1、小鼠骨髓细胞的染色体标本一般制备成什么片
小鼠骨髓细胞的染色体标本一般制备成什么片
首先要提前2小时向小鼠注射秋水仙素,处死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理盐水,离心取细胞(离心管底部),再经低渗处理,染色,滴冰片,镜检.很麻烦,具体的你可以去图书馆查阅相关资料(动物染色体制备).
2、求小鼠显染色体显微镜下的照片
这是小鼠淋巴细胞染色体的。
3、如何提取小鼠骨髓细胞?
1、颈椎脱臼法处死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分钟后,拎出后将小鼠铺于超净台上一个消毒托盘上。
2、无菌提取小鼠的四肢骨,用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤,用眼科剪小心剪开皮肤,并分离两下肢的皮肤,往下在脚踝处剪断,往上在髋关节处剪断,这样可以游离出小鼠的两条下肢。
3、小心剥离肌肉,分别剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(胫骨),剪去两端软骨,露出红色的骨髓腔。注意尽可能少的剪走骨髓腔。用纱布将骨头上的肌肉用纱布擦拭干净。
4、拿一支1ml的无菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。轻轻插入骨髓腔,冲洗骨髓腔以获得骨髓,一般用2-3ml培养基冲洗两次,可冲出绝大部分细胞。
5、过滤:用2OO目的滤网过滤,将滤网的中央插入到离心管里面25px处,然后用注射器吸取骨髓液,慢慢将骨髓液经滤网注入离心管中,去除残渣。
6、离心:将离心管放置离心机中离心10分钟(1350r/min)
7、去上清,加入1ml红细胞裂解液ACK,静置3分钟,再加9ml HBSS溶液,进行离心10分钟,弃上清。
8、用HBSS液洗涤骨髓细胞2次,室温,1350r/min离心10分钟。计数活细胞,用培养基调整细胞浓度至1X106个细胞/ml.
9、在试管中加入RPMI-1640培养基,然后再加入20ng/ml的细胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巯基乙醇,
10、吸取培养基加入到沉淀中混匀,24孔板铺板培养,每个孔1ml.
4、基因图的小鼠H-2基因图
MHC指某一物种的某一号染色体(如人HLA在第6号染色体,小鼠H-2在17号染色体)上一组密切连锁的基因,它在主要组织相容性抗原识别以及清除外来和内在抗原起重要作用。人的MHC称为HLA,在小鼠称为H-2。其余灵长类和某些非灵长类动物的MHC有了新的命名规定与建议,原MHC的后两个字母HC改为小写,即Mhc。
各种动物MHC的作用基本相似,包括:⑴MHC编码的抗原广泛分布于淋巴细胞和其它有核细胞的表面,与同种内移植排斥有关,也是刺激混合淋巴细胞反应(MLR)和移植物抗宿主反应(GVHR)的主要刺激抗原;⑵控制机体对抗原的免疫应答或免疫抑制, 以及免疫活性细胞之间相互作用;⑶编码补体系统中的某些组分;⑷ MHC中某些抗原出现的频率与对某些疾病的易感性有关。
小鼠的组织相容性抗原有几十种以上,由常染色体H-1、H-2、H-3……、H-30等基因编码(H表示组织相容性histocompatibility),此外,还受小鼠性染色体基因(雄性为XY,雌性为XX)控制。其中H-2抗原为小鼠主要组织相容性抗原系统,而其他抗原均系次要组织相容性抗原系统。MHC在小鼠即为H-2,对H-2系统研究得较为清楚,位于第17对染色体内, 长度约占0.5分摩。H-2抗原具有高度多态性。用血清学方法检出H-2Ⅰ类抗原特异性在100个以上,可分为私有抗原(private antigen)和公有抗原(public antigen)。私有抗原是某一近交系(inbred strain)小鼠特有的抗原标志,在某一特定近交系小鼠只能检出一个K区和一个D区的私有抗原。公有抗原是在不同品系小鼠中都可检出的一些交叉抗原, 每一品系小鼠通常都可检出多个公有抗原特异性。根据血清学检定抗原的反应格局,可将近交系小鼠分为不同单体型的品系,用H-2右上方小写的英文字母表示,如H-2?x、H-2?d和H-2b等。
H-2基因群中可分为K、I、S和D四个区,I区又可分为I-A、I-E等亚区。按其编码抗原结构和功能不同,又可将H-2复合体分为三类基因:⑴Ⅰ类基因,位于K区和D区,包括K、 D基因座,又增加了K2、L和L2(?)新的基因座;⑵Ⅱ类基因,位于I区,包括Aβ、Aα、Eβ和Eα等基因座;⑶Ⅲ类基因,包括补体C4、C2、Bf和编码雄性激素结合蛋白性限蛋白 (sex limited protein, Slp)基因座(图6-1)。由于小鼠H-2基因群含有Ⅰ(罗马字)类基因,不同区中有I(英文大写)区,应注意鉴别,切勿混淆。此外,H-2中有些基因位于Qa和TL区,可能参与H-2多态性的形成以及TCRγδ T细胞识别抗原时的遗传限制。
5、制备小鼠骨髓染色体标本过程中有哪几个主要步骤影响制片结果
在制备小鼠骨髓细胞染色体标本过程中以下几个步骤需要注意:
提前3-4小时候注射秋水仙素,时间太长或者太短都会影响染色体中期的数目和形态。
在低渗过程中时间和吹打都很重要,低渗过度染色体膨胀,染色后肥肥的,低渗时间不过染色后染色体颜色很深看不出条带。
滴片,如果是教学的实验,要求玻片是冰的,而且要倾斜,滴的高度一般在25-30CM,滴完要过酒精灯,让固定液蒸发。滴的数量不要太多否则会重叠.如果是医院里的染色体制片有专门的滴片机。
小鼠骨髓细胞染色体标本制作:
原理:
由于小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞,具有高度的分裂能力,本实验采用这一材料,通过前处理,低渗,固定,制片,染色等步骤制得染色体标本,可观察到许多处于分裂中期的染色体,可以进行染色体组型分析;
试剂、试剂盒:秋水仙素、姬姆萨染液、固定液、低渗液、生理盐水;
仪器、耗材:天平、离心机、恒温培养箱、显微镜;
实验步骤
一、材料和方法
1. 材料:小白鼠。
2. 设备:天平,离心机,恒温培养箱,显微镜。
3. 药品:秋水仙素,姬姆萨染液,固定液,低渗液,生理盐水。
二、步骤
秋水仙素处理--取骨髓--低渗处理--固定--离心--再固定--再离心--滴片--染色--镜检--封片。
6、小白鼠骨髓细胞的染色体是端着丝粒染色体还是近端着丝粒染色体呢?
端着丝粒染色体。但是其他的。。。。。。这个实在不好说,因为很多动物的细胞里会同时存在多种染色体,所以一般不会这么问。
7、小白鼠骨髓细胞染色体为什么和人类的染色体不一样,为
主要是因为小白鼠骨髓细胞染色体都为近端着丝粒染色体!在显微镜的观察下呈现U型或者V型!人类的染色体比较多样,分为三种:①中央着丝粒染色体,着丝粒位于染色体纵轴的1/2~5/8处;②亚中着丝粒染色体着丝粒位于染色体纵轴的5/8~7/8处;③近端着丝粒染色体,着丝粒位于染色体纵轴的7/8至末端.这种U型的染色体人类也是有的!
8、小鼠骨髓细胞可以直接用于染色体的制作的原因
骨髓细胞有丝分裂旺盛,所以不需要体外培养就可以直接做实验。外周血淋巴细胞几乎都是处在G0或者G1期,一般情况下是不分裂的。在培养基中加入植物凝集素时,淋巴细胞受到刺激时转化为淋巴母细胞,并开始进行有丝分裂。
9、小鼠骨髓细胞染色体标本制备和观察实验报告
首先要提前2小时向小鼠注射秋水仙素,处死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理盐水,离心取细胞(离心管底部),再经低渗处理,染色,滴冰片,镜检。很麻烦,具体的你可以去图书馆查阅相关资料(动物染色体制备)。