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小鼠骨髓淋巴细胞提取步骤

发布时间:2021-02-27 13:01:00

1、制备小鼠骨髓染色体标本过程中有哪几个主要步骤影响制片结果

在制备小鼠骨髓细胞染色体标本过程中以下几个步骤需要注意:

提前3-4小时候注射秋水仙素,时间太长或者太短都会影响染色体中期的数目和形态。

在低渗过程中时间和吹打都很重要,低渗过度染色体膨胀,染色后肥肥的,低渗时间不过染色后染色体颜色很深看不出条带。

滴片,如果是教学的实验,要求玻片是冰的,而且要倾斜,滴的高度一般在25-30CM,滴完要过酒精灯,让固定液蒸发。滴的数量不要太多否则会重叠.如果是医院里的染色体制片有专门的滴片机。

小鼠骨髓细胞染色体标本制作:

原理:

由于小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞,具有高度的分裂能力,本实验采用这一材料,通过前处理,低渗,固定,制片,染色等步骤制得染色体标本,可观察到许多处于分裂中期的染色体,可以进行染色体组型分析;

试剂、试剂盒:秋水仙素、姬姆萨染液、固定液、低渗液、生理盐水;

仪器、耗材:天平、离心机、恒温培养箱、显微镜;

实验步骤

一、材料和方法

1.  材料:小白鼠。

2.  设备:天平,离心机,恒温培养箱,显微镜。

3.  药品:秋水仙素,姬姆萨染液,固定液,低渗液,生理盐水。

二、步骤

秋水仙素处理--取骨髓--低渗处理--固定--离心--再固定--再离心--滴片--染色--镜检--封片。

2、如何从小鼠脾脏中提取淋巴细胞

您好,很高兴能帮助您,
建议抗原
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如你还有别的问题,可另外向我求助;答题不易,互相理解,互相帮助!

3、B淋巴细胞在小鼠的什么位置能取到?

T淋巴细胞来(又名T细胞)及其表面受源体和B淋巴细胞(又名B细胞)都起源于骨髓中的造血干细胞;T细胞随血循环到胸腺,在胸腺激素等的作用下成熟, B细胞则到脾脏或腔上囊发育成熟。然后再随血循环到周围淋巴器官,在各自既定的区域定居、繁殖(主要为脾脏),整装待发。

4、如何提取小鼠骨髓细胞?

1、颈椎脱臼法处死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分钟后,拎出后将小鼠铺于超净台上一个消毒托盘上。
2、无菌提取小鼠的四肢骨,用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤,用眼科剪小心剪开皮肤,并分离两下肢的皮肤,往下在脚踝处剪断,往上在髋关节处剪断,这样可以游离出小鼠的两条下肢。
3、小心剥离肌肉,分别剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(胫骨),剪去两端软骨,露出红色的骨髓腔。注意尽可能少的剪走骨髓腔。用纱布将骨头上的肌肉用纱布擦拭干净。
4、拿一支1ml的无菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。轻轻插入骨髓腔,冲洗骨髓腔以获得骨髓,一般用2-3ml培养基冲洗两次,可冲出绝大部分细胞。
5、过滤:用2OO目的滤网过滤,将滤网的中央插入到离心管里面25px处,然后用注射器吸取骨髓液,慢慢将骨髓液经滤网注入离心管中,去除残渣。
6、离心:将离心管放置离心机中离心10分钟(1350r/min)
7、去上清,加入1ml红细胞裂解液ACK,静置3分钟,再加9ml HBSS溶液,进行离心10分钟,弃上清。
8、用HBSS液洗涤骨髓细胞2次,室温,1350r/min离心10分钟。计数活细胞,用培养基调整细胞浓度至1X106个细胞/ml.
9、在试管中加入RPMI-1640培养基,然后再加入20ng/ml的细胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巯基乙醇,
10、吸取培养基加入到沉淀中混匀,24孔板铺板培养,每个孔1ml.

5、如何取小鼠骨髓细胞

1、颈椎脱臼法处死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分钟后,拎出后将小鼠铺于超净台上一个消毒托盘上。
2、无菌提取小鼠的四肢骨,用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤,用眼科剪小心剪开皮肤,并分离两下肢的皮肤,往下在脚踝处剪断,往上在髋关节处剪断,这样可以游离出小鼠的两条下肢。
3、小心剥离肌肉,分别剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(胫骨),剪去两端软骨,露出红色的骨髓腔。注意尽可能少的剪走骨髓腔。用纱布将骨头上的肌肉用纱布擦拭干净。
4、拿一支1ml的无菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。轻轻插入骨髓腔,冲洗骨髓腔以获得骨髓,一般用2-3ml培养基冲洗两次,可冲出绝大部分细胞。
5、过滤:用2OO目的滤网过滤,将滤网的中央插入到离心管里面25px处,然后用注射器吸取骨髓液,慢慢将骨髓液经滤网注入离心管中,去除残渣。
6、离心:将离心管放置离心机中离心10分钟(1350r/min)
7、去上清,加入1ml红细胞裂解液ACK,静置3分钟,再加9ml HBSS溶液,进行离心10分钟,弃上清。
8、用HBSS液洗涤骨髓细胞2次,室温,1350r/min离心10分钟。计数活细胞,用培养基调整细胞浓度至1X106个细胞/ml.
9、在试管中加入RPMI-1640培养基,然后再加入20ng/ml的细胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巯基乙醇,
10、吸取培养基加入到沉淀中混匀,24孔板铺板培养,每个孔1ml.

6、小鼠B淋巴细胞免疫和获得 怎么实验设计呀?

选择D。因为骨髓中有B淋巴细胞,可以增殖分化成浆细胞,浆细胞可以产生抗体。但是细胞免疫需要T淋巴细胞参与,已经被破坏,又没有再提供,所以没有细胞免疫

7、单克隆抗体制备过程从小鼠什么中提取

(1)单克隆抗体的制备采用了动物细胞融合技术和动物细胞培养技术,它们的原理依次是细版胞膜的流动性和权动物细胞增殖.
(2)从小鼠体内提取B淋巴细胞之前,需对小鼠注射特异性抗原,使小鼠发生免疫反应产生相应的B淋巴细胞.
(3)诱导原生质体融合的方法有物理法(离心、振动、电激)、化学法(聚乙二醇),而诱导动物细胞融合的方法有物理法(离心、振动、电激)、化学法(聚乙二醇)和生物肥(灭活的病毒).因此,与原生质体诱导融合相比,诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的特有方法是灭活的病毒.
(4)①细胞是杂交瘤细胞,需要用选择性培养基筛选出来.
(5)杂交瘤细胞具有既能无限增殖,又能产生特异性抗体的特点.生产的单克隆抗体的优点是特异性强、灵敏度高、可大量制备.
故答案为:
(1)细胞膜的流动性 动物细胞增殖
(2)注射特异性抗原
(3)灭活的病毒
(4)杂交瘤 选择性
(5)无限增殖 产生特异性抗体 特异性强、灵敏度高、可大量制备

8、骨髓如何抽取?

朋友,详细介绍给你了, 1.骨髓是人体的造血组织,位于人体许多骨骼内.成年人的骨髓分两种:红骨髓和黄骨髓.红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞.血小板有止血作用,白细胞能杀灭与抑制各种病原体,抱括细菌、病毒等;某些淋巴细胞能制造抗体。因此,骨髓不但是制血器官,它还是重要的免疫器官。黄骨髓主要是脂肪组织,当人体贫血时,它可以转化为红骨髓。 2.捐献骨髓会不会影响捐献者的身体健康? 捐款骨髓不会影响人的健康。许多人认为捐献骨髓是抽取脊髓,这完全是一种误解。骨髓移植是需要人体内的红骨髓——造血干细胞。一个成年人的造血干细胞是3公斤,一名捐献者提拱不到10克的骨髓干细胞就能救活一名白血患者、因此不会减尽弱其免疫能力和造血能力。骨髓是在生能力很强的组织,对于健康捐献者,会在10天左右即可补足所捐献的干细胞量。 3.健康者在什么年龄段适合捐献骨髓? 健康者在18~55岁均可捐献骨髓。 4.什么是骨髓移植? 骨髓移植是指把骨髓中的造血干细胞从一个人体内移植到另一个人体内(一般是通过静脉输入)。确切地说,骨髓移植就是造血干细胞的移植。 5.什么人需要进行骨髓移植? 人体血液系统及免疫系统的严重疾病,如白血病(俗称血癌)。淋巴瘤、再生障碍性贫血地中海贫血、重病放射病患者,继续生存的希望就是骨髓移植。我国每年约400万名各类疾病的患者等待着骨髓移植。 除了对捐献者的休重、血压等身体健康程度和献血条件一样外,捐献骨髓者一般要求在18周岁以上、45周岁以下,最好有献血或捐献血小板的经历,一旦抽样,配对也要求是身体、心理等都较成熟者,以便于救治患者,从严格意义上来说,捐髓实际上是捐献造血干细胞,一次性捐献量约20克左右,对身体没有影响,市民可在义务献血的同时填写一张自愿捐髓表,这样医院将有关资料输入信息库后,可随时约请志愿者救死扶伤。 样捐献骨髓 1.如何成为志愿捐献者? 如果您年龄在18至55岁之间、身体健康,可拨打中华骨髓库骨髓捐献热线电话:(北京)010-65126600,(上海)021-62478117,或到区县级以上红十字会报名,并填写志愿捐献书及有关表格。 2.捐献骨髓有哪些步骤? 1)报名后,骨髓库或红十字会安排您验血5毫升,并将化验的HLA分型结果储存在中国造血干细胞捐献者资料库中,供患者寻找配对。 2)供者与受者初步配型相同,骨髓库的工作人员会向您详细介绍捐献过程,同时请您接受全身检查。 3.如何抽取骨髓? 抽取骨髓造血干细胞有两种方法:一是医生在供者的髂骨部位穿刺采集骨髓中的造血干细胞,术后一两天内有些疼痛,一周内就可完全恢复。二是用科学的方法有效地动员骨髓和其他部位的造血干细胞大量释放到外周血液中去,从供者的手臂静脉中采集,并通过机器将造血干细胞分离出来,剩余的血液回输到供者体内。 4.捐献骨髓会不会影响身体健康? 许多人认为捐献骨髓是抽取脊髓,这完全是一种误解。骨髓移植需要的是人体内的红骨髓——造血干细胞。一个成年人的骨髓重量为3公斤,一名供髓者提供不足10克的骨髓造血干细胞就能挽救一名白血病患者的生命。骨髓是再生能力很强的组织,一般健康者捐献造血干细胞后在十天左右即可补足所捐的干细胞量。因此,捐献骨髓不会影响人的身体健康。

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