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骨髓嵌合小鼠

发布时间:2020-08-21 15:24:21

1、嵌合体形成的原因

卵裂过程中发生染色体的不分离或丢失以及结构畸变就会造成嵌合体产生。

嵌合体
遗传学上用以指不同遗传性状嵌合或混杂表现的个体,亦指染色体异常类型之一。有时也有同一器官出现不同性状的生物体的意思。出现该病状的人员往往伴随精力极度旺盛,有时出现多重人格的精神错乱症状。目前临床还出现偶尔患者血型变换的症状。

2、嵌合体幼鼠为什么是二倍体不是四倍体,图中只形成一个囊胚和一个小鼠吗?

图中确实只有一个囊胚和一个小鼠。

但所谓嵌合体,是2个受精卵因不明原因粘在一起发育,并发育成囊胚以及后续完整胚胎的过程。

在这个过程中,2个受精卵几乎仅仅是物理上粘在一起而已。没有发生细胞融合这个级别的活动。所以嵌合体的个体,所有体细胞都是2倍体,只不过不同器官可能可以得到基因型表现型完全不一样的细胞。

3、neo 在小鼠基因型鉴定中起什么作用

neo 在小鼠基因型鉴定中起什么作用
基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型,在生命科学、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用。基于胚胎干细胞的基因打靶技术、EGE技术(基于Crispr cas9技术)是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的?
一、 基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程:
1. 课题设计,订购课题BAC菌;
2. 按照课题设计,完成打靶载体设计和构建;
3. 将重组载体电转到胚胎干细胞中,用G418筛选转染后的胚胎干细胞,得到阳性克隆;
4. 进一步通过PCR和southern blot杂交技术(基因敲除小鼠检测金标准)对上一步得到的阳性克隆进行筛选,得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆;
5. 将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中,并植入到假孕小鼠的子宫内;
6. 得到嵌合鼠,并获得F1阳性杂合子小鼠。
基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术,但目前只应用在小鼠的基因敲除上,而且其周期长工作量大。
二、 利用EGE技术(基于Crispr cas9技术)制备基因敲除小鼠的流程
1. 设计构建识别靶序列的sgRNA;
2. 设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒;
3. 利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA/Cas9进行活性检测;
4. 设计构建打靶载体;
5. 体外转录sgRNA/Cas9 mRNA;
6. 小鼠受精卵原核注射sgRNA/Cas9 mRNA和打靶载体;
7. 获得Fo代小鼠,利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定;
8. 获得F1代小鼠,利用PCR和southern blot杂交技术(基因敲除小鼠检测金标准)对F1代小鼠进行基因型鉴定。
虽然EGE技术(基于Crispr cas9技术)制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐,其实不然,EGE技术(基于Crispr cas9技术)系统构建简单,基因敲除/敲入效率高,速度快,可实现多基因、多物种基因敲除/敲入,最快2个月即可得到F0代阳性鼠,5个月得到F1F1代杂合子小鼠。

4、由小鼠骨髓瘤细胞与一B细胞融合后形成的细胞克隆所产生的抗体称为

答案是A,这应该毫无疑问吧。
教材上对单克隆抗体应该有比较详尽的介绍,我来说说B、C、D选项。
多克隆抗体:天然抗原分子中通常含有多个不同的抗原表位,那么该抗原刺激机体后,多个B细胞克隆被激活,从而产生的抗体中实际上含有针对该抗原各个表位的免疫球蛋白,称为多克隆抗体。多克隆抗体获得的途径有:动物免疫血清、恢复期病人血清或者免疫接种人群。

单链抗体:单链抗体是利用基因工程技术在大肠杆菌中表达的人工合成抗体,只有完整抗体的一条链,因此得名为单链抗体。它是由抗体重链可变区和轻链可变区通过15~20个氨基酸的短肽连接而成。

嵌合抗体:以人-鼠嵌合抗体为例,它是一种通过基因工程技术制备的抗体,由鼠源性抗体的V 区基因与人抗体的C 区基因拼接为嵌合基因,然后插入载体,转染骨髓瘤组织表达的抗体分子。

5、j558l小鼠骨髓瘤细胞能用于转染吗

通过人鼠嵌合抗体重链基因转染小鼠骨髓瘤J558L的研究,较详尽地阐述了用原生质体融合法将重组的人鼠嵌合抗体重链基因转染到S558L骨髓瘤细胞中,并用ELISA法检测转染子的过程和方法。同时简要地说明了影响转染率的一些因素。

【作者单位】: 黑龙江省科学院应用微生物研究所 黑龙江省科学院应用微生物研究所 黑龙江省科学院应用微生物研究所 黑龙江省科学院应用微生物研究所 黑龙江省科学院应用微生物研究所 黑龙江省科学院应用微生物研究所
【关键词】: 人鼠嵌合抗体 转染、骨髓瘤JL
【基金】:国家自然科学基金

向哺乳动物细胞转移外源的DNA,已经成为研究真核细胞基因表达的一种有效途径。转移基因的方法国外已有许多报道,如磷酸钙沉淀转移技术ts1、DEAE一葡聚糖技术闭、显微注射技术田等。其中应用最为广泛的是磷酸钙沉淀法,它具有简单、快速的优点。但若以骨髓瘤细胞作为受体时,其

6、骨髓移植后做了个嵌合体有99,26%这个数好吗?

从原理上来说100%供者植入是最好的。但是因为检验方法的问题,一般在98%以上,且多次检查没有波动,都可视作100%植入。
如果是再障做的骨髓移植,只要造血功能正常,供受者各占一部分的嵌合体也可以接受。

7、嵌合体小鼠的免疫系统问题

A和B都不会相互排斥, 由于在胚胎期间免疫系统发生了一种称为免疫耐受的机制,对对方的MHC抗原发生了耐受,所以双方的免疫系统对另一方的抗原处于默认“放行”的状态;器官移植时候,没有这种免疫耐受的机制,只能通过化学药物进行抑制免疫系统的方法减缓排异反应。具体可以百度“免疫耐受”、“MHC”、“HLA”等抗原。谢谢!

8、已有基因剔除嵌合小鼠,由于嵌合小鼠的一部分生殖细胞是来源于ES细胞,如何获得纯合子基因剔除小鼠?

不理解你的意思。。。 繁殖几代不就纯和了嘛。。。 Floxp和CRE别在一个染色体上,不连锁就行了呗。。。

9、如何高效制备生殖系传递的嵌合体小鼠

嵌合体是指动物的两颗受精卵融合在一起成为一个个体并成长。遗传学上用以指不同遗传性状嵌合或混杂表现的个体,亦指染色体异常类型之一。转基因小鼠制备过程中必须要经历的一个过程,所以基因敲除小鼠必须要用到嵌合体小鼠。A和B都不会相互排斥,由于在胚胎期间免疫系统发生了一种称为免疫耐受的机制,对对方的MHC抗原发生了耐受,所以双方的免疫系统对另一方的抗原处于默认“放行”的状态;器官移植时候,没有这种免疫耐受的机制,只能通过化学药物进行抑制免疫系统的方法减缓排异反应.具体可以百度“免疫耐受”、“MHC”、“HLA”等抗原.

10、为何基因敲除需要用到嵌合体小鼠

嵌合体是指动物的两颗受精卵融合在一起成为一个个体并成长。遗传学上用以指不同遗传性状嵌合或混杂表现的个体,亦指染色体异常类型之一。转基因小鼠制备过程中必须要经历的一个过程,所以基因敲除小鼠必须要用到嵌合体小鼠。

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