骨髓细菌培养标本采集方法

1、细菌培养 空气标本如何采集

把培养基暴露在该空气中

2、细菌培养的方法有哪些？

细菌的培养方法
根据培养细菌的目的和培养物的特性培养方法分为一般培养法,二氧化碳培养法和厌氧培养法三种.
1. 一般培养法 将已接种过的培养基,置37℃培养箱内18-24小时,需氧菌和兼性厌氧菌即可于培养基上生长.少数生长缓慢的细菌,需培养3-7天直至一个月才能生长.为使培养箱内保持一定湿度,可在其内放置一杯水.培养时间较长的培养基,接种后应将试管口塞棉塞后用石腊凡士林封固,以防培养基干裂.
2. 二氧化碳培养法 某些细菌,如牛流产布氏杆菌和胎儿弧菌等需要在含有10%二氧化碳的空气中才能生长,尤其是初代分离培养要求更为严格.将已接种的培养基置于二氧化碳环境中进行培养的方法即二氧化碳培养法,常用方法有以下几种:
(1) 二氧化碳培养箱 可将已接种的培养基直接放入箱内孵育,即可获得二氧化碳环境.
(2) 烛缸法 将已接种的培养基,置于容量为2 000ml的磨口标本缸或干燥器内.缸盖或缸口处均需涂以凡士林,然后点燃蜡烛直立置入缸中,密封缸盖.待燃自行熄灭时,容器内约含5-10%的CO2 容器置37℃培养.
(3) 重碳酸钠-盐酸法 每升容积的容器内,重碳酸钠与盐酸按0.4g与3.5ml的比例,分别将两种药各置一器皿内(如平皿内),连同器皿置于标本缸或干燥器内,盖严后使容器倾斜,两种药品接触后即可产生二氧化碳.
3. 厌氧培养法 目前常用的厌氧培养方法有厌氧罐法,气袋法及厌氧箱三种.
(1) 厌氧罐法 是目前应用较广泛的一种方法,共分为以下几种.
抽气换气法:该法适用于一般实验室,其特点是较经济并可迅速建立厌氧环境.标本接种后,将平板放入厌氧罐,拧紧盖子,用真空泵抽出罐中空气,使压力真空表至-79.98KPa,停止抽气,充入高纯氮气使压力真空表指针回0位,连续反复3次,最后在罐内-79.98KPa的情况下,充入70%的N2 ,20%H2 ,10%CO2 (有人改用20%CO2 及80%H2 ,亦可获得好结果).罐中需放入冷催化剂钯粒,可催化罐中残余的O2 和H2 化合成水.同时罐中应放有美蓝指示管,美蓝在有氧的环境下呈蓝色,无氧时为红色.临用前首先将美蓝煮沸使变成无色,放入罐中先呈浅蓝色,待罐中无氧环境形成,美蓝即可持续无色.
气体发生袋法:气体发生袋系由锡箔密封包装,其中含有两种药片,一种为含枸椽酸和重碳酸氢钠的药片,另一种是含有硼氢化钠的药片.前者遇水放出二氧化碳,后者可释放氢.使用时在袋的右上角剪一小口,灌进10ml蒸馏水,立即放入含有钯粒,指示剂及平板培养基的厌氧罐中,拧紧盖子经2-3分钟后,可感到盖子微热并有少量水蒸气出现.密封后1小时左右罐中的O2 的含量可低于<1%.
(2) 气袋法 此种方法不需要特殊设备,操作简单,使用方便,不但实验室中可用,而且外出采样,现场接种也可用.原理与气体发生袋完全相同,只是采用塑料袋代替了厌氧罐,气袋为一透明而密闭的塑料袋,内装有气体发生安瓿,指示剂安瓿,含有催化剂的带孔塑料管各一支.其操作方法为首先将接种的平板培养基放入袋中,用弹簧夹夹紧袋口,然后用手指压碎气体安瓿,20分钟后再压碎指示剂安瓿,如果指示剂不变蓝色,说明袋内达到厌氧状态,即可放入37℃进行培养.
(3) 厌氧培养箱 使用之前须仔细检查厌氧装备有无漏气等问题,以及催化剂,指示剂质量等.使用时严格遵守操作规程,保证箱内气体比例合理.

3、细菌培养的方法有哪些

根据培养细菌的目的和培养物的特性培养方法分为一般培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法三种。

1、一般培养法：将已接种过的培养基,置37℃培养箱内18－24小时,需氧菌和兼性厌氧菌即可于培养基上生长。少数生长缓慢的细菌，需培养3－7天直至一个月才能生长。

为使培养箱内保持一定湿度，可在其内放置一杯水。培养时间较长的培养基，接种后应将试管口塞棉塞后用石腊凡士林封固，以防培养基干裂。

2、二氧化碳培养法：某些细菌，如牛流产布氏杆菌和胎儿弧菌等需要在含有10％二氧化碳的空气中才能生长，尤其是初代分离培养要求更为严格。将已接种的培养基置于二氧化碳环境中进行培养的方法即二氧化碳培养法，

3、厌氧培养法：常用的厌氧培养方法有厌氧罐法、气袋法及厌氧箱三种。

(3)骨髓细菌培养标本采集方法扩展资料：

培养时应根据细菌种类和目的等选择培养方法、培养基，制定培养条件（温度、pH值、时间，对氧的需求与否等）。

一般操作步骤为先将标本接种于固体培养基上，做分离培养。再进一步对所得单个菌落进行形态、生化及血清学反应鉴定。培养基常用牛肉汤、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、血液等和某些细菌所需的特殊物质配制成液体、半固体、固体等。

一般细菌可在有氧条件下，37℃中放18～24小时生长。厌氧菌则需在无氧环境中放2～3天后生长。个别细菌如结核菌要培养1个月之久。

通过日常管理、检测、检查，了解光合细菌的生长情况，就可以结合当时环境条件的变化进行分析，找出影响光合细菌生长繁殖的原因，采取相应的措施。影响光合细菌生长的原因很多，内因是菌种是否优良，外因是光照、温度、营养、敌害和厌气程度等。

温度、光照和pH值都能影响着光合细菌的生长，而且温度、光照和pH值之间是互相制约的，温度与光照的强弱是对立统一的，所以光合细菌生长的最适条件应是互应的，即温度高，光照应弱；温度低，光照应强。

如果是温度高，光照强，pH值就会迅速升高，培养基产生沉淀，抑制光台细菌的生长；如果温度低，光照弱，光合细菌得不到最佳能源，生长速度也慢。经试验得出光合细菌生长的最适条件是：

①温度15～20℃时，光照30000～50000lx，培养基pH值为7.0；

②温度25～30℃时，光照为3000～5000lx，培养基的pH值为7.0。

4、医考问答提：骨髓标本采集如何穿刺？

骨髓标本大部分采用穿刺法吸取，骨髓穿刺部位选择一般要从以下几个方面考虑：
①骨髓腔中红骨髓丰富；
②穿刺部位应浅表、易定位；
③应避开重要脏器. .
临床上常用的穿刺部位包括胸骨、棘突、髂骨、胫骨等处 髂骨后上棘此处骨皮质薄，骨髓腔大，进针容易，骨髓液丰富，被血液稀释的可能性小，故为临床上首选的穿刺部位

5、浅谈如何正确采集血培养标本

血培养采血时间应在患者接受抗生素治疗之前，患者寒战时或发热初期采血。超过发热峰值后，病原菌逐渐被机体免疫系统清除，从而降低检出率。血培养采血部位宜采用外周静脉血，不建议采用动脉血或通过血管内导管采血。只有在怀疑导管相关性血流感染时，可以分别通过导管和外周静脉采取相同量的血标本，同时送细菌室进行培养。多次血培养阴性，仍发热不退或全身感染症状明显但不能明确感染来源时，可考虑采取骨髓标本。通常首先采用70%异丙醇或乙醇消毒穿刺部位皮肤，待干后，用碘液或碘伏（或2%氯己定异丙醇液）由内至外擦拭，待其完全干后，再用70%乙醇脱碘。严格执行此三步消毒后，可行静脉穿刺采血。对碘过敏的患者或儿童，采用70%异丙醇或乙醇消毒60秒，待穿刺部位乙醇挥发干燥后穿刺采血。采血量的多少对检出血流感染的病原菌非常重要。通常的采血量为培养基的1/10~1/5，也可根据厂家的建议确定采血量。对于成人患者或体重在40kg以上者，通常按每个部位采集15~20ml血液，2个部位共采集30~40ml血液，2个部位的最低总采血量不能少于20~30ml。对于新生儿及1岁以下体重低于4kg的儿童患者，一次抽血0.5~1.5ml，不必采两套血;对于1~6岁儿童，按每年龄增加1岁，增加1ml计算采血量，如3岁儿童，2个部位共采血3ml，每个部位各采血1.5ml；对于体重在15~40kg的儿童，共采血10~20ml，每个部位采集5~10ml。血培养瓶的选择：一次静脉穿刺采取的血液分别注入需氧瓶和厌氧瓶进行培养，即完整的“一套”血培养。同时进行需氧和厌氧培养可以提高阳性培养率，缩短阳性报警时间。采血注入厌氧瓶时，注意勿将注射器内的空气注入瓶内，否则会破坏瓶内的无氧状态。可采取先注入需氧瓶在注入厌氧瓶的方法。对于已接受抗生素治疗的患者，应使用含树脂或活性炭的培养瓶以提高检出率。对于儿童患者应采用儿童瓶。采血次数：对怀疑血流感染患者应至少从2个部位分2次采集血液标本进行培养，以提高阳性培养率；而且2次或2次以上血培养结果可以帮助排除污染的可能。采血间隔时间：①急性败血症或骨髓炎、脑膜炎、肺炎、肾盂肾炎需要立即进行抗菌治疗时，应在启动治疗前，自不同部位采取2套血液进行血培养；②对于不明原因发热，亚急性细菌性心内膜炎或菌血症、真菌血症，可于24小时内自不同部位采集2~4t套血培养标本，每次相隔至少3小时；③对怀疑急性感染性心内膜炎的患者，应在1~2小时内，自3个部位采集3套血培养；④儿童患者，应尽早采血进行血培养。需注意的是，如同时为患者使用多个真空采血管，血培养（黄色）管须首先使用。检测肝功须采集空腹静脉血（禁食8h~14h），可用红色管、绿色管、浅绿色管、金黄色管，不同的采血管按说明书要求使用。静脉血标本采集程序：1、收取检验申请单并审核申请单信息，审核合格后，与患者交流、辨别患者状态，确认患者是否按规定限制饮食，以及是否对乳胶敏感；2、准备材料，指导患者做好体位准备，扎好止血带，找好采血静脉部位，戴好手套；3、穿刺点消毒，静脉穿刺，嘱患者松拳，并使用装或未装特殊抗凝剂真空采血管采集静脉血并混匀，松开止血带，棉签压迫伤口（或摆放纱垫并扎绷带）；4、移除穿刺针，并将穿刺针放入利器盒内，嘱咐患者压迫穿刺点，标记试管并注明采集时间，立即送至相应实验室检测。

6、如何正确采集血培养标本

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7、血培养标本的采血时间和部位有什么要求？

二．采血时机
1．尽可能在抗菌药物使用前；
2．对已经使用抗菌药物的病人，最好在下次用药前采集；
3．寒战和发热初起时采血可提高培养阳性率；
4．怀疑血流感染时应尽早采血，不要强调体温超过39℃才抽血，而错过时机。
三、采集方法
1．手卫生：洗手或手消毒。
2．准备血培养瓶：根据检验申请单，选择合适的血培养瓶，血培养瓶外观和种类参照各公司提供的说明书，检查血培养瓶有无破损、保质期等，用75%酒精消毒血培养瓶塞，作用60s，待干。
3．皮肤消毒：按常规消毒穿刺部位皮肤(用蘸有消毒液的棉签，以穿刺点为中心向外螺旋式消毒穿刺部位皮肤两遍，同时旋转棉签，保证穿刺点及周围皮肤无菌状态，防止皮肤寄生菌或环境引起的污染)，消毒范围为8×10cm，待干。
4．持穿刺针按常规方法刺入静脉，另一头刺入相应血培养瓶内，利用瓶内真空抽取血标本，如用注射器无菌穿刺取血后,勿换针头直接注入血培养瓶。
5．建议每套血培养同时接种至需氧瓶和厌氧瓶，有利于微需氧菌和厌氧菌的检出。当厌氧菌感染不能除外的病人，如腹部手术合并感染的病人，必须同时做厌氧菌血培养。如果不能满足推荐的采血量时，应首先满足需氧瓶；婴幼儿血培养一般只抽一瓶需氧瓶进行培养，无需常规做厌氧瓶。
6．血液注入血培养瓶后轻摇瓶子以防血液凝固。
四．标本运送
1．已采集的标本应视为潜在性生物危险品，均应置于防漏、防渗、相对密封的容器中收集、
存储与转运。
2．血培养采样结束后应由专人立即送至微生物实验室核收，一般不得超过2小时；如因某种原因不能及时送检，应将已采集好的血液培养瓶放在室温，切勿放入冰箱内冷藏或冷冻。
五．注意事项
1．标本采集和运送均应在防止污染的原则一下认真进行。
2．填写申请单时，一定要标明病人相关信息、每瓶标本采血时间、来源和抗菌药物使用情况。
3．怀疑血流感染(BSI)时，独立的外周静脉无菌采集2套血培养，每套不少于10ml（1套血培养定义：是指一次静脉采血，不论被接种在1个还是多个血培养瓶内），最好为20ml血液，每瓶不少于5ml，婴幼儿采血量一般2ml～5ml（每瓶不少于2ml），各自做好标记。
.4．当怀疑骨髓炎、脑膜炎、肺炎和肾盂肾炎合并菌血症时，在抗菌药物使用前从不同部位抽取2套血培养，两个来源的采血时间必须接近（建议≤5分钟），各自做好标记。
5．对不明原因的发热、亚急性心内膜炎，由三个