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骨髓标本保存

发布时间:2020-10-30 14:59:16

1、牛蛙骨髓细胞染色体标本文献有哪些

蛙骨髓细胞染色体玻片标本的制作

一、实验目的
1、了解动物细胞染色体制片的原理。
2、学习蛙骨髓细胞染色体制片的方法。
3、观察蛙染色体的数目和形态。
二、实验原理
小型动物染色体制片最好、最有效的材料就是骨髓组织。在骨髓细胞中,有丝分裂指数相当高,可直接得到中期细胞。为提高有丝分裂指数,实验前,于动物腹腔内注射一定量的秋水仙素溶液,取骨髓后,经低渗处理、固定、滴片、空气干燥后即可获得良好的中期分裂相。
三、实验材料、
蛙类
四、器具及药品
注射器,离心管、解剖器、离心机,冰箱、电子天平,显微镜,搪瓷缸,载玻片,烧杯,滴管,秋水仙素,KCl,甲醇、冰乙酸,乙醇。
五、实验步骤
一离心法(适合于个体大的蛙)
1、前处理
目的:改变细胞质的粘度,抑制或破坏纺锤体的形成,使染色体缩短和分散,获得较多中期分裂相。
实验前8-20小时,将蛙称重,按每克体重10-40ug的剂量(无尾类10-20ug,有尾类30-40ug)经腹腔注射秋水仙素溶液,秋水仙素溶液浓度100-1000ug/ml,按蛙大小来配。
2、取骨髓细胞
将蛙麻醉,用手术剪剥开腹腔,取下四肢骨,剔净肌肉,放到盛有0.046mol/l的KCl的小烧杯中洗一下,用镊子夹出来,剪掉两端关节,将装有0.046mol/l的KCl的注射器从骨一头插入,冲骨髓细胞于干净的离心管内,反复冲洗几次,直到骨变白为止。注意这一过程不要让组织块掉入离心管。
3、低渗处理
目的:使细胞吸水膨胀,细胞膜易破裂,有助于染色体的分散。
当骨髓细胞全部冲入离心管后,开始计时,即低渗开始。室温下低渗处理30-40分钟,在此过程中,要用吸管反复吹打。
另外取预先洗净的载玻片放入盛有蒸馏水的搪瓷缸中,置冰箱中冰冻。
4、固定
目的:尽快杀死细胞,使细胞尽可能保持原有的状况,并且还可以去掉细胞质。
将离心管两两平衡后,对称放入离心机内,以1000转/分离心10分钟,轻轻取出,弃上清液,沿管壁缓慢加入现配卡诺氏固定液6ml左右,并用吸管吹散细胞团,固定30分钟,平衡后再离心,弃上清液,加卡诺氏固定液进行第二次固定。
注意,固定液要现配,每次离心前都要平衡,离心的时间、速度均同第一次。由于每离心一次,细胞要损失30%左右,因此对个体小的蛙第二次固定也可省去,但固定次数少,细胞质不易去掉,影响效果,固定次数多,离心后细胞损失多。这一茅盾的解决有待多次实验的摸索,原则上大型蛙可固定2-3次,小型蛙1次。

2、制备骨髓细胞染色体标本是怎样的

因为在之前你得到的染色体都处于不同的分裂期,预固定是为了使这些细胞及其染色体都固定在当前所处的时期,便于观察。

3、制备小鼠骨髓染色体标本过程中有哪几个主要步骤影响制片结果

在制备小鼠骨髓细胞染色体标本过程中以下几个步骤需要注意:

提前3-4小时候注射秋水仙素,时间太长或者太短都会影响染色体中期的数目和形态。

在低渗过程中时间和吹打都很重要,低渗过度染色体膨胀,染色后肥肥的,低渗时间不过染色后染色体颜色很深看不出条带。

滴片,如果是教学的实验,要求玻片是冰的,而且要倾斜,滴的高度一般在25-30CM,滴完要过酒精灯,让固定液蒸发。滴的数量不要太多否则会重叠.如果是医院里的染色体制片有专门的滴片机。

小鼠骨髓细胞染色体标本制作:

原理:

由于小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞,具有高度的分裂能力,本实验采用这一材料,通过前处理,低渗,固定,制片,染色等步骤制得染色体标本,可观察到许多处于分裂中期的染色体,可以进行染色体组型分析;

试剂、试剂盒:秋水仙素、姬姆萨染液、固定液、低渗液、生理盐水;

仪器、耗材:天平、离心机、恒温培养箱、显微镜;

实验步骤

一、材料和方法

1.  材料:小白鼠。

2.  设备:天平,离心机,恒温培养箱,显微镜。

3.  药品:秋水仙素,姬姆萨染液,固定液,低渗液,生理盐水。

二、步骤

秋水仙素处理--取骨髓--低渗处理--固定--离心--再固定--再离心--滴片--染色--镜检--封片。

4、血标本、骨髓标本送检要注意哪些?

如果是采集要求的话,要用抗凝采血管,运输的话,一个星期之内可以用常温运输,注意用泡沫等塞满多余空隙,用海绵之类的包裹好血管,要防震,以免采血管破裂。如果时间更久的话,就要用生物冰袋运输啦··

5、如何判断骨髓标本是否被稀释?

如果病情不是三系减少明显的,肉眼看跟血一样,没有小粒的,最主要染一下放显微镜一看,有核细胞少得可怜就是稀释了。

6、医考问答提:骨髓标本采集如何穿刺?

骨髓标本大部分采用穿刺法吸取,骨髓穿刺部位选择一般要从以下几个方面考虑:
①骨髓腔中红骨髓丰富;
②穿刺部位应浅表、易定位;
③应避开重要脏器. .
临床上常用的穿刺部位包括胸骨、棘突、髂骨、胫骨等处 髂骨后上棘此处骨皮质薄,骨髓腔大,进针容易,骨髓液丰富,被血液稀释的可能性小,故为临床上首选的穿刺部位

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