骨髓涂片染色方法romouosky

1、瑞氏染色的步骤是什么?

操作步骤：

1.滴加瑞氏吉姆萨A液(约0.5ml-0.8ml)涂片上，并让染液覆盖整个标本染色1min；

2. 再将瑞氏吉姆萨B液加于A液上面（滴加量为A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3-10min。（染血片时间可略短，染骨髓片时间应视细胞量多少而异）

3.水洗（冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上），干燥、镜检。

注意事项：

1. 染色时间须视何种标本，涂片厚度，有核细胞多少，何种细胞及室温等而定；通常染血液涂片时滴加B液后染2-4分钟，染骨髓片则应不少于8分钟；气温较低时，可适当延长染色时间。染色结果如出现嗜酸性粒细胞变碱，则考虑是否染色时间太长所致。

2.做骨髓涂片时，因为骨髓纤维蛋白含量较高，凝固较快，所以涂片过程要快。骨髓不可用草酸盐抗凝，否则会使血细胞核变形，核染色质致密，胞浆空泡形成，出现草酸盐结晶。

3.染液量需充足，勿使染液蒸发干燥，以防染料沉着于涂片上。

4.做细胞染色时，当天气寒冷或湿度较大时，应于37℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小或在染色时脱片。

5.染料放置时间越长，染色效果越好。

6. 本试剂应由专业人员使用。

拓展资料

Wrfeht和Giemsa都于1902年报告了各自的新的血液学染色剂，其主要特点是在制备多色性亚甲蓝（主要指天青B）方面做了改进，使血细胞和疟原虫着色较好，操作简便。

上述染色法均是含伊红和亚甲基蓝衍生物的复合染料。在临床检验工作中，瑞氏染色法常用于血液、其他体液、分泌物和排泄物涂片中各种细胞的染色，有利于在显微镜下观察细胞形态及对细胞进行分类检查。

【染色原理】

瑞氏染色分两相进行，第一相是酸性染料伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒等结合；碱性染料天青B与细胞中的酸性物质如核染色质（chro－matin）、特异中性颗粒、血小板及富含核蛋白的胞质结合。第二相是天青B和伊红在适宜条件下形成紫色的天青B一伊红复合物（azure B－eosin complex），这种复合物是形成Romanowsky－Giemsa效应的基础。

Romanowsky－Giemsa效应包括：①白细胞核染色质染成紫色，疟原虫的染色质染成红色；②中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区染成紫色；③产生本效应必须有两种染料参与，一种是天青B，另一种是伊红。

Wittekind（1985）指出，天青B与DNA分子中的磷酸基结合，而伊红既与DNA分子中的阳离子部位结合，又与天青B结合，与天青B的结合力来源于电子供一受体的电子转移力，天青B的甲氨基（－NHCHs）与伊红分子中的叛基（－COOH）间形成氢键。因此，天青B是噻嗪类染料中能与伊红形成复合物的最佳选择，因为拥有四个甲基侧链的亚甲蓝不能以氢键与伊红结合。

甲醇除作为染料的溶剂，能将瑞氏染料解离成带正电荷的天青B和带负电荷伊红外，因其具有脱水力，还可将细胞固定为一定形态，并使蛋白沉淀为颗粒状、网状结构，增加细胞与染料的接触表面，增强染色效果。

细胞中的各种有机物质（特别是蛋白质）、染料等对环境的州值非常敏感。如环境偏酸，氢离子增多，降低对碱性染料的亲和力；增强伊红着色，出现异常红染；相反，则可出现异常蓝染。最佳环境应维持在PH值6 4～6、8.因此，必须使用缓冲溶液。

参考资料：

网络_瑞氏染色

瑞氏染色原理及方法_医学教育网

2、血涂片染色检查原虫的方法和步骤

方法和步骤如下：
一、玻片清洁
玻片清洁。清洁的玻片无油脂，无划痕，无灰尘，玻片
上有油迹，使厚血膜容易脱落，薄血膜涂布不均匀。在用手
指持玻片时，只能夹持玻片的两侧边缘，不要接触玻片的表
面以避免手指上的油污染污玻片。
1.新的载玻片先用热肥皂水洗涤，再用清水冲洗，然后
用软而洁净的毛巾擦干待用。
2.使用过的载玻片的清洁方法有两种：
①5%的肥皂水煮沸法
将洗衣肥皂削成小片，加水配成约5%的肥皂 水，煮沸
后将玻片一张一张地平放进肥皂水内，微火煮约一刻钟，然
后灭火待肥皂水稍冷后，用清洁干毛巾擦净后待用。
②清洁液浸泡法清洁液配制如下
重铬酸钾 80g
浓硫酸 100ml
水(清净水)1000ml
配制时须先将重铬酸钾研细放入水中，慢慢加温到全部
溶解为止，然后缓缓加入浓硫酸，待溶液冷却后倒入有盖的
大口玻璃缸内。清洁玻片时，将待洗的玻片逐张放入清洁中
浸泡一两天后，取出清水冲洗至完全没有黄色为止。浸泡前
最好用二甲笨除去镜油，清洁液颜色变为墨绿色后即失去清
洁作用，不能再用。
二、制片
1.薄血膜涂制
(1)先用75%酒精棉球将耳垂消毒，待酒精干后用采血针
迅速刺入耳垂近下端边缘处。
(2)用左手的拇指与食指以及右手的中指向相对的方向
将耳垂轻轻挤压出血。
(3)取一张洁净的载玻片，将它的左1/3的表面接触耳垂
上的血滴不要将玻片接触耳垂上的皮肤，使一小滴血在
玻片上。血量1-1.5mm
3
.1/4.火柴头大小。
(4)将推片臵于血溶之前与血液相接触，待血液沿推片边
缘展开后，将推片与载玻片保持30角度，用力均匀迅速将
推片由右向左推出而制成薄血膜。涂制得较好的薄血膜只有
一层血球，血球的分布排列比较均匀，血膜的末端突出如舌
状。
若取的血滴太大，则涂制的血膜太宽太厚，若推时用力
不均匀，则易成梯田状
若用力太大，则血膜两端过厚，若涂片上有油污，则血
膜成多孔状。
2.厚血膜涂制，薄血膜涂好后，再轻挤耳垂挤出约火柴
头大一血滴，将这一滴血滴在玻片的中心1/3处然后用推片
的一角由血滴中央向周围旋转涂成直径约一厘米的圆形血
膜，旋转涂制时间不宜过短，以免形成纤维蛋白束，遮盖了
疟原虫。
厚血薄涂好后，应平放待干，防苍蝇舔食血膜或灰尘落
在上面。受检者的编号可用铅笔或钢笔写在薄血膜的边缘
上，也可用蜡笔写在厚血膜一端。
三、染色
常用的染色方法有姬姆萨氏和瑞氏两种
(一)吉氏染色法，吉氏染剂是最可靠的血膜染剂其优
点是易于掌握很少染色过度，染好后的血膜褪色较慢
1.吉氏染剂的配制
吉氏染剂粉 0.5g
甘油，中性，25ml
甲醇，纯，分析纯，25ml
将吉氏染剂粉0.5臵于乳钵中，加少许甘油充分研磨
再加甘油研磨，直至25甘油加完为止。将充分研磨的吉氏
甘油液倒入无水，干净的棕色玻塞瓶中，然后分次加甲醇于
乳钵洗出染剂倒入瓶中，直至25甲醇将乳钵洗净并全部倒
入瓶中，塞紧，充分摇匀，放臵室内一星期，每天摇动数次
以后即可使用.
2.缓冲液的配制;
为了保证染色良好，使疟原虫的核和胞浆红兰分明，感
染的红血球上的薛氏小点清楚，在稀释染剂厚液时所用的
蒸馏水必须加缓冲液，缓冲蒸馏水。新鲜蒸馏水可能接近
中性，但贮存在一个时期后，由于吸收了空气中的 而变为
酸性，因此蒸馏水中必须加缓冲液，使其达到我们需要的效
果。
缓冲液配制
磷酸氢二钠，无水 9.5g
蒸馏水 1000ml
磷酸二氢钾 9.07g
蒸馏水 1000ml
将上二液分别贮存于紧塞的玻瓶中。
稀释染剂所用的蒸馏水的ph以7.0-7.2为最适宜现
用现配可按下表配制缓冲蒸馏水的配制（ml）
ph 磷酸二氢钠液 磷酸二氢钾液 蒸馏水
6.6 37 63 900
6.8 49 51 900
7.0 63 37 900
7.2 73 27 900

3、骨髓片、血涂片主要依据瑞氏染色观察细胞，为什么还需要其他化学染色？比如铁染色、过氧化物酶染色等。

骨髓片、血涂片主要依据瑞氏染色观察细胞，为什么还需要其他化学染色？比如铁染色、过氧化物酶染色

4、血涂片如何制备？怎样才算是一张合格的血涂片？ 瑞特染色法的原理是怎样的？如何制作？

血涂片制备方法很多，目前临床实验室普遍采用的是手工推片法，即用楔形技术专制备血属涂片方法，在玻片近一端1/3处，加1滴（约0.05ml）充分混匀的血液，握住另一张边缘光滑的推片，以30°~45°角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至载玻片另一端。血涂片应呈舌状，头、体、尾三部分清晰可分。瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和作用，又有物理吸附作用。各种细胞由于其所含化学成分不同，对染料的亲和力也不一样，因此，染色后各种细胞呈现出各自的染色特点。以血涂片染色为例，1、采血后推制厚薄适宜的血涂片。2、用蜡笔在血膜两头画线，然后将血涂片平放在染色架上。3、加瑞氏染液数滴，以覆盖整个血膜为宜，染色约1分钟。4、滴加约等量的缓冲液与染液混合，室温下染色5~10分钟。5、用流水冲去染液，待干燥后镜检。

5、涂片在染色前为什么要先固定?固定时应注意什么问题？

，细菌属于微生物，和我们人体一样，其中大多数维持生命特征需要专的组件都是各种肽、有属机盐以及蛋白质结构，它们基本上都是阴离子电荷和非离子。比如我们常用电镜的染色色基是碱性染料是因为它是唯一的常见阳离子上染体系，可以迅速和标的物件上染，而像是酸性染料、直接染料和分散染料都是水溶性阴离子染料，无法与阴离子标的物产生共轭吸附——所以我们用的一般都是亚甲基蓝、甲基紫或者罗丹明B这样的阳离子来显色，它们的另外一个好处是还可以溶于部份有机溶剂中，碱性染料属于有机偶氮非盐结晶，除了三级蒸馏水之外，乙醇、丙二醇、丙三醇、DMSO、ODO等生物实验常用助剂亦能溶解，对微生物的毒性非常低。涂片固定是必须的，如果易滑动和不平将会导致不可预知的观察错误和数据冗余，这在生物实验中是绝对不允许的，以上码字较多，请耐心阅读（最常见的就是亚甲基蓝了，碱性湖蓝BB）。

ps：豆知识，大多数阳离子对生物和人体都是有害的，对细菌、细胞和微生物都具有触杀作用，多数阳离子盐是重金属盐。

6、骨髓细胞染色常用什么方法，各是用于何种检测。

骨髓细胞内外铁染色,是进行贫血分类的常用组织化学染色方法,一般均采用普鲁士兰染色法,该法虽操作简便,但若掌握不好,常使玻璃上沉积大量污染铁,无法判定结果,我们曾查阅多种材料,对该项试验的一些细节问题均无详细介绍。最近我们参照各家材料,经过多次试验从玻片处理试剂配制、试验的时间、温度、最后漂洗的手法复染时间的控制等步骤上,对细胞内外铁染色的方法进行探讨,摸索出了一套较满意的染色方法,现介绍如下。

【作者单位】： 黑龙江省宝泉岭农场医院
【关键词】： 骨髓细胞 铁染色 染色方法 组织化学 试剂配制 玻片处理 氰化钾 贫血分类 普鲁士兰 染色法
【分类号】：R361
【正文快照】：
骨髓细胞内外铁染色,是进行贫血分类的常用组织化学染色方法。一般均采用普鲁士兰染色法,该法虽操作简便,但若掌握不好,常使玻璃上沉积大量污染铁,无法判定结果,我们曾查阅多种材料,对该项试验的一些细节同题均无详细介绍。最近我们参照各家材料,经过多次试验从玻片处理试剂

7、急求骨髓涂片铁染色法技术流程

1)4%的盐酸溶液.:40ml(38%浓盐酸)+340ml蒸馏水
2)40g/L亚铁氰化钾液
3)碱性复红:1g复红+10ml无水乙醇+90ml(5%石碳酸溶液),用时取3ml加100ML水.
4)37%甲醛

8、骨髓涂片过氧化酶染色:未见原始细胞增加,内对照正常什么意思

你的原始粒细胞高.说明核左移.有白血病的可能.你的中幼红细胞.晚幼红细胞都高.说明红细胞增生.看了你的骨髓片报告;我估计你的血象显示;白细胞是高的.血色素是低的.红细胞也偏低. 粒细胞性白血病的可能性比较大. 碱性磷酸酶异常.不排除骨病的可能。

9、制作血涂片常用的染色方法有哪些

瑞特和 吉姆萨