小鼠骨髓单核巨噬细胞的鉴定

1、请教：小鼠腹腔巨噬细胞提取的经验方法

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2、小鼠来源的巨噬细胞系RAW264.7细胞是什么？？用来做哪方面的研究比较适宜？

RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞. 此细胞株源自雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。专 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此属细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。 可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。 可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。 LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。用含4mM L-谷氨酰胺，4.5g/L 葡萄糖， 1.5g/L 碳酸氢钠的DMEM培养基，90%；胎牛血清 10%培养。

3、小鼠骨髓诱导巨噬细胞求助

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4、单核细胞和巨噬细胞表型一样吗,我分离组织，需要巨噬细胞，我怎么能把单核细胞和巨噬细胞分开？怎么区分呢

可以根据细胞表面抗原来区别：
建议参考
http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.pone.0008668

5、小鼠单核细胞RAW264.7的细胞生物学特征

目的观察小鼠单核／巨噬细胞RAW264．7的一般细胞生物学特征。方法用倒置相差显微镜观察细胞的形态特征，胎盘蓝染色细胞计数，绘制细胞生长曲线。半定量逆转录聚合酶链反应观察细胞3～2l天破骨细胞表型和功能基因表达谱变化。结果RAW264.7细胞形态以类圆形和不规则多边形为主，一般含l～2个核，有伪足，细胞胞体较小。细胞生长快，5～6天可汇合。RAW264．7细胞能表达成熟破骨细胞的表型标志基因如核因子KB受体活化子（RANK）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、基质金属蛋白酶9（MMP9）及骨吸收有关的功能基因如组织蛋白酶K（CaK）、整合素av（integrin av）等。RAW264。7细胞培养3～21天，上述基因的mRNA表达不随培养时间改变。结论RAW264．7具有破骨细胞特征性基因表达谱，是一种较好的破骨前体细胞模型。

6、RAW 264.7小鼠巨噬细胞是小鼠单核巨噬细胞白血病细胞吗？想在上海细胞库买，不知道这两者是一样的吗？

应该是的，atcc细胞库网站上的描述是macrophage; Abelson murine leukemia virus transformed。以及这个细胞我养过，传代不能用胰酶消化。。。密度也不能高。。。

7、浆细胞、巨噬细胞、单核细胞、单核—巨噬细胞都有什么区别和联系啊

一、区别：

1、功能上的区别：

浆细胞具有合成、贮存抗体即免疫球蛋白（immunoglobulin）的功能，参与体液免疫反应。免疫球蛋白主要在粗面内质网池内形成，用免疫荧光技术已证实注射一种抗原到机体后，相应的抗体首先在浆细胞的细胞质中出现。

巨噬细胞（英语：Macrophages，缩写为mø[1]）是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，而单核细胞又来源于骨髓中的前体细胞。

巨噬细胞和单核细胞皆为吞噬细胞，在脊椎动物体内参与非特异性防卫（先天性免疫）和特异性防卫（细胞免疫）。

它们的主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行噬菌作用（即吞噬以及消化），并激活淋巴球或其他免疫细胞，令其对病原体作出反应。

单核细胞，目前认为它是巨噬细胞和树突状细胞的前身，具有明显的变形运动，能吞噬、清除受伤、衰老的细胞及其碎片。单核细胞还参与免疫反应，在吞噬抗原后将所携带的抗原决定簇转交给淋巴细胞，诱导淋巴细胞的特异性免疫性反应。

单核巨噬细胞功能：单核-巨噬细胞是机体重要的免疫细胞，具有抗感染、抗肿瘤和免疫调节等重要作用。

（1）抗感染：非特异性吞噬杀伤多种病原微生物，是机体非特异性免疫防御中的重要细胞。

（2）提呈抗原、启动免疫应答：在特异性免疫应答中，绝大多数TD抗原（胸腺依赖抗原）都需经巨噬细胞吞噬和加工处理，并与其表面的MHC分子形成抗原肽-MHC复合物，表达在细胞膜表面，提呈给T细胞。

巨噬细胞表面有很多黏附分子，可与T细胞表面的协同刺激分子受体结合，产生协同刺激信号，诱导T细胞的活化，启动免疫应答。

（3）抗肿瘤：巨噬细胞被某些细胞因子如IFN-γ激活后能有效地杀伤肿瘤细胞，是参与免疫监视的重要效应细胞。④免疫调节：在特异性免疫应答中，巨噬细胞可分泌释放多种细胞因子，参与免疫调节。

2、增植方式上的区别：

浆细胞（plasmacell）B淋巴细胞在抗原刺激下分化增殖而形成的一种不再具有分化增殖能力的终末细胞。在分化过程中获得特有的浆细胞抗原，这是浆细胞区别于淋巴细胞的主要膜标志。浆细胞在体内的分布与淋巴细胞大致相似，主要分布在淋巴结和脾脏。

B细胞接受抗原信息刺激后，最初形成体积较大的浆母细胞。在浆母细胞的细胞质内有许多平行排列的扁平状的粗面内质网。而由浆母细胞进一步分化增殖而成的浆细胞的粗面内质网内，充满细小的絮状物质，即罗氏小体，是由免疫球蛋白分子组成。

故浆细胞可合成及分泌抗体。科学家认为，由单个B细胞增殖分化成的浆细胞系，仅能合成一种类型的免疫球蛋白分子。正常机体中有许多不同的免疫活性细胞克隆，故可发展成不同的浆细胞系，并合成针对各种抗原的抗体。

巨噬细胞，当单核细胞经血管的内皮细胞层进入一已受损的组织时（这过程被称为白血球外渗作用），它经过一连串转变以成为巨噬细胞。

单核细胞会因化学趋向性而被化学物质的刺激吸引至受损处，这些刺激包括受伤细胞、病原体、由肥大细胞和嗜碱性细胞所释放的组织胺，以及由已于该处的巨噬细胞释出的细胞因子。在某些地方，如睾丸，巨噬细胞已被证实会透过增殖以移殖于此。

与寿命较短的中性粒细胞不同，其寿命可达数个月至数年不等。

单核细胞（monocytes）是血液中最大的血细胞，也是体积最大的白细胞，是机体防御系统的一个重要组成部分。单核细胞来源于骨髓中的造血干细胞，并在骨髓中发育，当它们从骨髓进入血液时仍然是尚未成熟的细胞。

单核-巨噬细胞包括骨髓中的前单核细胞、外周血中的单核细胞、以及组织内的巨噬细胞(Mφ)。Mφ来源于血液中的单核细胞，而单核细胞又来源于骨髓中的前体细胞。

二、联系：

浆细胞由淋巴细胞分化而来，参与细胞免疫 单核细胞具有强大吞噬功能，能吞噬细菌 组织碎片 坏死细胞 寄生菌 抗原传递免疫信息，活化B T淋巴细胞，在特异免疫中起重要作用。 

单核细胞具有强大吞噬功能也称单核-巨噬细胞。 单核细胞游出血管壁到达组织，体积变大，吞噬能力更强，称作巨噬细胞 

(7)小鼠骨髓单核巨噬细胞的鉴定扩展资料：

浆细胞存在位置：

B细胞 在血液中B细胞约占淋巴细胞总数的15%。固定在B细胞膜表面的免疫球蛋白（主要是单体IgM和IgD）是抗原的特异性受体。当它们初次与某一个抗原接触而被致敏时，一部分B细胞即分化成熟为浆细胞，浆细胞即开始生成对该抗原特异的免疫球蛋白并将它们释放到周围的组织液中，这就是免疫抗体。

只有当某些调节性因子，如由辅助性T细胞所释放的淋巴因子和巨噬细胞释放的白细胞介素-1存在时，B细胞才能被抗原激活。浆细胞不再在血液中循环，在它们生存的2-3天时间里一直停留在组织中。浆细胞一般停留在各种淋巴结。

正常机体浆细胞存在在脾、淋巴结的相应组织结构处，浆细胞生成抗体并将它们释放到周围的组织液中，通过淋巴结血液通路开放的循环汇集成髓静脉，髓静脉进入小梁静脉，最后汇集成静脉出淋巴结

输入淋巴管经淋巴结后以输出淋巴管出淋巴结，故少部分抗体可直接进入淋巴。所以抗体先进入组织液，而不是直接分布在血浆中。抗体以开放于髓窦血液通路直接汇入静脉而进入血浆的。抗体可以分布在淋巴内。

浆细胞形态：

浆细胞直径10-20μm；核较小，占细胞的1/2以下，多偏于一侧，偶可见双核；染色质粗密、聚集成堆、常染成紫丁香色、不均匀，在近核处一边常伸出半月状淡染区；浆中偶见有空泡或有泡沫感。

原始浆细胞直径14-20μm；核较大，约占细胞2/3，圆或椭圆形，常偏于一侧；染色质细致、呈颗粒状，均匀分散或呈细网状。

核仁2-5个，淡蓝色，不显著。胞浆较其它原始细胞为多，深蓝而不透明，近核处着色较浅，无颗粒，偶可见到空泡。原始浆细胞在正常骨髓中极少见到，只有在多发性骨髓瘤和浆细胞白血病时才可大量存在，并有形态变异。

8、如何进行小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的消化及传代

5mM EDTA 消化，不需PBS 洗，吸弃原培养液，加入5mM EDTA 晃动消化1min 左右，吸弃，放置1min，加入新鲜培养液即可。
传代1：10~20传就行

9、请教外周血单核，巨噬细胞的分离和培养方法

博凌科为以前认为红细胞、粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等都是分化终末细胞.很难在体外培养生长或仅能短期培养而不能传代,但是近来技术的发展,有血细胞培养纯化的 报道.血细胞可从外周血中用梯度离心法获得,也可从脾脏中用机械法切碎过筛分离获得(尤其是淋巴细胞).从腹腔冲洗可获得较多的巨噬细胞.也可从骨髓中取 前体血细胞,然后加上促进单核/巨噬细胞分化和生长的细胞因子,从而诱导前体血细胞向所要的细胞方向分化.