1、如何提取小鼠骨髓细胞?
1、颈椎脱臼法处死小鼠(C57型小鼠)，放在75%酒精中侵泡3-5分钟后，拎出后将小鼠铺于超净台上一个消毒托盘上。
2、无菌提取小鼠的四肢骨，用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，用眼科剪小心剪开皮肤，并分离两下肢的皮肤，往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，这样可以游离出小鼠的两条下肢。
3、小心剥离肌肉，分别剪下Femurs（大腿骨）and Tibias（胫骨）,剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔。注意尽可能少的剪走骨髓腔。用纱布将骨头上的肌肉用纱布擦拭干净。
4、拿一支1ml的无菌注射器，每支吸取1mlHBSS液，并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。轻轻插入骨髓腔，冲洗骨髓腔以获得骨髓，一般用2-3ml培养基冲洗两次，可冲出绝大部分细胞。
5、过滤：用2OO目的滤网过滤，将滤网的中央插入到离心管里面25px处，然后用注射器吸取骨髓液，慢慢将骨髓液经滤网注入离心管中，去除残渣。
6、离心：将离心管放置离心机中离心10分钟（1350r/min）
7、去上清，加入1ml红细胞裂解液ACK，静置3分钟，再加9ml HBSS溶液，进行离心10分钟，弃上清。
8、用HBSS液洗涤骨髓细胞2次，室温，1350r/min离心10分钟。计数活细胞，用培养基调整细胞浓度至1X106个细胞/ml.
9、在试管中加入RPMI-1640培养基，然后再加入20ng/ml的细胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巯基乙醇，
10、吸取培养基加入到沉淀中混匀，24孔板铺板培养，每个孔1ml.
2、如何取小鼠骨髓细胞
1、颈椎脱臼法处死小鼠(C57型小鼠)，放在75%酒精中侵泡3-5分钟后，拎出后将小鼠铺于超净台上一个消毒托盘上。
2、无菌提取小鼠的四肢骨，用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，用眼科剪小心剪开皮肤，并分离两下肢的皮肤，往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，这样可以游离出小鼠的两条下肢。
3、小心剥离肌肉，分别剪下Femurs（大腿骨）and Tibias（胫骨）,剪去两端软骨，露出红色的骨髓腔。注意尽可能少的剪走骨髓腔。用纱布将骨头上的肌肉用纱布擦拭干净。
4、拿一支1ml的无菌注射器，每支吸取1mlHBSS液，并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。轻轻插入骨髓腔，冲洗骨髓腔以获得骨髓，一般用2-3ml培养基冲洗两次，可冲出绝大部分细胞。
5、过滤：用2OO目的滤网过滤，将滤网的中央插入到离心管里面25px处，然后用注射器吸取骨髓液，慢慢将骨髓液经滤网注入离心管中，去除残渣。
6、离心：将离心管放置离心机中离心10分钟（1350r/min）
7、去上清，加入1ml红细胞裂解液ACK，静置3分钟，再加9ml HBSS溶液，进行离心10分钟，弃上清。
8、用HBSS液洗涤骨髓细胞2次，室温，1350r/min离心10分钟。计数活细胞，用培养基调整细胞浓度至1X106个细胞/ml.
9、在试管中加入RPMI-1640培养基，然后再加入20ng/ml的细胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巯基乙醇，
10、吸取培养基加入到沉淀中混匀，24孔板铺板培养，每个孔1ml.
3、请描述破坏蛙骨髓的方法（至少两种）
蛙骨髓细胞染色体玻片标本的制作 一、实验目的 1、了解动物细胞染色体制片的原理。 2、学习蛙骨髓细胞染色体制片的方法。 3、观察蛙染色体的数目和形态。二、实验原理小型动物染色体制片最好、最有效的材料就是骨髓组织。在骨髓细胞中，有丝分裂指数相当高，可直接得到中期细胞。为提高有丝分裂指数，实验前，于动物腹腔内注射一定量的秋水仙素溶液，取骨髓后，经低渗处理、固定、滴片、空气干燥后即可获得良好的中期分裂相。三、实验材料、蛙类四、器具及药品注射器，离心管、解剖器、离心机，冰箱、电子天平，显微镜，搪瓷缸，载玻片，烧杯，滴管，秋水仙素，KCl，甲醇、冰乙酸，乙醇。五、实验步骤一离心法（适合于个体大的蛙） 1、前处理目的：改变细胞质的粘度，抑制或破坏纺锤体的形成，使染色体缩短和分散，获得较多中期分裂相。实验前8-20小时，将蛙称重，按每克体重10-40ug的剂量（无尾类10-20ug，有尾类30-40ug）经腹腔注射秋水仙素溶液，秋水仙素溶液浓度100-1000ug/ml，按蛙大小来配。 2、取骨髓细胞将蛙麻醉，用手术剪剥开腹腔，取下四肢骨，剔净肌肉，放到盛有0.046mol/l的KCl的小烧杯中洗一下，用镊子夹出来，剪掉两端关节，将装有0.046mol/l的KCl的注射器从骨一头插入，冲骨髓细胞于干净的离心管内，反复冲洗几次，直到骨变白为止。注意这一过程不要让组织块掉入离心管。 3、低渗处理目的：使细胞吸水膨胀，细胞膜易破裂，有助于染色体的分散。当骨髓细胞全部冲入离心管后，开始计时，即低渗开始。室温下低渗处理30-40分钟，在此过程中，要用吸管反复吹打。另外取预先洗净的载玻片放入盛有蒸馏水的搪瓷缸中，置冰箱中冰冻。 4、固定目的：尽快杀死细胞，使细胞尽可能保持原有的状况，并且还可以去掉细胞质。将离心管两两平衡后，对称放入离心机内，以1000转/分离心10分钟，轻轻取出，弃上清液，沿管壁缓慢加入现配卡诺氏固定液6ml左右，并用吸管吹散细胞团，固定30分钟，平衡后再离心，弃上清液，加卡诺氏固定液进行第二次固定。注意，固定液要现配，每次离心前都要平衡，离心的时间、速度均同第一次。由于每离心一次，细胞要损失30％左右，因此对个体小的蛙第二次固定也可省去，但固定次数少，细胞质不易去掉，影响效果，固定次数多，离心后细胞损失多。这一茅盾的解决有待多次实验的摸索，原则上大型蛙可固定2-3次，小型蛙1次。
4、骨髓的基因组提取可以用提取血液基因组的试剂盒吗
这个好像不可以，因为它们的成分不同，你需要查一下相关的资料的。具体的步骤可以参考下面的：1.根据白细胞计数(个体每个细胞约含6pg基因组DNA，要获得30L gDNA 约需5×106个白细胞):取外周血5～30ml或骨髓1～6ml，加入0.1体积的2%EDTA， pH7.4，混匀。 2.抗凝血和骨髓于1500r/min离心10分钟，去上层血浆。 3.加入2倍体积的红细胞裂解液， 颠倒离心管使其混匀，于1500r/min 离心10分钟，弃去含Hb的上清，再加入5～10ml 红细胞裂解液， 同样混匀、离心、弃上清。 4.加入10ml PBS重悬白细胞沉淀，于1500r/min离心10分钟。弃上清。 5.加入2ml TES溶液重悬白细胞沉淀。 6.吸取白细胞液加入6ml DNA提取缓冲液中，边加边混匀。 7.加入蛋白酶K至终浓度为100～200mg/L，于37℃消化过夜或45～55℃消化3～4小时，其间振摇几次。 8.加入等体积饱和酚抽提，来回颠倒离心管并适当振摇以使其混匀，如太粘稠可追加适量TES溶液，于3500r/min离心10分钟， 吸取含DNA的水相至另一离心管。 9.加入等体积酚/氯仿/异戊醇(25∶24∶1) ，同上混匀，于2500r/min离心5～10分钟，余同上一步骤，可重复1～3次。10.加入等体积氯仿/异戊醇，混匀，2500r/min 离心5分钟， 吸取水相DNA至小烧杯中；加入0.2体积的10mol/L醋酸铵， 混匀；加入2倍体积无水乙醇，混匀；DNA自然沉淀出来，倒去液体。 11.加入10～20ml 70%乙醇洗DNA， 重复1～2次，每次均倒去液体，让DNA小块于室温干燥， 但不可过度干燥，以防其难于溶解。 12.加入1～10ml TE， pH8.0， 于室温或55℃水浴溶解DNA；再加入0.5体积7.5mmol/L醋酸铵， pH7.5，混匀；加入2倍体积无水乙醇， 混匀；沉淀DNA后倒去液体， 同样用70%乙醇洗DNA 2～3次， 再使DNA小块干燥。 13.用适量TE，pH8.0， 溶解DNA， 浓度以0.4～0.6g/L (ug/uL)为宜，于4℃保存。