清洗：
1、衣服干的时候，用手洗专用洗衣液原液涂抹在污渍处，完全覆盖污渍，静置5分钟后（可轻轻搓洗），加入洗衣液常规洗涤；
2、如经过上述方法污渍仍无法去除，则
（1）纯白色的棉、麻、涤纶材质的衣物：每半盆水（约2升）加入白色衣物色渍净（600g规格）1瓶盖（40克），搅匀，放入衣物浸泡30min，漂洗干净。
*视需要可适当延长浸泡时间，若2小时后色渍未去除，将衣物取出，往盆中添加白色衣物色渍净（每半盆水加1瓶盖），搅匀，放入衣物继续浸泡，累计浸泡时长不超过6小时。
（2）彩色或其他材质的白色衣物：将衣物放入盆中，污渍部位贴盆底，用彩色衣物色渍净（600g规格）瓶盖量取1/4瓶盖（10克）彩色衣物色渍净和1/4瓶盖（10克）衣领净，倒在污渍处，用衣物其他无污渍部位盖住污渍，防止风干，静置2小时，漂洗干净。若2小时后仍有污渍未去除，可延长静置时间至过夜。
注意事项：
1、白色衣物色渍净适用于白色棉、麻、涤纶、涤棉、棉麻面料，请勿用于有颜色的衣服（包括白底条纹、白底花格、白底印花），勿用于丝毛氨纶尼龙及其他不可氯漂衣物，勿直接使用原液。
2、彩色衣物色渍净不适用于易褪色衣物、干洗衣物，使用时避免接触衣物上的金属纽扣、拉链、金属饰物等，避免阳光直射。

8、瑞氏染色血涂片的步骤

(1)铅笔作标记，将血涂片平放在染色架copy上，蜡笔划线可防液体外溢。
(2)血涂片自然干燥后，滴瑞氏染百液（A液）数滴覆盖血片，染约1min。
(3)滴加稍多体积的缓冲液度，用吸耳球将其与染液吹匀，染约5分钟。
(4)慢慢摇动知玻片，然后用细的自来水流从玻片的一侧冲去染液（不要先倒去染液再冲水），待血片自道然干燥后(或用滤纸吸干)，即可镜检。

9、正常红细胞的瑞氏染色？

瑞氏染色是染血细胞的，而革兰氏和美兰染色主要是染细菌的。
1.
瑞氏染料中有美蓝和伊红两种成分，前者为碱性，后者为酸性，它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，使其显现出不同的色调。血细胞核由去氧核糖核酸和强碱性的组蛋白、精蛋白等形成核蛋白。这种强碱性的物质与瑞氏染料中的酸性染料伊红有亲和力，所以染成红色；核蛋白中还有少量的
弱酸性蛋白，它们又与染液中的碱性染料美蓝起作用而染成蓝色，但含量太少，蓝色反应极弱
，故核染色呈现紫红色。较幼稚的细胞之胞浆和细胞核之核仁中含有酸性物质，它们与染料中的碱性染料美蓝有亲和力，故染成蓝色。
2.
革兰氏染色通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
染色的差异主要是由于阴性与阳性细菌细胞壁的差异所引起的。
3.
美兰又叫亚甲基蓝。染色原理：细菌经过进行有氧呼吸产生大量的二氧化碳,使添加亚甲基蓝的培养液变弱酸性,亚甲基蓝由氧化态的蓝色变成还原态的无色,所以可以检测细菌的数目多少。细菌越多，变无色的区域越多。