1、如何从小鼠骨髓中分离和培养DC
1、 取骨髓，对倍稀释
2、 用滴管沿管壁缓慢加入淋巴细胞分离液(45度角倾斜，尽量产生气泡，起到缓冲作用)
3、 2000转，离心30分钟
4、 吸取白膜层，（沿管壁）交替多次吸取，加入5倍体积以上的PBS液
5、 1500转，离心15分钟（洗掉血小板）
6、 弃掉上清，留少许回流液，轻弹管壁，加入PBS液至50ml
7、 800转，离心10分钟，（洗掉红细胞）
8、 重复两至三次
9、 加入PBS液至50ml，计数:？个细胞
离心后铺板，1X1076孔板培养液，共铺20板。无血清1640+DNA酶12h后轻晃培养液，洗板后加入完全培养基和GM—CSF(1000U/ml)和IL—4(500U/lml)
10、 第三天每孔补加等体积的完全培养基和GM—CSF(1000U/ml)和IL—4(500U/lml) ，这时细胞部分悬浮
11、 第五天为imDC，+1LPS(1ug/ml),诱导至第七天，为mDC。
2、如何从小鼠骨髓中分离和培养DC
拉颈处死小鼠，无菌剥离股骨和胫骨，用Hank’S冲出骨髓细胞，PBS洗
涤1次，用0．83％Tris—NH4CL裂解红细胞，RPMI1640培养液洗涤2次，调整细胞浓度为1×106个／mL，
并加入rmGM—CSF(1000 U／mL)和rmlL－4(500 U／mL)，接种于24孔培养板，置于37~C，5％CO2孵箱中
培养．第3天轻轻摇动培养板，吸走大部分悬浮细胞，加人等量的培养液，并补足细胞因子．隔日半量换液
1次，第7天收集悬浮或稍微贴壁的细胞．
3、小鼠骨髓来源树突状细胞 用多大的小鼠
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