动物骨髓细胞染色体畸变

1、染色体畸变有什么影响

太有影响了
你现在还好
不过要严重些就容易发生各种疾病了
而且后代有畸形几率的

2、卫生部卫监发(1998)第19号文件

发文单位：卫生部
文 号：卫监发[1998]第19号
发布日期：1998-5-11
执行日期：1998-5-11

各省、自治区、直辖市卫生厅（局），中国预防医学科学院：

为进一步加强对涉及饮用水卫生安全产品评审工作的管理，现将《生活饮用水输配水设备及防护材料安全性评价规定》、《饮用水化学处理剂卫生安全评价规定》、《饮水处理器卫生安全与功能评价规定》、《反渗透饮水处理装置卫生安全与功能评价规定》印发给你们，请遵照执行。

附件：

1.生活饮用水输配水设备及防护材料安全性评价规定

2.饮用水化学处理剂卫生安全评价规定

3.饮水处理器卫生安全与功能评价规定

4.反渗透饮水处理装置卫生安全与功能评价规定

卫生部
一九九八年五月十一日

附件1：生活饮用水输配水设备及防护材料安全性评价规定

1.主题内容与适用范围

本规定规定了饮用水输配水设备（供水系统的输配水管、设备、机械部件）和防护材料的卫生安全性要求和监测检验方法。

本规定适用于与饮用水以及饮用水处理剂直接接触的物质和产品，这些物质和产品系指用于供水系统的输配水管、设备、机械部件（如阀门、加氯设备、水处理剂加入器等）以及防护材料（如涂料、内衬等）。

2.引用标准

GB5749－85 生活饮用水卫生标准

GB5750－85 生活饮用水标准检验法

GB7919－87 化妆品安全性评价程序和方法

3.内容

3.1 凡与饮用水接触的输配水设备和防护材料不得污染水质，管网末梢水水质必须符合GB5749－85《生活饮用水卫生标准》的要求。

3.2 饮用水输配水设备和防护材料必须按附录A的规定分别进行浸泡试验。

3.3 浸泡水需按附件A的方法进行检测。检测结果必须分别符合表1和表2的规定。

3.4 浸泡水尚需按附录B的方法进行下列毒理学试验。

3.4.1 急性经口毒性试验：LD50不得小于10g／kg体重。

3.4.2 两项致突变试验：基因突变试验和哺乳动物细胞染色体畸变试验，两项试验均需为阴性。

3.5 生产与饮用水接触的输配水设备和防护材料所用原料应使用食品级。

4.监测检测方法：见附件A和B

附件A.1饮用水输配水设备卫生标准检验方法

本方法适用于与饮用水接触的设备浸泡水水质的检验

1.样品预处理

1.1 采样：为尽可能符合应用条件，在浸泡试验中应使用输配水管或有关产品的最终产品。当最终产品容积过大时，可根据具体情况，按比例适当缩小。

1.2 预处理：用自来水将试样清洗干净，并连续冲洗30分钟，然后浸泡水立即浸泡。

1.3 浸泡试验：

1.3.1 浸泡水制备：

1.3.1.1 试剂：

1.3.1.1.1 纯水：用蒸馏水或去离子水，其电导率为＜2μS／cm.

1.3.1.1.2 0.025mol／L氯贮备液：取7.3ml试剂级次氯酸钠（NaClO，50g／L），用纯水稀释至200ml，贮于密闭具塞的棕色瓶中，于20℃避光保存，每周新鲜配制。

注1：测定氯含量：取1.0ml氯贮备液，用水稀释至1.0L，立即分析总余氯，将此值定为“A".

注2：测定所需的余氯：为了获得2.0mg／L余氯，需要向浸泡水中加入氯贮备液的量，按下式计算：

V——需加入氯贮备液的体积，ml

B——标准浸泡水的体积，L

A——氯贮备液的浓度，mg／L

1.3.1.1.3 0.04mol／L钙硬度贮备液：称取4.44g无水氯化钙（CaCl2）溶于纯水中，稀释至1.0L，充分混匀，每周新鲜配制。

1.3.1.1.4 0.04mol／L碳酸氢钠缓冲液：3.36g碳酸氢钠（NaHCO3）溶于纯水中，并用纯水稀释至1L，充分混匀。每周新鲜配制。

1.3.1.2 浸泡水的配制：配制pH为8、硬度为100mg／L、有效氯为2mg／L的浸泡水方法如下：取25mL碳酸氢钠的缓冲液（1.3.1.1.4）、25mL硬度贮备液（1.3.1.1.3）以及所需的氯贮备液（见1.3.1.1.2），用纯水稀释至1L.按此比例配制实际所需要的浸泡水。

1.3.2 浸泡：

1.3.2.1 浸泡条件：受试产品接触浸泡水的表面积与浸泡水的容积之比不小于在实际使用条件下最大的比例。对于输配水管应使用该类产品中直径最小的。

1.3.2.2 浸泡试验：

1.3.2.2.1 用试验用浸泡水充满受试水管或水箱，不留空隙，两端用包有聚四氟乙烯薄膜的干净软木塞或橡皮塞塞紧，在25±5℃避光的条件下浸泡24±1小时。

1.3.2.2.2 对于机械部件，如不能在部件内进行浸泡试验时，可将部件放在玻璃容器中浸泡，条件同上。

1.3.2.2.3 另取相同容积玻璃容器，加满试验用浸泡水，在相同条件下放置24±1小时，作空白对照。

1.3.3 浸泡水的收集和保存：浸泡一段时间后，立即将浸泡水放入预先洗净的样品瓶内。一般收集和分析间隔的时间尽可能缩短。水样收集和保存方法：按《生活饮用水标准检验法》（GB5750－85）。

2.检验方法：按GB5750－85《生活饮用水标准检验法》

附件A.2与饮用水接触的防护材料卫生标准检验方法

本方法适用于与饮用水接触的防护材料浸泡水水质的检验。

1.样品预处理：

1.1 试样的制备：

1.1.1 按生产厂提供的使用条件（如涂层厚度、涂后干燥时间等）制备试样可将涂层涂在玻璃片上，如玻璃片不合适，可根据生产厂的建议选用。

1.1.2 取70×300mm玻璃片，洗净烘干。在玻璃片两面70×120mm面积上，按实际使用厚度涂以涂料。在干燥处自然干燥，制成涂料片。

1.2 预处理：用自来水将试样涂料片清洗干净，立即进行浸泡试验。

1.3 浸泡试验：

1.3.1 浸泡水制备：同《饮用水输配水设备卫生标准检验方法》

1.3.1条。

1.3.2 浸泡条件：试样的表面积与浸泡水容积比为50cm2／L.如为多层涂料，则将各层涂料分别涂在玻璃片（或根据生产厂的建议选用）上，同时固定在浸泡水中。每种涂料试样与浸泡水容积比均按50cm2／L计算。

1.3.3 浸泡：

1.3.3.1 将试验片未涂防护涂料的部分分别插入放于玻璃容器中的玻璃固定架上，使样片保持垂直，互不接触；或者将试验片悬挂于玻璃容器中。在密闭、避光25±5℃温度条件下进行浸泡。于浸泡后1、3、5、10、20天和30天收集全部浸泡水，供检测分析用，观察溶出污染物浓度的衰减情况，第30天的浸泡水中污染物用于评价是否符合本卫生标准的规定。在收集浸泡水的同时，全部换入新的浸泡水。

1.3.3.2 制备空白对照时，除玻璃片上不涂防护材料外，其他一切试验条件同1.3.3.1.

1.3.4 浸泡水收集和保存：按GB5750－85《生活饮用水标准检验法》

2.检验方法：

2.1 甲醛按GB5009.69－85《食品罐头内壁环氧酚涂料卫生标准分析方法》游离甲醛测定。

2.2 乙醛、丙烯醛按GB1193489《水源水中乙醛、丙烯醛卫生标准检验方法气相色谱法》。

3.其他的方法按GB5750－85《生活饮用水标准检验法》。

附件B饮用水输配水设备及防护材料的卫生毒理学评价程序和方法

1.适用范围

本程序和方法适用于饮用水输配水设备（包括一切与饮用水接触的设备）和防护材料的卫生毒理学评价。当饮用水输配水设备和防护材料在水中的溶出物质未规定最大容许浓度时，需按本方法进行毒理学试验确定其在饮用水中的限值。

2.总要求

2.1 生产者必须提供以下资料：

2.1.1 产品应用条件、应用范围、理化性质；

2.1.2 配方、生产方法；

2.1.3 配方各成分的化学结构式、杂质成分和含量；

2.1.4 在饮用水浸泡过程中可能溶出的物质及估计浓度。

2.2 生产者必须根据实际应用情况制备试样和提供试验样品。

3.毒理学评价程序

根据饮用水输配水设备和防护材料在水中的溶出物质的浓度，分四个水平进行毒理学试验，以确定其在水中的最大容许浓度。

3.1 水平I：当溶出物质在水中的浓度＜10μg／L时选用。

3.1.1 试验项目：两项遗传毒理学试验

3.1.1.1 基因突变试验：Ames试验

3.1.1.2 哺乳动物细胞染色体畸变试验：体外哺乳动物细胞染色体畸变或小鼠骨髓细胞染色体畸变试验，或小鼠骨髓细胞微核试验任选一项。

3.1.2 结果评价

3.1.2.1 如果上述两项试验均为阴性，则可以投入使用。

3.1.2.2 如果上述两项试验均为阳性，则该产品不能投入使用或者进行慢性试验以便进一步评价。

3.1.2.3 如果上述两项试验中有一项为阳性，则需选用另外两项遗传毒理学试验作为补充，包括一种基因突变试验和一种哺乳动物细胞染色体畸变试验。如果均为阴性，则产品可投入使用，如有一项为阳性，则不能投入使用，或者进行慢性试验，以便进一步评价。

3.2 水平Ⅱ：当溶出物质在水中浓度等于或大于10μg／L～小于50μg／L时选用。

3.2.1 试验项目

3.2.1.1 水平Ⅰ试验。

3.2.1.2 大鼠90天经口毒性试验。

3.2.2 结果评价

3.2.2.1 对遗传毒理学试验结果的评价同水平Ⅰ。

3.2.2.2 通过大鼠90天经口毒性试验，确定溶出物质在水中的最高容许浓度（安全系数一般选用1000）。

3.2.2.3 当溶出物质在水中的实际浓度超过最大容许浓度时，不能投入使用。

3.3 水平Ⅲ：当溶出物质在水中浓度等于或大于50μg／L～小于1000μg／L时选用。

3.3.1 试验项目

3.3.1.1 水平Ⅱ试验。

3.3.1.2 大鼠致畸试验。

3.3.2 结果评价

3.3.2.1 对遗传毒理学试验结果评价水平同水平Ⅰ。

3.3.2.2 当致畸试验结果为阳性时该产品不能使用。

3.3.2.3 综合全部试验结果，确定溶出物质在水中的最大容许浓度。

3.3.2.4 当溶出物质在水中的实际浓度超过最大容许浓度时，不能投入使用。

3.4 水平Ⅳ：当溶出物质水中浓度＞1000μg／L时选用。

3.4.1 试验项目

3.4.1.1 水平Ⅲ试验。

3.4.1.2 大鼠慢性毒性试验。

3.4.2 结果评价

3.4.2.1 当致畸试验结果为阳性时，不能投入使用。

3.4.2.2 当致癌试验和遗传毒理学试验结果综合评价，溶出物质有致癌性时，不能投入使用。

3.4.2.3 根据慢性试验结果确定溶出物质在水中的最大容许浓度。

3.4.2.4 当溶出物质在水中的实际浓度超过最大容许浓度时，不能投入使用。

4.试验方法：见GB7919－87《化妆品安全性评价程序和方法》

附件2：饮用水化学处理剂卫生安全评价规定

1.范围

本规定规定了饮用水化学处理剂的卫生安全性要求和监测检验方法。

本规定适用于混凝、絮凝、消毒、氧化、pH调节、软化、灭藻、除氟、氟化等用途的饮用水化学处理剂。

3、致突变作用的检验方法

确定一种受试物是否具有致突变作用，须通过致突变试验，常用的致突变试验有以下几种：
染色体畸变分析是经典的遗传学试验方法，多用动物骨髓细胞和睾丸精原细胞进行试验，可分别检查体细胞和生殖细胞的突变，结果正确可靠，但试验工作量较大。用外周血细胞经短期体外培养进行染色体分析，可以直接应用于人体，并可在人体或动物连续进行多次动态观察。骨髓细胞微核检验，可以反映染色体经致突变物作用发生断裂后出现的微核。由于微核易于辨认，故适用于致突变物的初步筛检。其缺点为个体差异较大，且不够灵敏。姊妹染色体单体互换分析，是在致突变物作用下组成一条染色体的两个染色单体之间发生部分的互换，其出现频率与染色体畸变率呈相关关系，操作简便,反映亦较灵敏,近年来应用较多。
基因突变试验可用微生物或哺乳动物细胞株进行。一般多将突变型微生物或哺乳动物突变型细胞株接触受试物后,检查其再次发生突变的情况。使用较为广泛的是艾姆斯试验。系利用突变型鼠伤寒沙门氏菌株（TA1535、TA1537、TA1538、TA98和 TA100五种）并加入哺乳动物肝微粒体进行体外试验。这些菌株反应灵敏，可检出用其他方法不能检出的低剂量致突变物；且方法简便快速，费用亦较低，故得到广泛应用。但微生物的遗传信息仅相当哺乳动物的1/6，数量较少,结构亦较简单；哺乳动物具有较微生物完善复杂的DNA修复系统,遗传物质突变后较易修复（见环境污染与DNA修复）;微生物缺乏免疫机能，哺乳动物则具有较发达的免疫功能，故艾姆斯试验结果与哺乳动物体内实际情况，可能有一定差别。但艾姆斯试验灵敏度高，可在48小时迅速得出结果，费用较低,仍不失为一种较好的初筛方法。上述各种方法,都具有一定的局限性，故在实际工作中，通常都采用两种或两种以上的方法，以便进行综合分析和比较。

4、有一种药叫萌动激活？

是一种医学理论，萌动激活赤灵芝孢子粉用于治疗肿瘤，经临床试验专表明，灵芝孢子所含脂质属活性物质具有显著的抑瘤作用．可能不治疗心脏，肝病，肾病．国内商品名为"学者灵芝”北京地区有售。它是一种保健食品，能显著提高人体免疫力，迅速激发神经系统产生应急调节反应，疏导及恢复营养组织通道，修复损伤组织和促进细胞再生，对抑制肿瘤及肿瘤组织端粒酶活性和乙肝病毒具有显著的作用

5、食品毒理学评价评价程序中规定,需进行四个阶段毒理学实验项目的化学毒物是什么

第一阶段：急性毒性试验：它是一次性投较大剂量后观察动物的变化，观察期大约为1周，从而判定动物的致死量（LD）和半致死量（LD50）。半致死量是指实验动物死亡一半的投药量。如果投药量大于5000mg/kg，无死亡，可认为该品毒性较低，无需做致死量精确测定。
第二阶段：遗传毒性试验，30 天喂养试验，传统致畸试验
遗传毒性试验的组合应该考虑原核细胞与真核细胞、体内试验与体外试验相结合的原则。从Ames 试验或V79/HGPRT 基因突变试验、骨髓细胞微核试验或哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验、TK 基因突变试验或小鼠精子畸形分析（或睾丸染色体畸变分析试验）中分别各选一项。
①基因突变试验：鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验（Ames 试验）为首选，其次考虑选用V79/HGPRT 基因突变试验，必要时可另选其它试验。
②骨髓细胞微核试验或哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验。
③TK 基因突变试验。
④ 小鼠精子畸形分析或睾丸染色体畸变分析。
⑤ 其它备选遗传毒性试验：显性致死试验、果蝇伴性隐性致死试验，非程序性DNA合成试验。
⑥30 天喂养试验。
⑦ 传统致畸试验。
第三阶段：亚慢性毒性实验：实验期在3个月左右，检验该品的毒性对机体的重要器官或生理功能的影响包括繁殖和致畸实验
第四阶段：慢性毒性实验：考查少量该品长期对机体的影响，确定最大无作用量（MNL），一般以寿命较短敏感的动物的一生为一个试验阶段，如用大白鼠试验2年小白鼠试验1.5年。
国际上常用ADI、LD50作为主要毒性安全性指标为，其中，ADI值（Acceptable Daily Intake）也就是每天每千克体重允许摄入的毫克数，联合国FAO/WHO所属的食品添加剂专家联合委员会（JECFA）每年依据各国所用食品添加剂的毒性报告提出，由联合国食品添加剂法规委员会（CCFA）每年年会讨论，并对某种食品添加剂的ADI做出评价、修改或撤销各国对此都已接受。大家知道，ADI值是根据对小动物（大鼠、小鼠等）近乎一生的长期毒性试验中所求得的最大无作用量（MNL）,取其1/100-1/500作为ADI值。各国依据ADI值制定出允许在食品中的最大添加量，就食品安全性方面来看，应该说是有保证的。

1） 几种常见的食品添加剂的ADI值见表1
表1
品名 ADImg/kg 最大使用量g/kg 用途
六偏磷酸钠 0-70 5.0 方便面
三聚磷酸钠 0-70 5.0 方便面
磷酸二氢钙 0-70 4.0 面包,馒头,饼干
磷酸氢钙 0-70 1.0 发酵制品,婴儿食品
过氧化苯甲酰 0-40 0.06 面粉熟化,增白
硬酯酰乳酸钙(CSL) 0-20 2.0 面包糕点
硬酯酰乳酸钠(SSL) 0-20 2.0 面包糕点
苯甲酸 0-5 0.2-1 食品防腐
山梨酸 0-25 0.2-2 食品防腐
乳酸亚铁 0-0.8 0.2-0.5 豆奶粉,豆粉
丁基羟基茴香醚(BHA)0-0.5 0.1-0.2 食用油脂,油炸食品,饼干,方便面,速煮米
二丁羟基甲苯(BHT) 0-0.3 0.2 早餐谷类食品

注：食品添加剂在食品中的最大使用量一般是依据JECFA推荐的"丹麦预算法(DBM)"来推算的,这种方法目前已被世界各国公认和采用,即:食品添加剂的最大使用量=40×ADI

2） 半数致死量(LD50)
LD50是判断食品添加剂安全性的第二种常用指标,也是任何食品添加剂都必须进行的毒理学评价中的第一个阶段急性毒性试验指标，它一般表明了食品添加剂急性毒性的大小。我国《食品安全性毒理学评价程序和方法》(GB 15193.3-2003)颁布的急性毒性（LD50）剂量分级标准表中将用于食品中化学物质依据LD50分成六大类,如表2
表2
毒性级别大鼠口服LD50mg/kg相当于人的致死剂量mg/kg相当于人的致死剂量g/人
极 毒 <1 稍尝 0.05
剧 毒 1—50 500—4000 0.5
中等毒 51—500 4000—30000 5
低 毒 501—5000 30000—250000 50
实际无毒 5001—15000 250000—500000 500
无 毒 >15000 >500000 2500

一般来讲,对动物毒性很低的物质,对人体的毒性也很低，LD50越大表明其毒性越小,在食品使用时其安全性越高,表3是几种常见的食品添加剂的LD50。
表3
品名 LD50 mg/kg GB2760规定最大使用量g/kg 主要用途
过氧化苯甲酰 7710 0.06 面粉处理剂
苯甲酸 2530 0.2-0.8 食品防腐剂
丁基羟基茴香醚(BHA) 2000-5000 0.2 抗氧化剂
二丁羟基甲苯(BHT) 890 0.2 抗氧化剂
亚硝酸钠 220 0.15残留0.05 肉制品着色剂
亚硝酸钾 200 0.15残留0.05 肉制品着色剂
通过表3可以看出,过氧化苯甲酰属于实际无毒类,苯甲酸属于低毒类,而肉制品常用的亚硝酸钠和亚硝酸钾以及早餐谷类所添加的营养强化剂氧化锌,都属于中毒类。

6、氯化锂能不能毒死人?

氯化锂对小鼠体细胞遗传毒性作用的实验研究 锂盐广泛用于电池、化工、陶瓷制造业及冶金、国防等尖端工业，直接接触锂的工人不断增多，随之而产生的职业危害问题也日益增加；因锂盐具抗躁狂症的治疗作用而又被广泛应用于临床〔1〕。全世界每年用锂可达25 000吨。据WHO统计资料显示：全世界至少有5亿人患有各种心理精神障碍，占世界人口的10%。由于锂盐治疗剂量和中毒剂量的安全幅度小，常出现各种毒性作用且精神疾患的疗程长，故研究其长期慢性接触的危害，对其安全用药提供科学依据是很有必要的。目前，国内除伊龙赞进行过锂对小鼠骨髓微核率影响外，还未见其他有关锂盐对小鼠遗传毒性的报道，故本研究拟在本实验室对氯化锂生殖发育和免疫毒性及致畸试验的基础上观察氯化锂对昆明种小鼠不同组织体细胞的遗传毒性。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物 新疆医学实验动物中心提供健康昆明种小鼠18～25 g，25～30 g。 1.1.2 实验主要试剂 氯化锂：LiCl。H2O，分子量60.41，分析纯，上海试剂二厂提供。环磷酰胺(CP)：上海第十二制药厂提供。秋水酰碱：C22H25O6N,分子量399.43，昆明制药厂出品。 1.2 方法及观察指标 1.2.1 小鼠骨髓细胞染色体畸变试验 选健康性成熟昆明种小白鼠18～25 g，40只，雌雄各半，随机分为5组，3个染毒组及阴性和阳性对照组。剂量选择依据本实验室得LD50选定高剂量组为1/8 LD50，中剂量组为1/24高剂量组，低剂量组为1/80高剂量组，即各组剂量分别为：225，75，22.5 mg/kg氯化锂溶液，阴性对照组给予蒸馏水。连续灌胃染毒5天，每日1次，每日按体重调整灌胃量，阳性对照组于处死动物前1天给予腹腔注射CP40 mg/kg，各组动物均于处死前2～3小时腹腔注射秋水酰碱4 mg/kg，于末次染毒6小时后处死动物，取双侧股骨骨髓按常规程序制片，观察骨髓细胞染色体畸变率。 1.2.2 小鼠骨髓细胞微核试验 选健康性成熟昆明种小白鼠18～25 g，50只，雌雄各半，分组及各组染毒剂量同上。末次染毒24小时后处死小鼠取双侧股骨骨髓，按常规涂片，观察骨髓嗜多染红细胞微核率。 1.2.3 小鼠胎肝细胞微核试验 选健康性成熟昆明种小鼠25～30 g，按雌雄2∶1合笼，查到阴栓之日，记为受孕第0天，将孕鼠50只随机分为5组，分组与染毒剂量同上。在妊娠第14天1次给予灌胃染毒，在染毒后12～18小时处死小鼠，每窝至少取两只胎肝，按文献方法制片〔2〕，观察胎肝嗜多染红细胞微核率。 1.2.4 统计方法 采用PEMS软件包，用方差分析及两两比较的q检验、秩和检验进行资料的统计分析。 讨论 3.1 氯化锂对小鼠骨髓细胞染色体畸变率的影响 关于锂对骨髓细胞染色体畸变率的影响，国外曾有学者进行过报道，Bille等在1975年研究接受锂盐治疗病人后未发现骨髓细胞染色体出现任何染色体畸变〔3〕。Sobti研究了3种锂盐：氯化锂、碳酸锂、醋酸锂导致对小鼠骨髓细胞染色体畸变的情况，其结果显示这3种锂盐对小鼠染色体具有损伤作用，本次试验结果与其相一致，许多化合物诱发的基因突变与染色体畸变高度相关，有研究表明：锂可选择性地与DNA结合，也可以与Mg2+竞争而减弱DNA的合成和修复，从而诱发染色体畸变〔4〕。本次试验结果畸变类型以裂隙、断裂、环为最。其中断裂环为染色体型畸变，属“不稳定”畸变，常导致细胞的死亡，裂隙若可确定为染色单体型畸变，则其引起的损伤若经错误修复就易致遗传损害，可作为一个敏感的遗传毒理学的参数。本实验结果表明，225.0 mg/kg剂量的氯化锂对小鼠骨髓细胞具有遗传毒性作用。 3.2 氯化锂对小鼠骨髓细胞微核率的影响 检测哺乳动物骨髓细胞微核率是测定诱发染色体损伤的常用致突变短期检测方法之一，微核是细胞因受损在有丝分裂后期仍留在细胞质内的丧失着丝点的染色体断片或染色单体断片。本次实验结果表明，225.0 mg/kg剂量的氯化锂可以引起小鼠骨髓细胞染色体的断裂损伤。 3.3 氯化锂对小鼠胎肝微核率的影响 实验证明，许多化学物对胎鼠肝细胞染色体损伤的程度大大超过对母鼠骨髓细胞染色体的损伤作用。所以仅用成年动物的体内试验不一定能可靠地预测胚胎期接触遗传性毒物对胎儿造成的危害，并且动物整个一生中供给新生细胞的干细胞都是在胚胎发育期形成。因此，胚胎期间的染色体损伤可使出生后的子代对肿瘤和其他疾病的敏感性增强，胚胎期间受诱变剂的作用，还可使新生儿畸形率升高。因此，评价化学物质的潜在性遗传危害时，对胎儿的影响必须给以足够的重视。因为哺乳动物在妊娠期胎盘的新陈代谢活跃，增加了母体对诱变物的敏感性。幼稚的胚细胞分裂旺盛，对诱变物也相当敏感。一些前诱变物和前致癌物在肝内代谢、活化，导致肝内诱变因子的浓度增高。所以胎儿细胞的染色体在某些毒物的作用下发生断裂，使微核出现增高。因此，胚胎细胞微核试验可用来检测在骨髓微核试验中不敏感的前诱变物和前致癌剂并筛选能通过胎盘屏障而传给子代以及易在胎儿体内积蓄的化学诱变剂。我们在测胎鼠胎肝嗜多染红细胞微核率的同时，对母体骨髓细胞微核率进行了观察，实验结果表明，氯化锂对胎鼠具有明显的遗传毒性作用。同时比较相同剂量下的骨髓细胞微核率与胎肝细胞微核率，表明母体骨髓细胞对染色体断裂剂不如胎鼠肝嗜多染红细胞敏感。 综合上述试验结果可认为：氯化锂灌胃染毒对昆明种小鼠体细胞具有遗传毒性作用，其对胎鼠体细胞的遗传毒性作用更为明显，有必要进一步研究氯化锂对小鼠生殖细胞的遗传毒性作用。

7、三项遗传毒性试验是指代哪三项

通常是在啮齿类动物试验中评估致癌性风险，包括周期为2年的试验或采用替代模型而周期较短的试验。通过ICH程序，企业和管理者接受了遗传毒性核心组合试验方案。这些试验是用于确定化合物的遗传毒性，包括：
■一项细菌基因突变试验
■一项采用哺乳动物细胞进行的体外染色体损伤评估试验，或体外小鼠淋巴瘤tk+/-试验
■一项采用啮齿类动物造血细胞进行的体内染色体损伤试验。
如果ICH推荐的标准三项试验组合中任何一项结果为阳性，建议完成ICH试验组合中的第四项试验。若结果模棱两可时需重复试验以确定结果的可重现性。如果一项或多项试验结果为阳性，申办人应考虑以下选择中一项或更多项。

A.证据权衡法（Weight-of-evidenceapproach）
在某些情况下，在对所有现有资料进行评估后，证据权衡提示无遗传毒性危害。例如，在体外细胞遗传学试验的一种暴露方案下出现了阳性反应，这个阳性结果仅在高剂量时出现，而发生率升高的程度在所用溶剂和细胞系的历史对照数据范围内或刚刚超出该范围。证据权衡后可能提示，虽然染色体异常频率的轻微升高有统计学意义，但无生物学相关性。有帮助的考虑因素包括（1）在出现阳性结果的剂量时细胞毒性的水平，（2）相同试验或补充试验的确证性数据。例如，在无代谢活化下短期暴露时出现阳性结果，但在相当细胞毒性水平的长期暴露中未得到确证，这时阳性结果可能不具有生物学意义。相似地，在体外染色体异常试验得到阳性结果，而在相当暴露方案下小鼠淋巴瘤试验未得到确证，也可对该阳性结果的意义产生疑问。如果证据权衡法提示无遗传毒性危害，可进行重复给药的临床试验，该阳性结果应写入研究者手册和知情同意书。
B.作用机制
有些情况下作用机制的相关信息可以满意地解释阳性结果出现的原因。例如，资料显示，过高的克分子渗透压浓度或较低的pH可导致体外诱裂作用。在这种非生理性暴露条件下出现的阳性反应与人体风险无相关性。此外，一些遗传毒性反应被认为产生风险存在阈值。有些药物通过非直接机制产生影响，例如干扰核苷及其前体的代谢、损伤纺锤体蛋白、抑制DNA合成或抑制拓扑异构酶，这些药物的遗传毒性可能具有阈值。在这种情况下，我们建议提供阈值存在的证据，而该阈值在拟进行的临床暴露过程中可能达不到，或者存在的机制证据在体内预期是无效的。如果阳性反应能被MOA合理解释时，可能会允许在正常志愿者或病人上进行临床试验而不需要附加试验。

C.附加的支持性试验
有些情况下，体外试验的结果显示出了可重复性的阳性的剂量反应关系。骨髓细胞遗传学试验的结果经常为阴性，即使是体外遗传毒性试验结果为阳性的药物。这种差异可能来源于培养细胞和整体动物间的多种差异：体外和体内不同的代谢途径，整体动物的代谢灭活作用，母体化合物或活性代谢产物不能到达靶细胞，或者很简单，体内血浆药物浓度不能达到在体外试验中产生阳性反应的药物浓度。
对于确证体外试验的阳性结果，附加的体内试验可能很有用。例如，小鼠重复给药毒性试验中进行外周血涂片，可以用来评估诱导微核的作用，大鼠或猴重复给药毒性试验进行外周血淋巴细胞培养，可用于评估细胞分裂中期的染色体损伤。在潜在的靶组织中应评估DNA损伤（如通过彗星或碱基洗脱试验来评估DNA加合物或DNA链断裂），或用转基因大鼠或小鼠来评估在可能的靶组织中的诱变性。
当体外遗传毒性试验结果为阳性时，叙利亚仓鼠胚胎细胞（Syrianhamsterembryo，SHE）转化试验可用作附加试验。文献资料显示，通常化学物质的SHE试验与啮齿类动物致癌性试验结果具有良好的相关性(Isfortetal.1996)。国际生命科学会（，ILSI)对人用药物进行确证性研究，虽然是较小范围进行，但结果提示SHE试验对人体致癌性风险的预测能力较差(Mautheetal.2001)。对于人用药物，ILSI研究发现SHE对于检测人类致癌性具有高敏感性（83%）；但是，对于假定的人体非致癌剂（putativehumannoncarcinogens）预测的特异性较低（15%），这导致总体一致性仅为37%。虽然，转化试验检测的终点与所担忧的健康影响（癌症）更为接近，可能在进行证据权衡判断时有用，他们也有其固有的局限性。在两年啮齿类致癌性试验中表现出阳性结果的很多药物，是通过扩大的药理学作用、免疫抑制或激素失衡出现的。体外试验如何能反映出这些机制尚不明确。
在最近几年中，已经有一些转基因小鼠可以在短期致癌性试验中应用。研究显示p53单一缺陷小鼠在致突变性致癌剂的鉴定方面有用(MacDonaldetal.2004)。当p53致癌性试验结果阴性时，可认为一种遗传毒性药物不会通过p53介导的机制对人类产生致癌性危害。
一个药物的一项ICH指定的试验结果为阳性时，支持性试验有助于证据权衡，以判断是否可为参加临床试验的受试者带来产生遗传损伤的风险。确定是否需进行潜在致瘤性的早期评价，可能是必要的，这将基于在具体情况具体分析基础上。影响这个决定的因素包括目标人群、适应症、暴露时间、同系的其他药物或相同用途的其他药物的安全特性。

8、化学品毒性鉴定技术规范的鉴定程序和方法

化学品毒性鉴定分为4个阶段
（1）第一阶段（急性毒性试验、眼刺激试验和皮肤刺激试验）
主要是急性毒性参数的测定和了解受试样品对皮肤、粘膜的刺激性以及致敏性，为毒性分级和标签管理提供依据。同时，可了解受试样品对机体造成急性损害的可能性和严重程度，并为第二阶段各项试验的剂量设计提供依据。在测定LD50时，一般要求用两种动物，染毒途径应包括所有人体可能的接触途径。
· 急性吸入毒性试验
· 急性经皮毒性试验
· 急性经口毒性试验
· 急性眼刺激性/腐蚀性试验
· 皮肤刺激性/腐蚀性试验
· 皮肤变态反应试验（皮肤致敏试验）
（2）第二阶段（亚急性毒性试验和致突变试验）
主要是了解受试样品的亚急性毒性和遗传毒性，为第三阶段各项试验剂量设计和观察指标的选择提供依据，并对受试样品的致癌性进行预测。
· 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）
· 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验
· 体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验
· 体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验
· 哺乳动物精原细胞/初级精母细胞染色体畸变试验，或
· 精子畸形试验
· 啮齿类动物显性致死试验
· 免疫毒性评价试验方法
· 亚急性吸入（14/28天）毒性试验
· 亚急性经皮（21/28天）毒性试验
· 亚急性经口（28天）毒性试验
（3）第三阶段（亚慢性毒性试验、致畸试验、繁殖试验）
通过亚慢性试验进一步确定多次重复染毒的毒作用性质和靶器官，初步确定NOAEL或LOAEL，为第四阶段各项试验的剂量设计和观察指标的选择提供依据；通过致畸试验判断受试样品的胚胎毒性及其是否有致畸性。通过繁殖试验，可判断受试样品对生殖过程的损害作用。通过迟发性神经毒性试验，可判断受试样品是否具有迟发性神经毒作用。
· 亚慢性吸入毒性试验
· 亚慢性经皮毒性试验
· 亚慢性经口毒性试验
· 致畸试验
· 两代繁殖毒性试验
· 迟发性神经毒性试验
（4）第四阶段（慢性毒性试验和致癌试验）
通过慢性毒性试验可确定受试样品的NOAEL和LOAEL，为推算受试样品的安全接触限值提供依据。通过致癌试验可以确定受试样品对受试实验动物的致癌性。通过代谢动力学试验可以了解受试样品的吸收、分布、代谢和排泄特点，了解蓄积毒性作用及其可能的靶器官和毒作用机理。
· 慢性吸入毒性试验
· 慢性经皮毒性试验
· 慢性经口毒性试验
· 致癌试验或慢性毒性试验合并致癌试验
· 毒物代谢动力学试验
参考方法
· 皮肤变态反应试验-局部淋巴结法
· 大肠杆菌回复突变试验
· 酵母菌基因突变试验
· 体外哺乳动物细胞正向基因突变试验
· 果蝇伴性隐性致死试验
· 枯草杆菌基因重组试验
· 体外哺乳动物细胞程序外DNA合成（UDS）试验
· 体内哺乳动物外周血细胞微核试验
· 体外哺乳动物姊妹染色单体交换（SCE）试验
· 体内哺乳动物骨髓细胞姊妹染色体交换（SCE）试验
· 繁殖/生长发育毒性筛选试验
· 亚急性毒性合并繁殖/发育毒性筛选试验
· 一代繁殖试验
· 神经毒性筛选组合试验

9、吉林大学卫生检测中心的毒理学检测

1
急性毒性试验
《化学药品和治疗用生物制品研究指导原则（试行）》（国家药品监督管理局2002年版）
《化妆品卫生规范》（卫生部2002年版）《农药登记毒理学试验方法》(GB15670-1995)
《保健食品检验与评价技术规范》(卫生部2003年版)
《食品安全性毒理学评价程序和方法》（GB15193-2003）
2
长期毒性试验（慢性毒性试验）
3
致畸试验
4
鼠伤寒沙门氏菌营养缺陷型回复试验（Ames试验）
5
微核试验（啮齿动物、动物骨髓嗜多染细胞、骨髓细胞）
6
急性眼刺激
《化学药品和治疗用生物制品研究指导原则（试行）》（国家药品监督管理局2002年版）《化妆品卫生规范》（卫生部2002年版）《农药登记毒理学试验方法》(GB15670-1995)
7
急性皮肤刺激试验
8
哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验
《农药登记毒理学试验方法》(GB15670-1995)《化妆品卫生规范》（卫生部2002年版）《保健食品检验与评价技术规范》(卫生部2003年版)《食品安全性毒理学评价程序和方法》（GB15193-2003）
9
皮肤变态反应试验
《化妆品卫生规范》（卫生部2002年版）《农药登记毒理学试验方法》(GB15670-1995)
10
小鼠精子畸形试验
《化妆品卫生规范》（卫生部2002年版）《保健食品检验与评价技术规范》(卫生部2003年版)《食品安全性毒理学评价程序和方法》（GB15193-2003）
11
体外培养哺乳动物细胞染色体畸变试验
《化妆品卫生规范》（卫生部2002年版）《化学药品和治疗用生物制品研究指导原则（试行）》 （国家药品监督管理局2002年版）
12
繁殖试验
《农药登记毒理学试验方法》(GB15670-1995)《食品安全性毒理学评价程序和方法》（GB15193-2003）《保健食品检验与评价技术规范》(卫生部2003年版)
13
小鼠睾丸染色体畸形试验
《保健食品检验与评价技术规范》(卫生部2003年版)《食品安全性毒理学评价程序和方法》（GB15193-2003）
14
非程序性DNA合成试验