瑞氏染色观察骨髓细胞

1、瑞氏染色血涂片的步骤

(1)铅笔作标记，将血涂片平放在染色架copy上，蜡笔划线可防液体外溢。
(2)血涂片自然干燥后，滴瑞氏染百液（A液）数滴覆盖血片，染约1min。
(3)滴加稍多体积的缓冲液度，用吸耳球将其与染液吹匀，染约5分钟。
(4)慢慢摇动知玻片，然后用细的自来水流从玻片的一侧冲去染液（不要先倒去染液再冲水），待血片自道然干燥后(或用滤纸吸干)，即可镜检。

2、瑞氏染色步骤？

瑞氏染色法：

为了观察细胞内部结构，识别各种细胞及异常变化，血涂片必须进行染色。
血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变而来。目前常用瑞氏染色法。

【目的】掌握血涂片的染色方法。

【原理】
把已制成的血细胞分布均匀的薄膜涂片，
用复合染料染色。
其着色的原理包括物理
吸附及化学亲和作用。
不同种类的细胞及同一细胞的不同成分及不结构，
对酸性及碱性染料
的结合能力不同，因而使不同种类的细胞染成不同的颜色，呈现各自的特点。

【器材】我们今天的器材是：载玻片、推片、吸耳球、显微镜。

【试剂】

1
瑞氏染料

由酸性染料伊红(eosin,E)和碱性染料亚甲蓝(methylene
blue,M|+)组成的复合染料。

★亚甲蓝(又名美蓝)为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构，通常为氯盐，即氯化美蓝。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青)。

★伊红通常为钠盐。

★将适量的伊红，美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。

甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红ME，使其解离为M+和E+，后两者可以选择性地吸附于血细胞内的不同成分而使其着色；
二是具有很强的脱水作用，可固定细胞的形态，当细胞发生凝固时，蛋白质被沉淀为颗粒状或者网状，增加细胞结构的表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。

2
瑞氏染液的配制：取瑞氏染料1.0g、甲醇600ml、甘油。

操作如下：将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢地研
磨(至少半小时)，以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。再加15ml甘油，密闭保存。这只就是我们配制的I液。

说明：新鲜配制的染液偏碱，染色效果较差，经在室温下贮存一定时间，美蓝逐渐转变为天青B后方可使用，这一过程称染料成熟。放置时间愈久，天青愈多，染色效果也就越好。但必须盖严瓶口，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油3ml，防止甲醇挥发或氧化，同时也可使血细胞染色较清晰，但我们所用的甲醇必须纯净。

II液：又称磷酸盐缓冲液(PH6.4-6.8)，包含磷酸二氢钾0.3g，磷酸氢二钠0.2g、蒸馏水加至1000ml。
配好后用磷酸盐溶液校正PH，如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。
也可用蒸馏水代替。

3
染色：①血涂片自然干燥后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢。随后将玻片平置
于染色架上，滴加染液3-5滴，使其盖满血涂片，大约1分钟后，滴加等量或稍多的II液，
用吸耳球轻轻混匀。
②冲洗：染色5-10分钟用流水染液，待干。

③结果观察，
将干燥后的血涂片置显微镜下观察。
先用低倍镜观察血涂片，
再用油镜。

3、骨髓细胞染色常用什么方法，各是用于何种检测。

骨髓细胞内外铁染色,是进行贫血分类的常用组织化学染色方法,一般均采用普鲁士兰染色法,该法虽操作简便,但若掌握不好,常使玻璃上沉积大量污染铁,无法判定结果,我们曾查阅多种材料,对该项试验的一些细节问题均无详细介绍。最近我们参照各家材料,经过多次试验从玻片处理试剂配制、试验的时间、温度、最后漂洗的手法复染时间的控制等步骤上,对细胞内外铁染色的方法进行探讨,摸索出了一套较满意的染色方法,现介绍如下。

【作者单位】： 黑龙江省宝泉岭农场医院
【关键词】： 骨髓细胞 铁染色 染色方法 组织化学 试剂配制 玻片处理 氰化钾 贫血分类 普鲁士兰 染色法
【分类号】：R361
【正文快照】：
骨髓细胞内外铁染色,是进行贫血分类的常用组织化学染色方法。一般均采用普鲁士兰染色法,该法虽操作简便,但若掌握不好,常使玻璃上沉积大量污染铁,无法判定结果,我们曾查阅多种材料,对该项试验的一些细节同题均无详细介绍。最近我们参照各家材料,经过多次试验从玻片处理试剂

4、骨髓细胞检查报告中的化学染色中的POX阳性13%是指什么?

POX是细胞的过氧化物酶染色,染色后,在显微镜下观察,细胞中有蓝黑色颗粒的为阳性,POX阳性13%就是指呈阳性的细胞占总细胞数的13%

5、为什么显微镜观察血细胞是要染色

染色的目的是使细胞的主要结构,如细胞质、细胞核、细胞器等染上不同的颜色,便于显微镜下观察.
血细胞又称“血球”,主要含下列三个部分：红细胞、白细胞、血小板.
红细胞呈双凹圆盘状,中央较薄,周缘较厚,故在血涂片标本中呈中央染色较浅、周缘较深,无细胞核.白细胞显色各异,如中性粒细胞的胞质染成粉红色,含有许多细小的淡紫色及淡红色颗粒；嗜酸性粒细胞染成桔红色；嗜碱性粒细胞着色较浅.血小板是红骨髓巨核细胞细胞质的脱落物,本身不是细胞.在血涂片中,血小板常呈多角形,聚集成群.血小板中央部分有着蓝紫色的颗粒,称颗粒区（granulomere）；周边部呈均质浅蓝色,称透明区（hyalomere）.
【瑞氏染色结果】在正常情况下,血膜外观染成淡紫红色.显微镜下,红细胞呈粉红色,在厚薄均匀处,略有碟状感；白细胞浆中颗粒清楚,并显示出各种细胞特有的色彩.细胞核染紫红色,核染色质结构清楚.
染色偏酸,则红细胞和嗜酸性粒细胞颗粒偏红,白细胞核呈淡蓝色或不着色.染色偏碱,则所有细胞呈灰蓝色,颗粒深暗.嗜酸性颗粒可染成暗褐色,甚至紫黑或蓝色.中性颗粒偏粗、偏碱,染成紫黑色,血膜厚的部位呈绿色.

6、瑞氏染色的步骤是什么?

操作步骤：

1.滴加瑞氏吉姆萨A液(约0.5ml-0.8ml)涂片上，并让染液覆盖整个标本染色1min；

2. 再将瑞氏吉姆萨B液加于A液上面（滴加量为A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3-10min。（染血片时间可略短，染骨髓片时间应视细胞量多少而异）

3.水洗（冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上），干燥、镜检。

注意事项：

1. 染色时间须视何种标本，涂片厚度，有核细胞多少，何种细胞及室温等而定；通常染血液涂片时滴加B液后染2-4分钟，染骨髓片则应不少于8分钟；气温较低时，可适当延长染色时间。染色结果如出现嗜酸性粒细胞变碱，则考虑是否染色时间太长所致。

2.做骨髓涂片时，因为骨髓纤维蛋白含量较高，凝固较快，所以涂片过程要快。骨髓不可用草酸盐抗凝，否则会使血细胞核变形，核染色质致密，胞浆空泡形成，出现草酸盐结晶。

3.染液量需充足，勿使染液蒸发干燥，以防染料沉着于涂片上。

4.做细胞染色时，当天气寒冷或湿度较大时，应于37℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小或在染色时脱片。

5.染料放置时间越长，染色效果越好。

6. 本试剂应由专业人员使用。

拓展资料

Wrfeht和Giemsa都于1902年报告了各自的新的血液学染色剂，其主要特点是在制备多色性亚甲蓝（主要指天青B）方面做了改进，使血细胞和疟原虫着色较好，操作简便。

上述染色法均是含伊红和亚甲基蓝衍生物的复合染料。在临床检验工作中，瑞氏染色法常用于血液、其他体液、分泌物和排泄物涂片中各种细胞的染色，有利于在显微镜下观察细胞形态及对细胞进行分类检查。

【染色原理】

瑞氏染色分两相进行，第一相是酸性染料伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒等结合；碱性染料天青B与细胞中的酸性物质如核染色质（chro－matin）、特异中性颗粒、血小板及富含核蛋白的胞质结合。第二相是天青B和伊红在适宜条件下形成紫色的天青B一伊红复合物（azure B－eosin complex），这种复合物是形成Romanowsky－Giemsa效应的基础。

Romanowsky－Giemsa效应包括：①白细胞核染色质染成紫色，疟原虫的染色质染成红色；②中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区染成紫色；③产生本效应必须有两种染料参与，一种是天青B，另一种是伊红。

Wittekind（1985）指出，天青B与DNA分子中的磷酸基结合，而伊红既与DNA分子中的阳离子部位结合，又与天青B结合，与天青B的结合力来源于电子供一受体的电子转移力，天青B的甲氨基（－NHCHs）与伊红分子中的叛基（－COOH）间形成氢键。因此，天青B是噻嗪类染料中能与伊红形成复合物的最佳选择，因为拥有四个甲基侧链的亚甲蓝不能以氢键与伊红结合。

甲醇除作为染料的溶剂，能将瑞氏染料解离成带正电荷的天青B和带负电荷伊红外，因其具有脱水力，还可将细胞固定为一定形态，并使蛋白沉淀为颗粒状、网状结构，增加细胞与染料的接触表面，增强染色效果。

细胞中的各种有机物质（特别是蛋白质）、染料等对环境的州值非常敏感。如环境偏酸，氢离子增多，降低对碱性染料的亲和力；增强伊红着色，出现异常红染；相反，则可出现异常蓝染。最佳环境应维持在PH值6 4～6、8.因此，必须使用缓冲溶液。

参考资料：

网络_瑞氏染色

瑞氏染色原理及方法_医学教育网

7、为什么显微镜观察血细胞是要染色？

染色的目的是使细胞的主要结构，如细胞质、细胞核、细胞器等染上不同的颜色，便于显微镜下观察。
血细胞又称“血球”，主要含下列三个部分： 红细胞、白细胞、血小板。
红细胞呈双凹圆盘状，中央较薄，周缘较厚，故在血涂片标本中呈中央染色较浅、周缘较深，无细胞核。白细胞显色各异，如中性粒细胞的胞质染成粉红色，含有许多细小的淡紫色及淡红色颗粒；嗜酸性粒细胞染成桔红色；嗜碱性粒细胞着色较浅。血小板是红骨髓巨核细胞细胞质的脱落物，本身不是细胞。在血涂片中，血小板常呈多角形，聚集成群。血小板中央部分有着蓝紫色的颗粒，称颗粒区（granulomere）；周边部呈均质浅蓝色，称透明区（hyalomere）。

【瑞氏染色结果】在正常情况下，血膜外观染成淡紫红色。显微镜下，红细胞呈粉红色，在厚薄均匀处，略有碟状感；白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩。细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。
染色偏酸，则红细胞和嗜酸性粒细胞颗粒偏红，白细胞核呈淡蓝色或不着色。染色偏碱，则所有细胞呈灰蓝色，颗粒深暗。嗜酸性颗粒可染成暗褐色，甚至紫黑或蓝色。中性颗粒偏粗、偏碱，染成紫黑色，血膜厚的部位呈绿色。

8、瑞氏染色是细胞化学染色的一种吗？

瑞氏染色是细胞化学染色的一种。其原理为：既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。
细胞化学染色是根据化学反应的原理，应用涂片染色的方法，观察细胞的化学成分及其变化的重要方法。
从上面两者的对照就可知道瑞氏染色是细胞化学染色的一种。

9、骨髓片、血涂片主要依据瑞氏染色观察细胞，为什么还需要其他化学染色？比如铁染色、过氧化物酶染色等。

骨髓片、血涂片主要依据瑞氏染色观察细胞，为什么还需要其他化学染色？比如铁染色、过氧化物酶染色

10、瑞氏染色法的详细介绍

1 ．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（ Methvlem blue ）和酸性染料黄色伊红（ Eostm Y ）合称伊红美蓝 染料即瑞氏 （美蓝－伊红Y）染料。
伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊红为酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。
2 ．用 甲醇作瑞氏 染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：
（ 1 ）甲醇使瑞氏染料中美蓝（ M ）与伊红（ E ）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。
甲 醇
ME （瑞氏染料）—— —— → M + + E -
在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余 美蓝就可以 使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。
（ 2 ）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。
3. 瑞氏染液配制：
(1) 瑞氏染液配制：
瑞氏染料 830gm 或 1g
甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml
先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内， 用乳棒轻轻 敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到 研芝麻声 即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着，再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入 一 清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口，存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存 3 个月以上为佳。
(2) 缓冲液：
1) 缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察 pH 值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。 缓冲液须保持 一定的 pH 使染色稳定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏碱性染料可与缓冲液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使 pH 恒定。
2) 缓冲液配制（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：
配方 1 ： 配方 2 ：
1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml
1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml
H 2 O( 新鲜 ) 加至 1000ml
置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。
简易步骤介绍：
1、 取病料涂片、自然干燥
2、 滴加瑞氏染液染3分钟,使标本被其中甲醛所固定;
3、 加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动玻片,均匀静置5分钟;
4、 水洗、吸干、镜检。
5、 细菌染成蓝色，组织细胞胞浆红色，细胞核蓝色或紫色。