1、动物染色体标本制备的原理及主要步骤
1)动物的选择,一般用小鼠,其繁殖能力强,易于饲养.我们常用的是它们的骨髓细胞和精巢,因其分裂指数较高,不用体外培养就可以得到分裂中期的细胞.
2)秋水仙素用量要注意,太多或处理时间过长,会导致染色体的过分凝缩或着丝点裂解,最终会引起染色体形态不正常,甚至被破坏或溶解。
3) 低渗处理很关键。低渗液的量、处理时间均与细胞的数量有关。低渗过度,细胞会破裂;低渗不足则染色体在一起,分散不开。
4) 离心速度或离心时间也能影响染色体标本的制备。离心速度过大或离心时间过长,则会引起细胞破裂;反之,离心速度过小或离心时间过短,则细胞沉降不下来,则会引起大量细胞的丢失。
5) 固定液要随用随配,固定彻底后再打散细胞团块,否则细胞容易破碎,染色体分散亦受到影响。
6) 载玻片要预冷.冷却不够,则会影响染色体的附着和铺展。
7) 用吸管吹散细胞时用力必须尽量轻柔,用力过大则会造成细胞破裂,而染色体也会弥散在溶液中,在随后的离心中将会丢失。
8) 滴片时的高度很重要,高度过低细胞不会破裂;过高则染色体过于分散甚至丢失,无法辨别出染色体的准确数量。
2、动物染色体标本的制备与观察的实验过程中低渗不足或过度会出现什么问题
1)动物的选择,一般用小鼠抄,其繁殖能力强,易于饲养.我们常用的是它们的骨髓细胞和精巢,因其分裂指数较高,不用体外培养就可以得到分裂中期的细胞.
2)秋水仙素用量要注意,太多或处理时间过长,会导致染色体的过分凝缩或着丝点裂解,最终会引起染色体形态不正常,甚至被破坏或溶解.
3)
低渗处理很关键.低渗液的量、处理时间均与细胞的数量有关.低渗过度,细胞会破裂;低渗不足则染色体在一起,分散不开.
4)
离心速度或离心时间也能影响染色体标本的制备.离心速度过大或离心时间过长,则会引起细胞破裂;反之,离心速度过小或离心时间过短,则细胞沉降不下来,则会引起大量细胞的丢失.
5)
固定液要随用随配,固定彻底后再打散细胞团块,否则细胞容易破碎,染色体分散亦受到影响.
6)
载玻片要预冷.冷却不够,则会影响染色体的附着和铺展.
7)
用吸管吹散细胞时用力必须尽量轻柔,用力过大则会造成细胞破裂,而染色体也会弥散在溶液中,在随后的离心中将会丢失.
8)
滴片时的高度很重要,高度过低细胞不会破裂;过高则染色体过于分散甚至丢失,无法辨别出染色体的准确数量.
3、小鼠骨髓细胞染色体标本制备和观察实验报告
首先要提前2小时向小鼠注射秋水仙素,处死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理盐水,离心取细胞(离心管底部),再经低渗处理,染色,滴冰片,镜检。很麻烦,具体的你可以去图书馆查阅相关资料(动物染色体制备)。
4、制备良好的动物染色体标本应注意哪些问题?为什么?
1)动物的选择抄,一般用小鼠袭,其繁殖能力强,易于饲养.我们常用的是它们的骨髓细胞和精巢,因其分裂指数较高,不用体外培养就可以得到分裂中期的细胞.
2)秋水仙素用量要注意,太多或处理时间过长,会导致染色体的过分凝缩或着丝点裂解,最终会引起染色体形态不正常,甚至被破坏或溶解。
3) 低渗处理很关键。低渗液的量、处理时间均与细胞的数量有关。低渗过度,细胞会破裂;低渗不足则染色体在一起,分散不开。
4) 离心速度或离心时间也能影响染色体标本的制备。离心速度过大或离心时间过长,则会引起细胞破裂;反之,离心速度过小或离心时间过短,则细胞沉降不下来,则会引起大量细胞的丢失。
5) 固定液要随用随配,固定彻底后再打散细胞团块,否则细胞容易破碎,染色体分散亦受到影响。
6) 载玻片要预冷.冷却不够,则会影响染色体的附着和铺展。
7) 用吸管吹散细胞时用力必须尽量轻柔,用力过大则会造成细胞破裂,而染色体也会弥散在溶液中,在随后的离心中将会丢失。
8) 滴片时的高度很重要,高度过低细胞不会破裂;过高则染色体过于分散甚至丢失,无法辨别出染色体的准确数量。
5、制备骨髓细胞染色体标本是怎样的
因为在之前你得到的染色体都处于不同的分裂期,预固定是为了使这些细胞及其染色体都固定在当前所处的时期,便于观察。
6、小鼠骨髓细胞的染色体标本一般制备成什么片
小鼠骨髓细胞的染色体标本一般制备成什么片
首先要提前2小时向小鼠注射秋水仙素,处死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理盐水,离心取细胞(离心管底部),再经低渗处理,染色,滴冰片,镜检.很麻烦,具体的你可以去图书馆查阅相关资料(动物染色体制备).
7、牛蛙骨髓细胞染色体标本文献有哪些
蛙骨髓细胞染色体玻片标本的制作
一、实验目的
1、了解动物细胞染色体制片的原理。
2、学习蛙骨髓细胞染色体制片的方法。
3、观察蛙染色体的数目和形态。
二、实验原理
小型动物染色体制片最好、最有效的材料就是骨髓组织。在骨髓细胞中,有丝分裂指数相当高,可直接得到中期细胞。为提高有丝分裂指数,实验前,于动物腹腔内注射一定量的秋水仙素溶液,取骨髓后,经低渗处理、固定、滴片、空气干燥后即可获得良好的中期分裂相。
三、实验材料、
蛙类
四、器具及药品
注射器,离心管、解剖器、离心机,冰箱、电子天平,显微镜,搪瓷缸,载玻片,烧杯,滴管,秋水仙素,KCl,甲醇、冰乙酸,乙醇。
五、实验步骤
一离心法(适合于个体大的蛙)
1、前处理
目的:改变细胞质的粘度,抑制或破坏纺锤体的形成,使染色体缩短和分散,获得较多中期分裂相。
实验前8-20小时,将蛙称重,按每克体重10-40ug的剂量(无尾类10-20ug,有尾类30-40ug)经腹腔注射秋水仙素溶液,秋水仙素溶液浓度100-1000ug/ml,按蛙大小来配。
2、取骨髓细胞
将蛙麻醉,用手术剪剥开腹腔,取下四肢骨,剔净肌肉,放到盛有0.046mol/l的KCl的小烧杯中洗一下,用镊子夹出来,剪掉两端关节,将装有0.046mol/l的KCl的注射器从骨一头插入,冲骨髓细胞于干净的离心管内,反复冲洗几次,直到骨变白为止。注意这一过程不要让组织块掉入离心管。
3、低渗处理
目的:使细胞吸水膨胀,细胞膜易破裂,有助于染色体的分散。
当骨髓细胞全部冲入离心管后,开始计时,即低渗开始。室温下低渗处理30-40分钟,在此过程中,要用吸管反复吹打。
另外取预先洗净的载玻片放入盛有蒸馏水的搪瓷缸中,置冰箱中冰冻。
4、固定
目的:尽快杀死细胞,使细胞尽可能保持原有的状况,并且还可以去掉细胞质。
将离心管两两平衡后,对称放入离心机内,以1000转/分离心10分钟,轻轻取出,弃上清液,沿管壁缓慢加入现配卡诺氏固定液6ml左右,并用吸管吹散细胞团,固定30分钟,平衡后再离心,弃上清液,加卡诺氏固定液进行第二次固定。
注意,固定液要现配,每次离心前都要平衡,离心的时间、速度均同第一次。由于每离心一次,细胞要损失30%左右,因此对个体小的蛙第二次固定也可省去,但固定次数少,细胞质不易去掉,影响效果,固定次数多,离心后细胞损失多。这一茅盾的解决有待多次实验的摸索,原则上大型蛙可固定2-3次,小型蛙1次。