骨髓间充质干细胞的原代培养

1、间充质干细胞原代培养首次换液怎么换

只要吸出一半弃去，

留在培养瓶中一半，
再加入等量新鲜培养基吹吸均匀或摇匀就可以了，（仅供参考）

2、骨髓基质细胞和骨髓间充质干细胞的区别

骨髓基质细胞是存在于骨髓中的一类多能干细胞，具有分化成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和其他几种结缔组织细胞（如腱细胞）。亦可转分化成心肌细胞和骨骼肌细胞。骨髓间充质干细胞现已被归为结缔组织成体干细胞。事实上，骨髓基质细胞中的间充质干细胞数量是很少的，约占细胞总数的10万分之一，其定向分化也不均一，现在越来越多的研究揭示骨髓间充质干细胞及其初步分化的祖细胞或称前体细胞(precusor, progenitor cells)具有一些特殊的表面蛋白特征；此外，干细胞具有多向分化及自我更新能力，其细胞复制分裂方式是不对称分裂，这明显不同于普通的细胞。通过贴壁法或Percoll等细胞分离介质只能获得混合的骨髓基质细胞，只有应用免疫磁珠、流式细胞仪等将其进一步分离纯化后，才能称为骨髓间质干细胞。（河南省干细胞库）

3、骨髓间充质干细胞表面标志物cd45是单标还是双标

不同的干细胞有自己特异的细胞表面抗原，鉴定细胞的种类最准确直接的方法就是用流式细胞仪检测其表面抗原。
以骨髓间充质干细胞（MSC）为例，需要鉴定CD34、CD44、SH1等表面标志。除此之外，骨髓间充质干细胞还需要进行分化实验，以回证实其可以分化为骨、软骨、细胞。以上两条，即表面标志及分化实验没有问题，就可以确定培养的细胞为骨髓间充质干细胞。
不同的干细胞有不答同的表面标志及分化能力，所以MSC只是做为一个例子来说明。

4、培养骨髓间充质干细胞必须用塑料培养皿吗

总结下各种孔板细胞接种量 仅供参考 细胞培养瓶（板）生长面积容量与细胞数（大约） 96孔板 4~5X10 4 35mm培养皿 1X10 6 48 孔板 1.3X10 5 60mm培养皿 2.6X10 6 24孔板 2.5X10 5 100mm培养皿 7X10 6 12孔板 5X10 5 150mm培养皿 1.8X10 7 6孔板 1.2X10 6 细胞瓶面积 容量 工作体积 细胞数目 612.5cm2 25ml 2ml 5X10 5 25cm2 50ml 5ml 1X10 68 35cm2 75ml 10ml 2X10 6 75 cm2 250ml 15ml X10 6 150cm2 700ml 40ml 1.1X10 7 补充：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。

5、骨髓间充质干细胞与什么细胞可以共培养

髓核细胞与骨髓间充质干细胞共培养，影响髓核细胞的活知性，经共培养的髓核细胞增殖速度、蛋白多糖合成量较对照组提高明显，髓核细胞活性上调道。　

睾丸支持内细胞与骨髓间充质干容细胞在体外共培养的早期，睾丸支持细胞可以显著促进间充质干细胞的生长，但在后期则反而抑制间充质干细胞的生长。

6、如何保存大鼠腿骨组织，取骨过程是否要求绝对严格无菌？准备提取骨髓间充质干细胞进行原代培养。

没那么严格要求的 我们这边有做组织工程的实验室 早上去菜市场还是屠宰场的 买了骨头 然后拿回去取细胞培养都没问题的