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取骨髓染色体固定作用

发布时间:2020-11-19 10:25:31

1、请描述破坏蛙骨髓的方法(至少两种)

蛙骨髓细胞染色体玻片标本的制作 一、实验目的 1、了解动物细胞染色体制片的原理。 2、学习蛙骨髓细胞染色体制片的方法。 3、观察蛙染色体的数目和形态。二、实验原理小型动物染色体制片最好、最有效的材料就是骨髓组织。在骨髓细胞中,有丝分裂指数相当高,可直接得到中期细胞。为提高有丝分裂指数,实验前,于动物腹腔内注射一定量的秋水仙素溶液,取骨髓后,经低渗处理、固定、滴片、空气干燥后即可获得良好的中期分裂相。三、实验材料、蛙类四、器具及药品注射器,离心管、解剖器、离心机,冰箱、电子天平,显微镜,搪瓷缸,载玻片,烧杯,滴管,秋水仙素,KCl,甲醇、冰乙酸,乙醇。五、实验步骤一离心法(适合于个体大的蛙) 1、前处理目的:改变细胞质的粘度,抑制或破坏纺锤体的形成,使染色体缩短和分散,获得较多中期分裂相。实验前8-20小时,将蛙称重,按每克体重10-40ug的剂量(无尾类10-20ug,有尾类30-40ug)经腹腔注射秋水仙素溶液,秋水仙素溶液浓度100-1000ug/ml,按蛙大小来配。 2、取骨髓细胞将蛙麻醉,用手术剪剥开腹腔,取下四肢骨,剔净肌肉,放到盛有0.046mol/l的KCl的小烧杯中洗一下,用镊子夹出来,剪掉两端关节,将装有0.046mol/l的KCl的注射器从骨一头插入,冲骨髓细胞于干净的离心管内,反复冲洗几次,直到骨变白为止。注意这一过程不要让组织块掉入离心管。 3、低渗处理目的:使细胞吸水膨胀,细胞膜易破裂,有助于染色体的分散。当骨髓细胞全部冲入离心管后,开始计时,即低渗开始。室温下低渗处理30-40分钟,在此过程中,要用吸管反复吹打。另外取预先洗净的载玻片放入盛有蒸馏水的搪瓷缸中,置冰箱中冰冻。 4、固定目的:尽快杀死细胞,使细胞尽可能保持原有的状况,并且还可以去掉细胞质。将离心管两两平衡后,对称放入离心机内,以1000转/分离心10分钟,轻轻取出,弃上清液,沿管壁缓慢加入现配卡诺氏固定液6ml左右,并用吸管吹散细胞团,固定30分钟,平衡后再离心,弃上清液,加卡诺氏固定液进行第二次固定。注意,固定液要现配,每次离心前都要平衡,离心的时间、速度均同第一次。由于每离心一次,细胞要损失30%左右,因此对个体小的蛙第二次固定也可省去,但固定次数少,细胞质不易去掉,影响效果,固定次数多,离心后细胞损失多。这一茅盾的解决有待多次实验的摸索,原则上大型蛙可固定2-3次,小型蛙1次。

2、小鼠骨髓细胞染色体标本制备和观察实验报告

首先要提前2小时向小鼠注射秋水仙素,处死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理盐水,离心取细胞(离心管底部),再经低渗处理,染色,滴冰片,镜检。很麻烦,具体的你可以去图书馆查阅相关资料(动物染色体制备)。

3、制备小白鼠骨髓染色体标本过程中有哪几个主要步骤影响制片结果?为什...

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4、制备小鼠骨髓染色体标本过程中有哪几个主要步骤影响制片结果

在制备小鼠骨髓细胞染色体标本过程中以下几个步骤需要注意:

提前3-4小时候注射秋水仙素,时间太长或者太短都会影响染色体中期的数目和形态。

在低渗过程中时间和吹打都很重要,低渗过度染色体膨胀,染色后肥肥的,低渗时间不过染色后染色体颜色很深看不出条带。

滴片,如果是教学的实验,要求玻片是冰的,而且要倾斜,滴的高度一般在25-30CM,滴完要过酒精灯,让固定液蒸发。滴的数量不要太多否则会重叠.如果是医院里的染色体制片有专门的滴片机。

小鼠骨髓细胞染色体标本制作:

原理:

由于小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞,具有高度的分裂能力,本实验采用这一材料,通过前处理,低渗,固定,制片,染色等步骤制得染色体标本,可观察到许多处于分裂中期的染色体,可以进行染色体组型分析;

试剂、试剂盒:秋水仙素、姬姆萨染液、固定液、低渗液、生理盐水;

仪器、耗材:天平、离心机、恒温培养箱、显微镜;

实验步骤

一、材料和方法

1.  材料:小白鼠。

2.  设备:天平,离心机,恒温培养箱,显微镜。

3.  药品:秋水仙素,姬姆萨染液,固定液,低渗液,生理盐水。

二、步骤

秋水仙素处理--取骨髓--低渗处理--固定--离心--再固定--再离心--滴片--染色--镜检--封片。

5、制备骨髓细胞染色体标本是怎样的

因为在之前你得到的染色体都处于不同的分裂期,预固定是为了使这些细胞及其染色体都固定在当前所处的时期,便于观察。

6、临床:白血病。取材:骨髓。 方法:细胞培养+G显带。分析20个染色体分裂相:

这个报告结果的意思是:
染色体检查总共计数20个细胞分裂相,其中有14个分裂相结果是: 染色体总数46条,其中性染色体是XY,即男性同时未发现染色体异常。

另外6个分裂相是:染色体总数46,性染色体为XY,存在染色体异常,异常表现为: 9号染色体和17号染色体存在意味,即9号染色体和17号染色体相互交换了整条染色体臂并组成了新的稳定染色体。

综上,标本是由两种核型组成的嵌合体,且是平衡易位,可能在遗传中不会造成致死性死胎,流产之类,但是有可能产生具有家族种质性的肿瘤,因为这个核型是能稳定遗传的,而且不会产生致死性畸变。建议对整个家族进行筛查,以先证者为起点,对家系进行研究,可以确定肿瘤和一行核型的联系。

7、牛蛙骨髓细胞染色体标本文献有哪些

蛙骨髓细胞染色体玻片标本的制作

一、实验目的
1、了解动物细胞染色体制片的原理。
2、学习蛙骨髓细胞染色体制片的方法。
3、观察蛙染色体的数目和形态。
二、实验原理
小型动物染色体制片最好、最有效的材料就是骨髓组织。在骨髓细胞中,有丝分裂指数相当高,可直接得到中期细胞。为提高有丝分裂指数,实验前,于动物腹腔内注射一定量的秋水仙素溶液,取骨髓后,经低渗处理、固定、滴片、空气干燥后即可获得良好的中期分裂相。
三、实验材料、
蛙类
四、器具及药品
注射器,离心管、解剖器、离心机,冰箱、电子天平,显微镜,搪瓷缸,载玻片,烧杯,滴管,秋水仙素,KCl,甲醇、冰乙酸,乙醇。
五、实验步骤
一离心法(适合于个体大的蛙)
1、前处理
目的:改变细胞质的粘度,抑制或破坏纺锤体的形成,使染色体缩短和分散,获得较多中期分裂相。
实验前8-20小时,将蛙称重,按每克体重10-40ug的剂量(无尾类10-20ug,有尾类30-40ug)经腹腔注射秋水仙素溶液,秋水仙素溶液浓度100-1000ug/ml,按蛙大小来配。
2、取骨髓细胞
将蛙麻醉,用手术剪剥开腹腔,取下四肢骨,剔净肌肉,放到盛有0.046mol/l的KCl的小烧杯中洗一下,用镊子夹出来,剪掉两端关节,将装有0.046mol/l的KCl的注射器从骨一头插入,冲骨髓细胞于干净的离心管内,反复冲洗几次,直到骨变白为止。注意这一过程不要让组织块掉入离心管。
3、低渗处理
目的:使细胞吸水膨胀,细胞膜易破裂,有助于染色体的分散。
当骨髓细胞全部冲入离心管后,开始计时,即低渗开始。室温下低渗处理30-40分钟,在此过程中,要用吸管反复吹打。
另外取预先洗净的载玻片放入盛有蒸馏水的搪瓷缸中,置冰箱中冰冻。
4、固定
目的:尽快杀死细胞,使细胞尽可能保持原有的状况,并且还可以去掉细胞质。
将离心管两两平衡后,对称放入离心机内,以1000转/分离心10分钟,轻轻取出,弃上清液,沿管壁缓慢加入现配卡诺氏固定液6ml左右,并用吸管吹散细胞团,固定30分钟,平衡后再离心,弃上清液,加卡诺氏固定液进行第二次固定。
注意,固定液要现配,每次离心前都要平衡,离心的时间、速度均同第一次。由于每离心一次,细胞要损失30%左右,因此对个体小的蛙第二次固定也可省去,但固定次数少,细胞质不易去掉,影响效果,固定次数多,离心后细胞损失多。这一茅盾的解决有待多次实验的摸索,原则上大型蛙可固定2-3次,小型蛙1次。

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