骨髓rna提取

1、跪谢先，我要收集骨髓液，分离单核细胞提取DNA和RNA。应该怎样保存骨髓液呢

一般生物样品都是放在-80冰箱保存，不过如果是蛋白的话，-80冰箱保存两个月也会降解！RNA时间久更短了。

融化时，打一盒冰 ，样品放在冰上溶解。

运输条件一般有两种，一种是放冰袋到泡沫盒中，另一种就是放干冰到泡沫盒中，

2、如何从骨组织提取总RNA

可以用专用的试剂盒提取，比如说，有专用的小鼠骨骼RNA提取试剂盒。如果不用专用试剂盒，样品不好研磨，会导致提取质量降低。

3、RNA提取原理

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:

Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。

Trizol作用原理:

在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。

水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

(3)骨髓rna提取扩展资料:

抽提RNA的使用目的

RNA用于不同的后续实验，其质量要求不尽相同。

cDNA文库构建要求RNA完整而无酶反应抑制物残留；

Northern对RNA完整性要求较高，对酶反应抑制物残留要求较低；

RT-PCR对RNA完整性要求不太高，但对酶反应抑制物残留要求严格。因此，明确实验目的是进行后续实验的首要条件。

4、血清RNA提取方法

血清RNA提取，biog的具体操作步骤如下： 1. 请自行准备：无水乙醇、无RNA酶1.5mL离心管。2. 取出洗涤液，按以下操作：a) 洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇；35mL加入15mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇。b) 洗涤液B：9mL加入21mL无水乙醇；15mL加入35mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。3. 取无RNA酶的1.5mL离心管，加入200μL样本，4μLRNA Carrier混合均匀，再加入300μL 裂解液及20μL 消化液，漩涡震荡10秒，充分混匀，56℃水浴10 分钟至完全裂解。4. 加入1000μL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。5. 将吸附柱放入收集管内，将760μL上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液.6. 将剩余760μL溶液转移至吸附柱内，重复步骤5。7. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。8. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。10. 取出吸附柱，放入新的无RNA酶的1.5 mL 离心管内，加入30-50μL 洗脱液，静置3 分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟，收集RNA溶液。11. -70℃保存，或直接用于下一步实验。

5、如何选择正确的RNA提取方法

1. 使用正确的细胞或组织储存条件
在样品用液氮瞬间冻结之后，应该储存在-80°C，千万不能解冻。即使是置于含有胍盐的裂解液中作匀浆前的短暂解冻，也会导致RNA的降解和损失。瞬间冻结的组织应该首先在超低温条件下先研磨成粉，然后置于裂解液中进行匀浆。
RNAfixer使样品储存更为便利。储存在RNAfixer中的细胞或组织可在室温下稳定保存长达1个星期，在4°C可稳定保存长达1个月，或永久保存在-20°C。
2. 消除环境RNase的污染
为了得到完整的、高品质RNA，在整个RNA制备过程中，当RNA离开强蛋白变性剂（如离液裂解液或酚）的保护时，避免引入新的RNase污染就非常关键。由于RNase几乎是无所不在，所以必须确保与纯化的RNA接触的每一样东西都是无RNase污染的。所有的表面，包括移液器、工作台、玻璃器皿和制胶设备，都必须用表面去污净化溶液如RNase喷雾清除剂 来处理过，去除各种溶液或者反应缓冲液中可能存在的RNase污染，可以用RNAsafe。必须保证一直使用无RNase的枪头、试管和溶液，手套也应经常更换。
3.迅速灭活内源的RNA酶，以防止RNA降解。
以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活：
1）、用含离液（如胍盐）的细胞裂解液收获样品，并立即匀浆。
2）、用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是：组织块必须保证足够小，在浸入液氮的瞬间就能冻结，以确保瞬间令RNA酶失活。
3）、立即将样品置于RNAfixer无液氮RNA样品储存液中。它是一种水相、无毒的收集试剂，能立即稳定并保护完整、未冻结的组织和细胞样品中的RNA。关键要点是组织样品切片一定要够薄（<0.5 cm），这样RNAfixer才能在RNase破坏RNA之前迅速渗入组织块中。
4. 选择合适破壁方法
细胞或组织的彻底匀浆对RNA提取来说，是一个很关键的步骤，它能够防止RNA的损失和降解。匀浆的方法应根据细胞或组织的类型来选择。大部分培养的细胞可以置于细胞裂解液中，通过简单的涡旋震荡来匀浆；而动物组织、植物组织、酵母和细菌、真菌则常常需要更加剧烈的方法，通常用液氮研磨。比如说细菌（特别是革兰氏阳性菌）的细胞壁，就需要溶菌酶消化来实现彻底的细胞裂解和RNA的最大回收，酵母提取时加入破壁酶帮助破壁，再用TRIpure或RNApure进行提取。
5. RNA提取少走弯路——不同材料如何选择最适RNA提取试剂
现有众多的RNA分离方法也许令人难以取舍。目前最简单也是最安全的方法是柱式分离，如RNApure 因为操作简单，时间短，纯度高而受到大家的喜爱，RNApure不需要DNA酶消化DNA，节省了时间，避免RNA的降解，从而提高了产量；相对非柱式分离（如TRIzol），去除蛋白及其他杂质干净，提高了纯度，对于细胞、组织、一般植物均非常适合。植物RNA的提取比较难抉择，植物RNA提取受酚、多糖、蛋白杂质、次生代谢物含量的影响，一般用TRIzol提取纯度不高，而且很多植物用TRIzol提取不出来。
这时候可以选择多糖多酚植物总RNA提取试剂盒（水仙、辣椒、胡萝卜、玉米、百合、小麦、西红柿、花菜、油菜等）和通用植物RNA提取试剂盒（适合绝大多数植物提取，包括：各种中草药、植物种子、苹果、葡萄、草莓、香蕉、龙眼、荔枝、草坪植物、松树、杉树、白桦、紫松果、彩叶草、一品红、夹竹桃、垂叶榕、紫罗兰、月季、天竺蓝、牵牛花等）；非常值得一提的是血液（包括血清、血浆、脑脊液、各种拭子或其他液体含量高的样本）RNA的提取用TRIzol和红细胞裂解的方法效果都不好，因为红细胞裂解液不含有RNA酶的抑制成分，这个过程RNA很容易降解，推荐使用TRIpure LS (RP1101)或者血液总RNA提取试剂盒（RP4001），该方法适用于表达谱芯片实验中RNA的提取。
6. 低浓度RNA的沉淀
纯化得到的RNA可能需要通过沉淀来浓缩，以满足一些下游应用的需要。醋酸铵(NH4OAc) 沉淀（加0.1体积的5M 醋酸铵、2-2.5体积的无水乙醇，-20°C放置25分钟以上）可以很好地回收RNA。如果需要定量回收低浓度的RNA（ng/ml），可以采用共沉淀（如linear acrylamide糖原glycogen,、酵母yeast RNA ）的方法。核酸助沉剂是linear acrylamide，当RNA用于RT-PCR分析时，线性的丙烯酰胺和DNase处理的糖原都可以作为理想的共沉淀剂，因为它们都不含DNA污染，糖原含量高会抑制PCR反应，应注意控制浓度，核酸助沉剂对PCR无影响，成为病毒核酸提取的首选。酵母RNA和未处理的糖原会给样品带来核酸污染，有可能影响RT-PCR的结果。沉淀后，注意避免RNA沉淀过分干燥，因为这可能导致很难重新溶解。
7. 提取好的RNA如何储存
如果只是短期储存，重悬的RNA应放置于-20°C；如果是长期储存的话，就应该放置于-80°C。储存RNA时，可以加入少量的RNA酶抑制剂（RP5601），避免RNA的降解，RNA可以直接做下游实验。如果要长期保存RNA，可以加入RNAlong。我们推荐将RNA溶液分装在几支管中。这会避免反复冻融损伤RNA，并预防偶然的RNase污染。

6、RNA的提取方法

1、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb

2、甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

3、玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

4、异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）

5、表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

6、加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

7、碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。

(6)骨髓rna提取扩展资料：

DNA提取原则：

1、保证核酸一级结构的完整性；

2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；

3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；

4、其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。

7、骨髓单个核细胞分离，目的用于RNA的提取

用淋巴细胞分离液就可以了。天津生产的，90元一瓶，200毫升。
1 骨髓液3毫升，用3毫升PBS稀释混匀；
2 平铺于6毫升淋巴细胞分离液液面上，保持界面清晰；
3 2000转/分水平离心30分钟；
4 1毫升针头吸取中间云雾层；
5 用PBS洗涤两次。
骨髓液用抗凝管收集就可以了，不要放到4度冰箱，避免溶血；淋巴细胞分离液使用前室温平衡；离心机必须为水平离心，不要突然刹车，应使速度缓慢下降；骨髓液和淋巴细胞分离液必须保持界面清晰。

8、提取血液的RNA怎么提取

取新鲜的血液（紫管），加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10,000 rpm离心1分钟。

彻底吸弃上清，收集白细胞沉淀。

每100-200μl血液收集的白细胞沉淀加入1ml TRIzol。室温放置5min，使样品充分裂解。

4℃12,000 rpm 离心10分钟，取上清（）。

每1ml TRIzol加入200μl氯仿，剧烈振荡混匀后室温放置3-5 min，自然分相。

4℃ 12,000rpm离心10-15min。样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，把水相转移到新管中（小心吸取水相）

在上清中加入等体积冰冷的异丙醇（），室温放置10-20min。

4℃ 12,000 rpm离心10min，弃上清，RNA沉淀于管底。

RNA沉淀中加入1ml 75%乙醇（用RNase-free水配制，），温和振荡离心管，悬浮沉淀。

4℃5,000-8,000 rpm离心1-2min，弃上清。

室温放置1-2分钟晾干沉淀。 

沉淀中加入50-100μl RNase-free水，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存。

检测纯度和浓度（OD260/OD280在2.0左右）

9、骨组织RNA的提取注意事项

RNA提取的时候，一定要注意防止RNA酶作用。
第一点，样本处理和存放最好都放负80冰柜。
第二点，实验过程中你可以使用DEPC水泡过的枪头，离心管，保持手套干净，带好口罩，不要说话。
第三点，假如你用Trizol提取RNA，75%的乙醇也最好采用来菌的DEPC水来配制。晾干酒精这一步时间不要太长。
第四点：琼脂糖凝胶电泳，专漕专用，使用新的电泳缓冲液TBE。
还有呢，也可以在实验前，采用RNase Zap喷喷桌面，也能有一定程度上去除RNA酶的影响。
一般提取的时候多多注意，应该问题不大。
糊弄用可以，但是如果是自己做实验的话最好还是参考一下比较好的文献总结会比较好！

10、RNA的提取方法有哪些？

主要有苯酚、异硫氰酸胍、CTAB、LiCl密度梯度、Trizol等方法。
现在常用的是Trizol法。
提前将研钵、研棒、剪刀、镊子等用锡箔纸包好200度烘烤6小时，与实验前放到冰箱中预冷。枪头、离心管等DEPC水浸泡处理12小时后，高温灭菌30分钟（也可不用DEPC处理，常规高温灭菌40分钟），整个处理过程必须带手套（最好带口罩），否则环境中的RNA酶会降解RNA。
1、取鲜样或者在-80度保存样品，液氮研磨样品至细小粉末，0.1g样品加入1mlTrizol混匀，室温静置5分钟。
2、12000rpm离心十分钟，取上清至一新的离心管中，加入0.2ml氯仿剧烈晃动15秒，室温静置2-3分钟
3、12000rpm离心十分钟，取上清至一新的离心管中，加入等体积异丙醇，混匀，室温静置10分钟
4、12000rpm离心十分钟，去除上清，用70%乙醇清洗2次，7500rpm离心五分钟，晾干。（不可过分干燥否则不易溶解）
5、加入适量DEPC水溶解沉淀