1、骨髓间充质干细胞提取什么动物最方便
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2、如何设计sd大鼠的骨髓间充质干细胞pcr引物前体
如何设计sd大鼠的骨髓间充质干细胞pcr引物前体
所谓骨髓移植，是从捐髓者的骨骼(通常是盘骨)抽取健康的骨髓细胞，过程约需半小时，然后以输血形式注入病人体内；病人亦可与医生商量，选择于手部抽取血液，透过分离机收集当中的血干细胞，但过程较从盘骨抽取骨髓细胞长，至少需时三小时。
抽取骨髓造血干细胞有两种方法：一是医生在供者的髂骨部位穿刺采集骨髓中的造血干细胞，术后一两天内有些疼痛，一周内就可完全恢复。二是用科学的方法有效地动员骨髓和其他部位的造血干细胞大量释放到外周血液中去，从供者的手臂静脉中采集，并通过机器将造血干细胞分离出来，剩余的血液回输到供者体内。
3、大鼠腹膜间皮细胞提取如何去除成纤维细胞
实验技术名称:大鼠成纤维细胞培养（贴块培养法）
实验技术介绍或原理:一般来说，贴块培养法，只要不加一些选择性的添加物（血清浓度10％，不加生长因子，不加肝素，不加地塞米松等）最后成纤维细胞必然成为优势细胞，因为：巨噬细胞是终末细胞，内皮细胞较娇气，平滑肌细胞贴壁较慢，也不易爬出，肺上皮细胞会被血清抑制，增殖能力也很弱，所以，成纤维细胞是很容易培养的。
实验基本步骤:
1.明胶包被培养过夜（准备2－3个），取出明胶，用2ml培养液冲洗培养瓶一遍，置于超净台中。
2.解剖取肺：将乳鼠在酒精中浸泡后取出，转移至超净台上的玻璃培养皿中，用碘酒消毒胸部皮肤，再用酒精棉球脱碘，左手捏紧乳鼠颈背部皮肤以充分展露胸部，右手以眼科直剪剪开皮肤，充分撕拉开，再用酒精棉球消毒，继而以另一把眼科弯剪沿胸骨柄左下缘向上剪开肋骨，然后在切口中间横剪胸骨。用眼科聂取出肺，置于盛有PBS（含有200U/ml青链霉素）的玻璃平皿中，冲洗去血。
3.用眼科剪将肺分成几个肺叶，用镊子去除周边的血凝块及纤维组织，用眼科剪剪去肺门处的支气管和血管，再用含有双抗的PBS冲洗1遍。
4.用眼科弯剪将肺组织剪碎成1mm3大小，加入含有双抗的PBS，将肺组织块吹打开，静置15min后，更换新的PBS
5.用200ul微量加样器（最好是超净台中专用，临用时用酒精棉球好好檫试枪柄）取200ul加样枪头一个，剪去尖，在酒精灯上用火焰烧弯。用枪头吸取组织块接种于培养瓶中，每瓶20－25块左右，每小块间距0.5cm左右。组织块放置好后，轻轻将培养瓶翻转，让瓶底朝上，向瓶内加入2ml左右的培养液，盖好瓶盖，将培养瓶倾斜放置在温箱中，干贴壁2－4小时后，将培养瓶慢慢翻转平放，继续静置培养。注意上述操作过程中动作要轻柔，让液体慢慢覆盖组织小块，严禁动作过快致使液体产生的冲力使粘贴的组织块飘起而造成原代培养的失败。48小时后换液，更换2－3ml即可。
6.贴块贴壁72小时后，镜下可见大量的成纤维细胞爬出，将组织块去除，继续培养2－3天，待细胞长满，即可传代。注：因为血清浓度低，内皮细胞可以爬出少量，但是很快就会死掉。
7.传代用0.25％胰酶常规消化，以1：2传代，传代完后，采用差速贴壁法纯化一次，即待细胞贴壁1.0－1.5h后（即绝大部分成纤维细胞都已经贴壁），弃去未贴壁的细胞和培养液，更换新的培养液
4、大鼠颗粒细胞的提取和细胞中RNA的抽提
大鼠颗粒细胞的提取和细胞中RNA的抽提
总RNA提取试剂盒（TRIzol法）
RIpure试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。
无论是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。TRIPURE试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIPURE抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。如果是用于PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的DNase I来处理抽提的总RNA。
TRIpure试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。
5、要从大鼠皮层神经元中提蛋白质，请教具体的操作步骤，越详细越好！是不是等到细胞铺满才能提？
我用的试剂盒步骤如下
A． 细胞总蛋白提取
1. 裂解液制备：每500ul冷的Buffer I（蛋白质裂解液）中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，1000rpm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5×106个细胞中加入500ul冷的裂解液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
5. 在4℃，14000rpm条件下离心15分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
6、如何提取小鼠骨髓细胞?
1、颈椎脱臼法处死小鼠(C57型小鼠)，放在75%酒精中侵泡3-5分钟后，拎出后将小鼠铺于超净台上一个消毒托盘上。
2、无菌提取小鼠的四肢骨，用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，用眼科剪小心剪开皮肤，并分离两下肢的皮肤，往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，这样可以游离出小鼠的两条下肢。
3、小心剥离肌肉，分别剪下Femurs（大腿骨）and Tibias（胫骨）,剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔。注意尽可能少的剪走骨髓腔。用纱布将骨头上的肌肉用纱布擦拭干净。
4、拿一支1ml的无菌注射器，每支吸取1mlHBSS液，并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。轻轻插入骨髓腔，冲洗骨髓腔以获得骨髓，一般用2-3ml培养基冲洗两次，可冲出绝大部分细胞。
5、过滤：用2OO目的滤网过滤，将滤网的中央插入到离心管里面25px处，然后用注射器吸取骨髓液，慢慢将骨髓液经滤网注入离心管中，去除残渣。
6、离心：将离心管放置离心机中离心10分钟（1350r/min）
7、去上清，加入1ml红细胞裂解液ACK，静置3分钟，再加9ml HBSS溶液，进行离心10分钟，弃上清。
8、用HBSS液洗涤骨髓细胞2次，室温，1350r/min离心10分钟。计数活细胞，用培养基调整细胞浓度至1X106个细胞/ml.
9、在试管中加入RPMI-1640培养基，然后再加入20ng/ml的细胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巯基乙醇，
10、吸取培养基加入到沉淀中混匀，24孔板铺板培养，每个孔1ml.
7、大鼠的骨髓间充质干细胞培养的时候需要添加什么细胞因子
大鼠的骨髓间充质干细胞培养的时候需要添加什么细胞因子
检测 SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)-肝细胞共培养上清液中的细胞因子,探讨细胞因子的作用,为生物人工肝及临床治疗肝功能衰竭提供理论依据。