骨髓液单个核细胞RNA提取

1、骨髓单个核细胞分离，目的用于RNA的提取

用淋巴细胞分离液就可以了。天津生产的，90元一瓶，200毫升。
1 骨髓液3毫升，用3毫升PBS稀释混匀；
2 平铺于6毫升淋巴细胞分离液液面上，保持界面清晰；
3 2000转/分水平离心30分钟；
4 1毫升针头吸取中间云雾层；
5 用PBS洗涤两次。
骨髓液用抗凝管收集就可以了，不要放到4度冰箱，避免溶血；淋巴细胞分离液使用前室温平衡；离心机必须为水平离心，不要突然刹车，应使速度缓慢下降；骨髓液和淋巴细胞分离液必须保持界面清晰。

2、单个核细胞提取液的配方

用ficoll液或precoll液分离单个核细胞，利用密度梯度离心的原理。其中较常用ficoll液。
聚蔗糖－泛影葡胺的主要成分是一种合成的蔗糖聚合物称聚蔗糖（商品名为ficoll）。ficoll液好像都是从外面买的，所以它的具体配方我也没有找到。

3、单个核细胞提取的最佳方法是什么？

利用密度梯度离心的原理，用ficoll液或precoll液分离单个核细胞。
（一）Ficoll分层液法
是一种单次密度梯度离心分离法。聚蔗糖－泛影葡胺是一种较理想的细胞分层液，其主要成分是一种合成的蔗糖聚合物称聚蔗糖（商品名为Ficoll），分子量为40kD，具有高密度、低渗透压、无毒性的特点。高浓度的Ficoll溶液粘性高，易使细胞聚集，故通常使用60g/L的低浓度溶液，密度为1.020，添加比重为1.200的泛影葡胺（urografin）以增加密度。国外常用商品Isopaque或Hypaque，故又称Ficoll-Hypaque分层液，将适量340g/L泛影葡胺加入Ficoll溶液中即可配制成密度合适分层液。分离人外周淋巴细胞以密度为1.077±0.001的分层液最佳，因为人的红细胞密度为1.093，粒细胞密度为1.092，单个核细胞在1.076～1.090之间。而不同动物血中的单个核细胞对分离液的密度要求各不相同，如小鼠为1.088，马为1.090。分离时先将分层液置试管底层，然后将肝素化全血以Hanks液或PBS液作适当稀释后，轻轻叠加在分层液上面，使两者形成一个清晰的界面。水平式离心后，离心管中会出现几个不同层次的液体和细胞带。红细胞和粒细胞密度大于分层液，同时因红细胞遇到Ficoll而凝集成串钱状而沉积于管底。血小板则因密度小而悬浮于血浆中，唯有与分层液密度相当的单个核细胞密集在血浆层和分层液的界面中，呈白膜状，吸取该层细胞递经洗涤高心重悬。本法分离单个核细胞纯度可达95％，淋巴细胞约占90％～95％，细胞获得率可达80％以上，其高低与室温有关，超过25℃时会影响细胞获得率。
（二）Percoll分层液法
这是一种连续密度梯度离心分离法。Percoll是一种经聚乙烯吡喀烷酮(PVP)处理的硅胶颗粒，对细胞无毒性。利用Percoll液经高速离心后形成一个连续密度梯度的原理，将密度不等的细胞分离纯化。用Percoll原液(密度1.135)与约等量双离子强度的磷酸缓冲液均匀混合，高速离心后，使分层液形成一个从管底到液面密度逐渐递减的连续密度梯度，再将已制备的单个核细胞悬液轻轻叠加在液面上，低速离心后，便得四个细胞层。表层为死细胞残片和血小板，底层为粒细胞和红细胞，中间有两层，上层富含单个核细胞(75％)，下层富含淋巴细胞(98％)。该法是纯化单核细胞和淋巴细胞的一各较好的方法，但操作流程较长，手续较多。

目前比较常用ficoll分层液法

4、提取血液的RNA怎么提取

取新鲜的血液（紫管），加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10,000 rpm离心1分钟。

彻底吸弃上清，收集白细胞沉淀。

每100-200μl血液收集的白细胞沉淀加入1ml TRIzol。室温放置5min，使样品充分裂解。

4℃12,000 rpm 离心10分钟，取上清（）。

每1ml TRIzol加入200μl氯仿，剧烈振荡混匀后室温放置3-5 min，自然分相。

4℃ 12,000rpm离心10-15min。样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，把水相转移到新管中（小心吸取水相）

在上清中加入等体积冰冷的异丙醇（），室温放置10-20min。

4℃ 12,000 rpm离心10min，弃上清，RNA沉淀于管底。

RNA沉淀中加入1ml 75%乙醇（用RNase-free水配制，），温和振荡离心管，悬浮沉淀。

4℃5,000-8,000 rpm离心1-2min，弃上清。

室温放置1-2分钟晾干沉淀。 

沉淀中加入50-100μl RNase-free水，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存。

检测纯度和浓度（OD260/OD280在2.0左右）

5、RNA的提取方法步骤及原理.

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:

Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。

Trizol作用原理:

在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。

水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

(5)骨髓液单个核细胞RNA提取扩展资料

与DNA不同，RNA一般为单链长分子，不形成双螺旋结构，但是很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。

RNA的碱基配对规则基本和DNA相同，不过除了A-U、G-C配对外，G-U也可以配对。

在细胞中，根据结构功能的不同，RNA主要分三类，即tRNA（转运RNA），rRNA（核糖体RNA），mRNA（信使RNA）。mRNA是合成蛋白质的模板，内容按照细胞核中的DNA所转录；tRNA是mRNA上碱基序列（即遗传密码子）的识别者和氨基酸的转运者；rRNA是组成核糖体的组分，是蛋白质合成的工作场所。

6、怎样提取细胞核内的RNA

怎样提取细胞核内的RNA
如何分别从细胞浆和细胞核中抽提RNA
操作步骤：
样品处理：
a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。

7、如何提取单个细胞的RNA

如何提取单个细胞的RNA

首先严格说不是DNA的降解，是DNA被打断后形成的片段，因为一般DNA都很长，在操作过程中容易受外力的作用而断裂，形成片段，这是正常现象，提取中无法避免，只能尽量减少；

如果是降解的话，会形成弥散形的条带，条带区分不明显；

操作中注意用力要柔和，不要用力的摇晃和吹打等，所使用的枪头最好提前用剪刀斜着剪一下，使枪头孔径变大，可以保证抽吸的时候减少对DNA的剪切力；

注意加入RNA酶，降解RNA；

8、要提取mRNA的外周血单个核细胞如何保存

-80°

9、外周血单个核细胞和总白细胞分别提取RNA，哪个更好，有没有文献支持，最好外文的。谢谢

这个完全取决于你要用RNA做什么，单核细胞和总白细胞提出来的RNA是不一样的，没有哪个更好一说。

10、外周血单个核细胞RNA的提取不用低温离心机行不行?我们实验室没有低温离心机。

建议最好还是用低温离心机，因为rna比较容易讲解，特别还是血磁暴中的，含量又少，不低温会很悲剧。。