1、请问一只小鼠有多少骨髓单个核细胞?
单核细胞(monocytes)是体积最大的白细胞.其细胞核常偏位,呈多形性,如卵圆形、肾形、马蹄形、不规则形等,常有折叠感;染色质呈疏松网状,着色较浅.胞质较多,嗜碱性,但因含大量细小的嗜天青颗粒而染成灰蓝色,颗粒含过氧化物酶.血涂片,Giemsa染色 .
单个核细胞是指只有一个细胞核的细胞.一般医学检验书上说的是“外周血中单个核的白细胞”包括“淋巴细胞和单核细胞”.外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear
cell,PBMC)即外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞和单核细胞.体外检测淋巴细胞首先要分离外周血单个核细胞,目前主要的分离方法是
Ficoll-hypaque(葡聚糖-泛影葡胺)密度梯度离心法,因为血液中各有形成分的比重存在差异,因此得以分离.红细胞和
粒细胞密度大于分层液,同时因红细胞遇到Ficoll而凝集成串钱状而沉积于管底.血小板则因密度小而悬浮于血浆中,唯有与分层液密度相当的单个核细胞密
集在血浆层和分层液的界面中,呈白膜状,吸取该层细胞递经洗涤高心重悬.本法分离单个核细胞纯度可达95%,淋巴细胞约占90%~95%,细胞获得率可达
80%以上,其高低与室温有关,超过25℃时会影响细胞获得率.
2、单个核细胞和单核细胞有什么不同
1、单个核细胞是血液白细胞中具有单个核细胞的一个含糊术语;
2、周血单个核版细胞包括淋巴细胞和单核细胞等权;
3、单个核细胞的相对密度在1.076-1.090之间,常用相对密度1.077±0.001聚蔗糖-泛影葡胺作密度梯度离心加以分离;
4、而单核细胞(monocytes)是血液中最大的血细胞,也是体积最大的白细胞,是机体防御系统的一个重要组成部分。
(2)骨髓单个核细胞分离出灰绿色细胞扩展资料
1、淋巴细胞是免疫反应的核心。根据淋巴细胞的发生来源、形态结构、表面标志和免疫功能等方面的不同,可分为T细胞、B细胞和NK细胞三类;
2、T淋巴细胞随血循环到胸腺,在胸腺激素等的作用下成熟,而B细胞在骨髓中分化成熟。当受抗原刺激后,T淋巴细胞即转化为淋巴母细胞,再分化为致敏T淋巴细胞,参与细胞免疫,其免疫功能主要是抗胞内感染、瘤细胞与异体细胞等;
3、而B淋巴细胞是先转化为浆母细胞,再分化为浆细胞,产生并分泌免疫球蛋白(抗体),参与体液免疫,其功能是产生抗体,提呈抗原,以及分泌细胞内因子参与免疫调节;
4、NK细胞不依赖抗原刺激而自发地发挥细胞毒效应,具有杀伤靶细胞的作用。
参考资料:网络-外周血单个核细胞
3、单个核细胞提取的最佳方法是什么?
利用密度梯度离心的原理,用ficoll液或precoll液分离单个核细胞。
(一)Ficoll分层液法
是一种单次密度梯度离心分离法。聚蔗糖-泛影葡胺是一种较理想的细胞分层液,其主要成分是一种合成的蔗糖聚合物称聚蔗糖(商品名为Ficoll),分子量为40kD,具有高密度、低渗透压、无毒性的特点。高浓度的Ficoll溶液粘性高,易使细胞聚集,故通常使用60g/L的低浓度溶液,密度为1.020,添加比重为1.200的泛影葡胺(urografin)以增加密度。国外常用商品Isopaque或Hypaque,故又称Ficoll-Hypaque分层液,将适量340g/L泛影葡胺加入Ficoll溶液中即可配制成密度合适分层液。分离人外周淋巴细胞以密度为1.077±0.001的分层液最佳,因为人的红细胞密度为1.093,粒细胞密度为1.092,单个核细胞在1.076~1.090之间。而不同动物血中的单个核细胞对分离液的密度要求各不相同,如小鼠为1.088,马为1.090。分离时先将分层液置试管底层,然后将肝素化全血以Hanks液或PBS液作适当稀释后,轻轻叠加在分层液上面,使两者形成一个清晰的界面。水平式离心后,离心管中会出现几个不同层次的液体和细胞带。红细胞和粒细胞密度大于分层液,同时因红细胞遇到Ficoll而凝集成串钱状而沉积于管底。血小板则因密度小而悬浮于血浆中,唯有与分层液密度相当的单个核细胞密集在血浆层和分层液的界面中,呈白膜状,吸取该层细胞递经洗涤高心重悬。本法分离单个核细胞纯度可达95%,淋巴细胞约占90%~95%,细胞获得率可达80%以上,其高低与室温有关,超过25℃时会影响细胞获得率。
(二)Percoll分层液法
这是一种连续密度梯度离心分离法。Percoll是一种经聚乙烯吡喀烷酮(PVP)处理的硅胶颗粒,对细胞无毒性。利用Percoll液经高速离心后形成一个连续密度梯度的原理,将密度不等的细胞分离纯化。用Percoll原液(密度1.135)与约等量双离子强度的磷酸缓冲液均匀混合,高速离心后,使分层液形成一个从管底到液面密度逐渐递减的连续密度梯度,再将已制备的单个核细胞悬液轻轻叠加在液面上,低速离心后,便得四个细胞层。表层为死细胞残片和血小板,底层为粒细胞和红细胞,中间有两层,上层富含单个核细胞(75%),下层富含淋巴细胞(98%)。该法是纯化单核细胞和淋巴细胞的一各较好的方法,但操作流程较长,手续较多。
目前比较常用ficoll分层液法
4、单个核细胞分离的原理请问单个核细胞分离的原理是什么啊
利用密度梯度离心,将不同的细胞按照细胞内颗粒、细胞大小等分层。
5、骨髓干细胞的分离
骨髓抽取及骨髓干细胞的分离纯化:患者在无菌条件下从髂后上棘进行穿刺,分不同部位抽取骨髓l0~20 mL,置于肝素化的无菌离心管中,骨髓离心取出脂肪层
6、如何分离外周血单个核细胞
外周血单个核细胞可以用来做哪些实验
外周血单个核细胞即外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞和单核细胞。体外检测淋巴细胞首先要分离外周血单个核细胞,目前主要的分离方法是Ficoll-hypaque(葡聚糖-泛影葡胺)密度梯度离心法,因为血液中各有形成分的比重存在差异最多12天,但需要刺激。 PBMC(外周血单个核细胞)是原代细胞,单纯在体外培养是养不活PBMC的,最多活几天,细胞肯定是慢慢死掉的。齐氏生物建议您要用细胞因子刺激PBMC做实验就直接使用刚分离得到的PBMC,分离到PBMC后直接加刺激,不要去单纯在体外培养它。
7、骨髓单个核细胞分离,目的用于RNA的提取
用淋巴细胞分离液就可以了。天津生产的,90元一瓶,200毫升。
1 骨髓液3毫升,用3毫升PBS稀释混匀;
2 平铺于6毫升淋巴细胞分离液液面上,保持界面清晰;
3 2000转/分水平离心30分钟;
4 1毫升针头吸取中间云雾层;
5 用PBS洗涤两次。
骨髓液用抗凝管收集就可以了,不要放到4度冰箱,避免溶血;淋巴细胞分离液使用前室温平衡;离心机必须为水平离心,不要突然刹车,应使速度缓慢下降;骨髓液和淋巴细胞分离液必须保持界面清晰。