1、小鼠骨髓细胞的染色体标本一般制备成什么片
小鼠骨髓细胞的染色体标本一般制备成什么片
首先要提前2小时向小鼠注射秋水仙素,处死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理盐水,离心取细胞(离心管底部),再经低渗处理,染色,滴冰片,镜检.很麻烦,具体的你可以去图书馆查阅相关资料(动物染色体制备).
2、如何提取小鼠骨髓细胞?
1、颈椎脱臼法处死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分钟后,拎出后将小鼠铺于超净台上一个消毒托盘上。
2、无菌提取小鼠的四肢骨,用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤,用眼科剪小心剪开皮肤,并分离两下肢的皮肤,往下在脚踝处剪断,往上在髋关节处剪断,这样可以游离出小鼠的两条下肢。
3、小心剥离肌肉,分别剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(胫骨),剪去两端软骨,露出红色的骨髓腔。注意尽可能少的剪走骨髓腔。用纱布将骨头上的肌肉用纱布擦拭干净。
4、拿一支1ml的无菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。轻轻插入骨髓腔,冲洗骨髓腔以获得骨髓,一般用2-3ml培养基冲洗两次,可冲出绝大部分细胞。
5、过滤:用2OO目的滤网过滤,将滤网的中央插入到离心管里面25px处,然后用注射器吸取骨髓液,慢慢将骨髓液经滤网注入离心管中,去除残渣。
6、离心:将离心管放置离心机中离心10分钟(1350r/min)
7、去上清,加入1ml红细胞裂解液ACK,静置3分钟,再加9ml HBSS溶液,进行离心10分钟,弃上清。
8、用HBSS液洗涤骨髓细胞2次,室温,1350r/min离心10分钟。计数活细胞,用培养基调整细胞浓度至1X106个细胞/ml.
9、在试管中加入RPMI-1640培养基,然后再加入20ng/ml的细胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巯基乙醇,
10、吸取培养基加入到沉淀中混匀,24孔板铺板培养,每个孔1ml.
3、小鼠骨髓细胞观察有丝分裂
A
4、制备小鼠骨髓染色体标本过程中有哪几个主要步骤影响制片结果
在制备小鼠骨髓细胞染色体标本过程中以下几个步骤需要注意:
提前3-4小时候注射秋水仙素,时间太长或者太短都会影响染色体中期的数目和形态。
在低渗过程中时间和吹打都很重要,低渗过度染色体膨胀,染色后肥肥的,低渗时间不过染色后染色体颜色很深看不出条带。
滴片,如果是教学的实验,要求玻片是冰的,而且要倾斜,滴的高度一般在25-30CM,滴完要过酒精灯,让固定液蒸发。滴的数量不要太多否则会重叠.如果是医院里的染色体制片有专门的滴片机。
小鼠骨髓细胞染色体标本制作:
原理:
由于小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞,具有高度的分裂能力,本实验采用这一材料,通过前处理,低渗,固定,制片,染色等步骤制得染色体标本,可观察到许多处于分裂中期的染色体,可以进行染色体组型分析;
试剂、试剂盒:秋水仙素、姬姆萨染液、固定液、低渗液、生理盐水;
仪器、耗材:天平、离心机、恒温培养箱、显微镜;
实验步骤
一、材料和方法
1. 材料:小白鼠。
2. 设备:天平,离心机,恒温培养箱,显微镜。
3. 药品:秋水仙素,姬姆萨染液,固定液,低渗液,生理盐水。
二、步骤
秋水仙素处理--取骨髓--低渗处理--固定--离心--再固定--再离心--滴片--染色--镜检--封片。
5、做小鼠骨髓移植照光有什么要注意的
balb/c小鼠照8个Gy应该没有问题的,致死剂量是8.5
注意事项
1、小鼠是几周的,受体鼠最好是8周龄以上的
2、雄的比较容易活下来
3、骨髓单个核输注每只尾静脉1-2X10的7次方,你细胞是不是输得太少了
4、另外照完得老鼠要按裸鼠那样饲养,就是在SPF动物房养,用消过毒的笼子,食水都要消毒的
5、食用的水要用酸化水,PH值3-4的
6、如果小鼠照射完看着状态不好,可以腹腔给一点没有血清得培养基,如1640
7,想知道小鼠是不是造血衰竭死亡,你最好把刚刚死亡得小鼠骨髓切片,HE染色看一下,以前我碰见过小鼠别得细胞都恢复了,就是巨核恢复得慢,小鼠出血死掉。
8、当然放射源得数字不准,你可以摸一下照射得剂量梯度,如果照射的空白组死亡,而打同基因骨髓细胞的小鼠还活着,就是最佳的照射剂量了,
6、大剂量X射线照射去胸腺小鼠,小鼠可失去免疫功能。向该小鼠体内输入来自骨髓的淋巴细胞,小鼠的免疫功能
选择D。
因为骨髓中有B淋巴细胞,可以增殖分化成浆细胞,浆细胞可以产生抗体。
但是细胞免疫需要T淋巴细胞参与,已经被破坏,又没有再提供,所以没有细胞免疫
7、小鼠骨髓细胞可以直接用于染色体的制作的原因
骨髓细胞有丝分裂旺盛,所以不需要体外培养就可以直接做实验。外周血淋巴细胞几乎都是处在G0或者G1期,一般情况下是不分裂的。在培养基中加入植物凝集素时,淋巴细胞受到刺激时转化为淋巴母细胞,并开始进行有丝分裂。