1、牛蛙骨髓细胞染色体标本文献有哪些
蛙骨髓细胞染色体玻片标本的制作
一、实验目的
1、了解动物细胞染色体制片的原理。
2、学习蛙骨髓细胞染色体制片的方法。
3、观察蛙染色体的数目和形态。
二、实验原理
小型动物染色体制片最好、最有效的材料就是骨髓组织。在骨髓细胞中,有丝分裂指数相当高,可直接得到中期细胞。为提高有丝分裂指数,实验前,于动物腹腔内注射一定量的秋水仙素溶液,取骨髓后,经低渗处理、固定、滴片、空气干燥后即可获得良好的中期分裂相。
三、实验材料、
蛙类
四、器具及药品
注射器,离心管、解剖器、离心机,冰箱、电子天平,显微镜,搪瓷缸,载玻片,烧杯,滴管,秋水仙素,KCl,甲醇、冰乙酸,乙醇。
五、实验步骤
一离心法(适合于个体大的蛙)
1、前处理
目的:改变细胞质的粘度,抑制或破坏纺锤体的形成,使染色体缩短和分散,获得较多中期分裂相。
实验前8-20小时,将蛙称重,按每克体重10-40ug的剂量(无尾类10-20ug,有尾类30-40ug)经腹腔注射秋水仙素溶液,秋水仙素溶液浓度100-1000ug/ml,按蛙大小来配。
2、取骨髓细胞
将蛙麻醉,用手术剪剥开腹腔,取下四肢骨,剔净肌肉,放到盛有0.046mol/l的KCl的小烧杯中洗一下,用镊子夹出来,剪掉两端关节,将装有0.046mol/l的KCl的注射器从骨一头插入,冲骨髓细胞于干净的离心管内,反复冲洗几次,直到骨变白为止。注意这一过程不要让组织块掉入离心管。
3、低渗处理
目的:使细胞吸水膨胀,细胞膜易破裂,有助于染色体的分散。
当骨髓细胞全部冲入离心管后,开始计时,即低渗开始。室温下低渗处理30-40分钟,在此过程中,要用吸管反复吹打。
另外取预先洗净的载玻片放入盛有蒸馏水的搪瓷缸中,置冰箱中冰冻。
4、固定
目的:尽快杀死细胞,使细胞尽可能保持原有的状况,并且还可以去掉细胞质。
将离心管两两平衡后,对称放入离心机内,以1000转/分离心10分钟,轻轻取出,弃上清液,沿管壁缓慢加入现配卡诺氏固定液6ml左右,并用吸管吹散细胞团,固定30分钟,平衡后再离心,弃上清液,加卡诺氏固定液进行第二次固定。
注意,固定液要现配,每次离心前都要平衡,离心的时间、速度均同第一次。由于每离心一次,细胞要损失30%左右,因此对个体小的蛙第二次固定也可省去,但固定次数少,细胞质不易去掉,影响效果,固定次数多,离心后细胞损失多。这一茅盾的解决有待多次实验的摸索,原则上大型蛙可固定2-3次,小型蛙1次。
2、什么样的动物细胞可直接用于染色体标本制备
直接制备的话zd,就算是真皮层分裂旺盛的细胞,得到的分裂相也可能太少了,要制备比较多的染色体分裂相出来的话,可以对外周血液进行增内殖后制备起来多一点的,你可以取大鼠或者兔子静脉血,肝素钠抗凝,用细胞培养基(1640培养基混合小牛血清、抗生素、植物凝集素)37摄氏度进行48小时增殖。
当然要是您的条件不成熟的话,可以用小鼠的骨髓进行直接的染色体制备,容效果比真皮层细胞好的多。
3、小鼠骨髓细胞染色体标本制备和观察实验报告
首先要提前2小时向小鼠注射秋水仙素,处死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理盐水,离心取细胞(离心管底部),再经低渗处理,染色,滴冰片,镜检。很麻烦,具体的你可以去图书馆查阅相关资料(动物染色体制备)。
4、小鼠骨髓细胞的染色体标本一般制备成什么片
小鼠骨髓细胞的染色体标本一般制备成什么片
首先要提前2小时向小鼠注射秋水仙素,处死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理盐水,离心取细胞(离心管底部),再经低渗处理,染色,滴冰片,镜检.很麻烦,具体的你可以去图书馆查阅相关资料(动物染色体制备).
5、人体哪些细胞可以制备人类染色体标本
人的外周血淋巴细胞培养方法是1960年由Moorhead
提出来的。正常情况下,人外周血小淋巴专细胞都处在G1期(或G0期),属但在体外给予一定的条件,进行培养,经72
h就可获得大量的有丝分裂细胞。这种取材简易、用血量少的培养方法已被广泛采用。
在培养液中加入植物血凝素(PHA),淋巴细胞受到刺激可转化为淋巴母细胞,进入有丝分裂。短期培养后,经秋水仙素处理,可抑制细胞分裂时纺锤丝的形成,使细胞分裂停止在中期,同时它可改变细胞质的黏度,引起染色体在细胞质中分散。经低渗和固定,即可得到大量的、分散效果好的染色体分裂象。人体的1ml外周血中一般含有约(1~3)×106个小淋巴细胞,足够染色体标本制备和分析之用。
6、制备骨髓细胞染色体标本是怎样的
因为在之前你得到的染色体都处于不同的分裂期,预固定是为了使这些细胞及其染色体都固定在当前所处的时期,便于观察。
7、制作染色体标本需要采用哪种制片方法?
制片方法有:切片,撕片,压片。这些都是针对显微镜观察的,制作染色体标本,标本不是用显微镜观察的,直接肉眼观察,所以我们可以制作染色体模型。
8、动物染色体标本制备的原理及主要步骤
1)动物的选择,一般用小鼠,其繁殖能力强,易于饲养.我们常用的是它们的骨髓细胞和精巢,因其分裂指数较高,不用体外培养就可以得到分裂中期的细胞.
2)秋水仙素用量要注意,太多或处理时间过长,会导致染色体的过分凝缩或着丝点裂解,最终会引起染色体形态不正常,甚至被破坏或溶解。
3) 低渗处理很关键。低渗液的量、处理时间均与细胞的数量有关。低渗过度,细胞会破裂;低渗不足则染色体在一起,分散不开。
4) 离心速度或离心时间也能影响染色体标本的制备。离心速度过大或离心时间过长,则会引起细胞破裂;反之,离心速度过小或离心时间过短,则细胞沉降不下来,则会引起大量细胞的丢失。
5) 固定液要随用随配,固定彻底后再打散细胞团块,否则细胞容易破碎,染色体分散亦受到影响。
6) 载玻片要预冷.冷却不够,则会影响染色体的附着和铺展。
7) 用吸管吹散细胞时用力必须尽量轻柔,用力过大则会造成细胞破裂,而染色体也会弥散在溶液中,在随后的离心中将会丢失。
8) 滴片时的高度很重要,高度过低细胞不会破裂;过高则染色体过于分散甚至丢失,无法辨别出染色体的准确数量。