骨髓造血干细胞培养

1、造血干细胞体外定向诱导分化，为什么不用骨髓干细胞

探讨体外诱导人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived mesenchymal stem cells, hBMSCs)定向诱导分化为心肌样细胞的实验条件。 方法:取成人弃骨骨髓,通过全骨髓贴壁法分离培养hBMSCs。在传至第三代时,筛选具有心肌特异性分化潜能的c-kit~+的hBMSCs细胞克隆,用含20%胎牛血清的低糖DMEM培养液继续克隆培养。当细胞达到70%融合时,分别用10μmol/l5-氮胞苷(5-azacytidine crystalline,5-aza),100mg/l参麦注射液,10μmol/l5-氮胞苷和100mg/l参麦注射液3组诱导剂诱导hBMSCs。24小时后,更换为含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液继续培养。在诱导3周后,通过显微镜下观察其形态变化。用免疫细胞化学方法检测心肌特异性标记抗原Desmin和肌钙蛋白T的表达;用RT-PCR方法检测心肌特异基因心房利尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)和脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)表达。 结果:骨髓中含有多种hBMSCs细胞克隆,其中成纤维细胞样克隆表达c-kit~+。分别用3组诱导剂诱导c-kit~+细胞15天后,部分细胞胞体明显增粗,可见有些细胞间有融合样现象发生。诱导3周后,3组都有类似肌管样细胞出现,细胞短粗,呈不规则的圆柱形,有分支,互相连成网。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin HE)染色后,3组细胞都排列规则,类似于心肌细胞的形态,可见部分细胞有排列规则的横纹样结构。免疫细胞化学显示诱导3周后的hBMSCs,Desmin阳性细胞数目分别是:5-aza组(65.3±4.7%),参麦注射液组(62.3±3.9%),5-aza和参麦注射液组(68.5±2.1%),3组Desmin阳性细胞表达率无显著差异; cTnT阳性细胞数目分别是:5-aza组(62.2±4.1%),参麦注射液组(63.8±3.4%), 5-aza和参麦注射液组(66.0±6.2%),3组Desmin阳性细胞表达率无显著差异。阴性对照组和未分化的hBMSCs均无Desmin和cTnT的表达。RT-PCR显示3种不同的诱导剂诱导hBMSCs3周后都有ANP,BNP的表达,未分化的hBMSCs无ANP,BNP的表达。 结论:5-aza和中药可以诱导c-kit~+的hBMSCs细胞克隆分化为心肌样细胞。体外诱导成的心肌样细胞表现为未成熟心肌细胞的结构和功能特征。证明骨髓中含有多种干细胞克隆,c-kit可作为筛选hBMSCs向心肌样细胞分化的一项检测指标。筛选具有心肌特异性分化潜能的hMSCs可提高诱导分化率。

2、关于造血干细胞

1.根据我国《献血者健康检查要求》“……眼底有变化的高度近视等”不能献血。
因为献血有可能破坏眼压平衡，轻微的血压波动对于高度近视者可能造成血管痉挛，影响视力。
所以，从保护献血者角度出发不提倡献血。
2.捐献造血干细胞一般就是捐献骨髓，一般骨髓捐献的采集量是50-100ml（采集直接输入HLA匹配受体），如果是骨髓体外培养回输的话采集量是10ml。如果想要捐献骨髓，建议个人慎重考虑，官方声明捐献骨髓对身体无害，事实上捐献骨髓对身体是有很大影响的。人体骨髓腔中含红骨髓和黄骨髓，当人体少量失血（小于200CC）时，红骨髓产生造血干细胞，造血干细胞分化成血细胞补充人体所失血细胞；当人体大量失血（小于800CC）时，人体需要及时输血，体内少量黄骨髓转变为红骨髓，加速造血干细胞的生成；当人体大量失血大于800CC时，人体极度危险，不及时输血即死亡。人体中的红骨髓会随着年龄的增长而不断减少，所以捐献红骨髓后，在未来的几年里需要合理的调理身体，红骨髓的含量会得到一定的恢复。

3、造血干细胞与骨髓细胞有什么区别

指导意见：造血干细胞也称为多能造血干细胞，是骨髓中的原始造血干细胞，具有自我更新和分化成各种血细胞的功能，而血液中主要是骨髓造血干细胞分化成熟后才释放进去的，造血干细胞主要还是存在于骨髓中，那里的微环境适合造血干细胞生长繁殖和分化。

4、造血干细胞0.4

造血干细胞是体内为数不多的非贴壁细胞，非常适合于静脉注射，并且血管注册的造血干细胞非常容易通过血液循环迅速到达全身各处，起到全身性组织器官的抗衰老作用，是“返老还童”的优选方法之一， 然而造血干细胞在体内通常情况下存在于骨髓中，只有打动员剂之后才能释放到血液中，动员后获得的造血干细胞数量也有限，因为做一次全身性抗衰老的注射，需要1-10个细胞，因此动员获得的造血干细胞需要在体外迅速放大扩增之后才能达到回输所需要的，其中放大培养过程中，有两个要素需要考虑：1）扩增所需的细胞数所需要的时间；2）扩增后后的造血干细胞其核型及分化潜能性要保持不变。为了优选一种好的培养方法，我们系统比较了Invitrogen、Lonza、StemCell、佰通生物、赛业、百恩维的同类产品：

1） 培养基稳定性：造血干细胞表面抗原的比例、核型分析的情况以及分化成T细胞、DC-CIK细胞、NK细胞的潜能与扩增前的一致性。 我们发现Invitrogen、Lonza、佰通生物的稳定性最佳，基本保持在扩增前的80%以上，核型分析没有发现异常。
2） 扩增速度：从单位时间获得的细胞数量多少来评估，佰通生物的AdvCell系列造血干细胞无血清培养基效果比其他培养基效果稍快些。其中佰通生物的一款AdvCell造血干细胞无血清完全培养基配有细胞增殖所需要的全部因子，操作简便，效果最佳，信价比也不错。

5、骨髓移植与造血干细胞移植有什么区别？

一、指代不同

1、骨髓移植：是通过静脉输注造血干、祖细胞，重建患者正常造血与免疫系统，从而治疗一系列疾病的治疗方法。

2、造血干细胞移植：患者先接受超大剂量放疗或化疗（通常是致死剂量的放化疗），有时联合其他免疫抑制药物，以清除体内的肿瘤细胞、异常克隆细胞，然后再回输采自自身或他人的造血干细胞，重建正常造血和免疫功能的一种治疗手段。

二、特点不同

1、骨髓移植：使用预处理方案可以制造空间、免疫抑制以及清除疾病。预处理方案的强度以既可以达到最大限度的防止移植排斥、又可达到患者对其副作用的耐受为目标，故有多种预处理方案可供选择。

2、造血干细胞移植：血缘关系供者造血干细胞移植和无血缘关系供者造血干细胞移植（即无关移植）；按移植物种类分为外周血造血干细胞移植、骨髓移植和脐带血造血干细胞移植。

三、发展不同

1、骨髓移植：随着移植技术的提高，其疗效已经渐趋稳定。移植供者的选择困难成为制约移植的主要障碍。HLA不完全相合的亲属供者、HLA单倍体相合亲属供者及无关供者的应用及相关技术改进成为临床研究的热门课题，非清髓技术也带来了观念上的革命。

2、造血干细胞移植：有很多先进的药物从遗传学水平治疗这些患者，但是异基因造血干细胞移植仍是治愈这些疾病的惟一治疗手段。

6、造血干细胞有哪些用途？

干细胞在治疗癌症、心脏病、糖尿病、皮肤烧伤等等人类许多顽症方面都有不可替代的重大作用。如帕金森氏综合症患者主要是神经细胞在功能上出现紊乱，如果能给患者注入健康的神经细胞，就会有治疗效应；如果能从胚胎中鉴别和提取到能生成黑色素细胞的干细胞，就可以用这样的干细胞很容易地分化培养出大量黑色素细胞，以治疗白癜风。

最新的研究发现，干细胞不但能再生某些组织，而且可以衍生成与其来源不同的细胞类型。如把血液干细胞放到脑组织中，在大脑环境中，血液干细胞有可能分化成神经细胞。反过来，如果将分离出的神经干细胞移植到骨髓里，它还可以变成血液细胞。正是由于人的胚胎干细胞培养成功和组织干细胞对人类健康的潜在价值，因而引发了世界范围内的干细胞研究热。

近年来，科学家发现脐血中也含有丰富的造血干细胞。脐血是为胎儿输送养料的运输部队，胎儿在脐血的哺育下健康地成长。过去，当胎儿离开母体后，脐血就被认为是完成了它的历史使命，弃之无用了。而现在人们的看法随着医学研究的飞速进展而发生了重大变化。

原来，新生儿出生后，其脐带血里残存有较丰富的造血干细胞，且在脐带血中所占的比例并不亚于骨髓内的造血干细胞。脐血中的干细胞比成人骨髓中的干细胞更原始，有利于重建永久的造血功能，而且发生排斥反应的机会少，对组织配型的要求也不那么严格。而且脐血中的干细胞含量非常丰富，比骨髓中的干细胞含量要多10倍，般只需50毫升就能够满足手术的需要。一份脐血就能挽救一个生命。脐带血的来源比骨髓的来源容易获得，而且是不含白血病细胞的正常血，它的移植不但能克服了异体骨髓移植中骨髓来源不易的困难，并且能避免自体骨髓移植后的疾病复发问题。因此，采用来源于脐带血的造血干细胞取代骨髓造血干细胞进行的移植方法，已经引起各方面的重视。脐带血移植是新开展的一项白血病治疗手段，目前应用于儿童白血病的治疗上，已有令人满意的疗效，现正在探索应用于成人的白血病治疗上。

1981年1月，我国医学工作者首次对一例重症乙型地中海贫血患者实施脐血移植手术。脐血被一滴滴输入患者静脉。在医护人员的精心护理下，患者平稳地度过了危险期。经分子生物学技术检测，供者的脐血干细胞已植入患者体内并生长、繁殖，代替了患者原有的造血功能，手术获得了成功。

7、如何成为骨髓志愿者

凡年龄在18-55周岁，身体健康，经下列血液检查合格者，都可以成为造血干细胞捐献者。

丙氨酸氨基转移酶（ALT）≤40单位

乙型肝炎病毒表面抗原：阴性

丙型肝炎病毒抗体：阴性

艾滋病病毒抗体：阴性

梅毒试验：阴性

如果您适龄、身体健康（符合无偿献血条件）、志愿捐献造血干细胞，可与各地红十字会（或者中华骨髓库分库）的热线电话联系报名、填写志愿捐献书及有关表格，并抽取6～8毫升血液。组织配型实验室将会对您的血液进行HLA分型等检验，并把您的所有相关资料录入中国造血干细胞捐献者资料库的计算机数据库中。这样您就成为捐献造血干细胞的志愿者了。

捐献造血干细胞一般就是捐献骨髓，一般骨髓捐献的采集量是50-100ml（采集直接输入HLA匹配受体），如果是骨髓体外培养回输的话采集量是10ml。如果想要捐献骨髓，建议个人慎重考虑，官方声明捐献骨髓对身体无害，事实上捐献骨髓对身体是有很大影响的。人体骨髓腔中含红骨髓和黄骨髓，当人体少量失血（小于200CC）时，红骨髓产生造血干细胞，造血干细胞分化成血细胞补充人体所失血细胞；当人体大量失血（小于800CC）时，人体需要及时输血，体内少量黄骨髓转变为红骨髓，加速造血干细胞的生成；当人体大量失血大于800CC时，人体极度危险，不及时输血即死亡。人体中的红骨髓会随着年龄的增长而不断减少，所以捐献红骨髓后，在未来的几年里需要合理的调理身体，红骨髓的含量会得到一定的恢复。

8、捐献骨髓造血干细胞有害有益??详细点,谢谢

我没有捐过，没有切身体会，但我告诉你一个真实的事件，是我碰到的一位捐献造血干细胞的热心青年，在捐完造血干细胞的一年里，他的面色都不是太好，每隔一个月左右都要去医院检查，常规检查血常规时总发现淋巴比例偏高（50%以上），而正常人中性占50-70%淋巴占20-40%。以上是我所见，我们姑且称之为“后遗症”，理论上刺激造血之后可以较快恢复，但这些刺激量的控制却很难，理论上捐造血干细胞对健康影响不大，但实际上还是三思而后行。

9、请高手解答：骨髓细胞，骨髓干细胞，骨髓造血干细胞，是什么关系？

骨髓细胞，骨髓干细胞，骨髓造血干细胞
由于生理变异和不同的调查资料，正常骨髓象各系统各阶段细胞比值变动范围较大，所以正常骨髓象实际含义是正常范围骨髓象，下降数据可做为骨髓涂片中各种血细胞正常值的参考： 粒细胞系统占比例最大，约1/2强。一般原始粒细胞<0.02，早幼粒细胞<0.05，以中性杆状核最多，其比值大于分叶核细胞，也多于晚幼粒细胞，嗜酸性粒细胞<0.05，嗜碱性粒细胞<0.01。 红细胞系统占骨髓第二位（有核红细胞），约占1/5左右，以晚幼红细胞居多，中幼红细胞次之，原始红细胞<0.01，早幼红细胞一般<0.05，无巨幼红细胞。 淋巴细胞约占1/5左右，小儿偏高，有时可达0.4，单核细胞一般<0.04，浆细胞一般小于0.015。 非造血细胞，如网状细胞、吞噬细胞、组织嗜碱性细胞等可少量存在，它们的比值虽然很低，但却骨髓有成份的标志。
骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、 肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。骨髓间充质干细胞由于其来源广泛，易于分离培养，并且具有较强的分化潜能和可自体移植等优点，越来越受到学者们的青睐，被认为是不久即将被引入临床治疗的最优干细胞。
造血干细胞（ Stem cell ，SC）是指骨髓中的干细胞，具有自我更新能力并能分化为各种血细胞前体细胞，最终生成各种血细胞成分，包括红细胞、白细胞和血小板，它们也可以分化成各种其他细胞。它们具有良好的分化增殖能力，干细胞可以救助很多患有血液病的人们，最常见的就是白血病。但其配型成功率相对较低，且费用高昂。捐献造血干细胞对捐献者的身体并无很大伤害。