1、求助流式细胞仪鉴定间充质干细胞的问题
间充质干细胞最早在骨髓中发现，随后还发现存在于人体发生、发育过程的许专多种组织中。目前, 我们能够从骨属髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉、肺、肝、胰腺等组织以及羊水、脐带血中分离和制备间充质干细胞，用得最多的是骨髓来源的间充质干细胞。但骨髓来源的间充质干细胞存在以下问题：随着年龄的老化，干细胞数目显著降低、增殖分化能力大幅度衰退；制备过程不容易质控；移植给异体可能引起免疫反应；取材时对患者有损伤，患者有骨髓疾病时不能采集，即使是健康供者，亦不能抽取太多的骨髓。这都限制了骨髓间充质干细胞临床应用，使得寻找骨髓以外其他可替代的间充质干细胞来源成为一个重要的问题。
2、如何取小鼠骨髓细胞
1、颈椎脱臼法处死小鼠(C57型小鼠)，放在75%酒精中侵泡3-5分钟后，拎出后将小鼠铺于超净台上一个消毒托盘上。
2、无菌提取小鼠的四肢骨，用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，用眼科剪小心剪开皮肤，并分离两下肢的皮肤，往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，这样可以游离出小鼠的两条下肢。
3、小心剥离肌肉，分别剪下Femurs（大腿骨）and Tibias（胫骨）,剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔。注意尽可能少的剪走骨髓腔。用纱布将骨头上的肌肉用纱布擦拭干净。
4、拿一支1ml的无菌注射器，每支吸取1mlHBSS液，并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。轻轻插入骨髓腔，冲洗骨髓腔以获得骨髓，一般用2-3ml培养基冲洗两次，可冲出绝大部分细胞。
5、过滤：用2OO目的滤网过滤，将滤网的中央插入到离心管里面25px处，然后用注射器吸取骨髓液，慢慢将骨髓液经滤网注入离心管中，去除残渣。
6、离心：将离心管放置离心机中离心10分钟（1350r/min）
7、去上清，加入1ml红细胞裂解液ACK，静置3分钟，再加9ml HBSS溶液，进行离心10分钟，弃上清。
8、用HBSS液洗涤骨髓细胞2次，室温，1350r/min离心10分钟。计数活细胞，用培养基调整细胞浓度至1X106个细胞/ml.
9、在试管中加入RPMI-1640培养基，然后再加入20ng/ml的细胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巯基乙醇，
10、吸取培养基加入到沉淀中混匀，24孔板铺板培养，每个孔1ml.
3、谁知道小鼠骨髓间充质干细胞的培养条件？
干细胞的培养条件比较高，一定要避免污染！血清要进行支原体检测，自配的培养基要进行污染测试。为了实验自己最好找现成的！可以根据自己的条件，尽量选用质量好的各种试剂。厚百提供。
4、骨髓间充质干细胞表面标志物cd45是单标还是双标
不同的干细胞有自己特异的细胞表面抗原，鉴定细胞的种类最准确直接的方法就是用流式细胞仪检测其表面抗原。
以骨髓间充质干细胞（MSC）为例，需要鉴定CD34、CD44、SH1等表面标志。除此之外，骨髓间充质干细胞还需要进行分化实验，以回证实其可以分化为骨、软骨、细胞。以上两条，即表面标志及分化实验没有问题，就可以确定培养的细胞为骨髓间充质干细胞。
不同的干细胞有不答同的表面标志及分化能力，所以MSC只是做为一个例子来说明。
5、如何提取小鼠骨髓细胞?
1、颈椎脱臼法处死小鼠(C57型小鼠)，放在75%酒精中侵泡3-5分钟后，拎出后将小鼠铺于超净台上一个消毒托盘上。
2、无菌提取小鼠的四肢骨，用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，用眼科剪小心剪开皮肤，并分离两下肢的皮肤，往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，这样可以游离出小鼠的两条下肢。
3、小心剥离肌肉，分别剪下Femurs（大腿骨）and Tibias（胫骨）,剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔。注意尽可能少的剪走骨髓腔。用纱布将骨头上的肌肉用纱布擦拭干净。
4、拿一支1ml的无菌注射器，每支吸取1mlHBSS液，并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。轻轻插入骨髓腔，冲洗骨髓腔以获得骨髓，一般用2-3ml培养基冲洗两次，可冲出绝大部分细胞。
5、过滤：用2OO目的滤网过滤，将滤网的中央插入到离心管里面25px处，然后用注射器吸取骨髓液，慢慢将骨髓液经滤网注入离心管中，去除残渣。
6、离心：将离心管放置离心机中离心10分钟（1350r/min）
7、去上清，加入1ml红细胞裂解液ACK，静置3分钟，再加9ml HBSS溶液，进行离心10分钟，弃上清。
8、用HBSS液洗涤骨髓细胞2次，室温，1350r/min离心10分钟。计数活细胞，用培养基调整细胞浓度至1X106个细胞/ml.
9、在试管中加入RPMI-1640培养基，然后再加入20ng/ml的细胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巯基乙醇，
10、吸取培养基加入到沉淀中混匀，24孔板铺板培养，每个孔1ml.
6、免疫组化鉴定骨髓间充质干细胞买什么试剂盒
单靠免疫组化的方法是不能定量，定性的。
Bone Mesenchymal Stem Cells 作为一个细胞群体，还没有发现有特定细胞表面marker. 对于那些可以代表自我更新和分化的marker, 也不清楚到底要发现哪一个的表达才能确定该细胞就是BMSC。
目前常用的方法，就是采用培养，colony-forming unit-fibroblasts (CFU-F)这个方法。一般BMSC可以24-48小时贴壁。
流式细胞计数，比如STRO-1，但是一般认为STRO-1阳性的细胞更趋向于造血干细胞，和BMSC简单区别还不是很清楚。
这里有个培养分化的产品
http://www.rndsystems.com/pdf/SC020.pdf
7、如何鉴定获得的细胞是间充质干细胞
?
8、小鼠骨髓间充质干细胞在正常生理条件下能否和成熟的T淋巴细胞接触
成熟的T淋巴细胞在免疫过程中也是可以通过血液和淋巴循环的吧？这样的话应该也会接触到骨髓间充质肝细胞