1、小鼠腦組織如何切片
鼠腦冰凍切片抄採用4%的多襲聚甲醛固定,小鼠直接灌注saline20ml,4%多聚甲醛20ml經左心室固定然後取材在4度4%多聚甲醛後固定4-6h,浸20%-30%糖沉底,就可以切片,切片首先需要冰凍切片機,切片厚度大概選擇20-40um差不多。
2、小鼠肝組織石蠟切片具體怎麼做?
一般來說是要的,但也要根據具體實驗要求決定(比如你要觀察一些什麼東西啦,對結構的完整性要求有多高啦)甲醛能固定一般組織,但溶解肝糖和色素。
注意:1.材料必須新鮮,擱置時間過久則產生蛋白質分解變性,導致細胞自溶及細菌的滋生,而不能反映組織活體時的形態結構。
2.固定液的種類很多,其對組織的硬化收縮程度以及組織內蛋白質、脂肪、糖類等物質的作用各不相同。例如純酒精可固定肝糖而能溶解脂肪,甲醛能固定一般組織,但溶解肝糖和色素。固定液可分為單一固定液及混合固定液。前者有甲醛(蟻醛、福爾馬林)、酒精、醋酸或冰醋酸、升汞、鋨酸(四氧化鋨)、重鉻酸鉀及苦味酸等,單一固定液不能固定細胞中的所有成分;混合固定液可以互補不足,常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa液(配方見有關技術書籍)。
過程:
1.取材
2.固定
3.洗滌與脫水
4.透明
5.浸蠟與包埋
6.切片
7.貼片與烤片
8.切片脫蠟及水化
9.染色
10.切片脫水、透明和封片
切片刀的銳利與否、蠟塊硬度適當都直接影響切片質量,可用熱水或冷水等方法適當改變蠟塊硬度。通常切片厚度為4~7微米,切出一片接一片的蠟帶,用毛筆輕托輕放在紙上。
3、求助成年小鼠SVZ取材詳細步驟
1、取8周齡C57雄性小鼠,腹腔麻醉。
2、頭部70%酒精消毒。
3、剪刀從頸部斷離頭部,剪開頭皮、顱骨,取出大腦,置於盛有冰的無菌D』Hanks的小皿中。" A" ?) x* g# U$ H! ^# V
4、去除血跡,放入另一盛有冰的無菌D』Hanks的小皿中,去除腦膜,在顯微鏡下操作。
5、將大腦約1/2處橫斷,保留前腦(近嗅球端),沿中線分為兩半。9 ^& b6 Q7 Q! O/ ^
6、將半腦外側面朝下,用一隻鑷子固定,另一隻鑷子去除剩餘的海馬、SVZ內側壁,見SVZ外側壁呈月牙型,上下側與白質相連,界限清晰。
7、分離之,去除四周的白質纖維。取出置於無菌的1.5毫升Eppendorf離心管中,置於冰中。! H+ ?" u/ I! a) b1 D! Z" ~
8、同樣分離另一側的。1 U+ n* Q. Y' s" s
9、每個離心管中加入400ul的0.1%含EDTA的胰酶。
10、輕柔吹打5~10次,將組織吹打成細塊狀(使用1000ul的藍色槍頭)。
11、37℃孵育10分鍾。每個樣本組織再輕柔吹打(用2001xl的槍頭)約20次,使得SVZ組織消化成小的顆粒。
12、37℃再次孵育10分鍾,再輕柔吹打(用2001xl的槍頭)約20次,使得SVZ組織完全消化成單個細胞。+ U4 h- ~( 8 r1 Y
13、可以酌情延長消化時間和次數,最終使得組織完全消化成單個細胞。
14、每個離心管中加入4001xl的NSCs培養基終止消化。, & z& p" u! T, ?5 Z4 g7 r
15、常溫下O.3 rcf離心3分鍾。# ]4 h. i9 l: p( L- f
16、去上清,加入培養基洗滌一次,再次0.3 rcf離心3分鍾。& m8 {' z6 N) g. H# Z
17、去上清,加入培養基輕柔的重懸細胞。
18、移入50ml的培養瓶中培養,每瓶加約10ml培養基(培養基為DMEM/F12(1:1),每50ml中添加了青黴素.鏈黴素500微升,N2 500ul, B27 1ml,鹼性成纖維細胞生長因子(bFGF)20ng/ml,表皮生長因子(EGF)20ng/ml)。約7~8天後神經球形成。$ B8 g6 W. H" H1 h* sE' l+ Y
19、將培養瓶放置在倒置顯微鏡下進行神經球計數。4 E! r& d5 h( \% K& A* @$ n5 j
20、在24小時後換液一次,換出死細胞和其它雜質。7 m9 P8 W; ^9 R% U% @7 n1 L
21、觀察到神經球長到約200um大小時即可傳代。
4、小鼠造模後16小時取材,怎麼計劃時間
小鼠造模方法。方法三次造模分別採用:免疫介導法:小鼠經6.0Gy60Coγ射線亞致死量全身
由尾靜脈輸入DBA/2小鼠的胸腺、淋巴結混合細胞懸液1×106個細胞/0.2ml/只。混合方法:小鼠一次全身3.0Gy60Coγ射線照射後,分照射後,
5、6天腹腔注射環磷醯胺50.0mg/kg及氯黴素62.5mg/kg。化學方法:用苯+玉米油,3次/w,別在第4、背部內皮下注射,共注射15次。同時腹腔注射環磷醯胺溶液(50mg/kg),每日1次共7次。結果
免疫介導法造模容後模型小鼠在15d內除1隻小鼠外全部死亡;混合方法造模,模型小鼠骨髓
免疫介導和混合方法造模速度快,對模型小鼠骨髓抑制明顯,與臨床急性AA
活檢提示造模失敗;化學方法造模,造模成功,模型維持時間長。
5、組織勻漿法制備小鼠肝臟過氧化氫酶粗提液實驗中肝臟的解剖位置在哪?如何進行取材
1、肝來的體表解剖位置——源肝是人體最大的實質器官,呈楔形,左右徑為25cm,前後徑約15 cm,大部分在右上腹,小部分超越正中線達左上腹,上界在右鎖骨中線平第5肋上緣,下界齊右肋緣。(肝臟是人體最大的消化腺,是體內物質代謝和解毒的重要器官,並能分泌膽汁。)
2、取材:用頸椎脫臼法處死小鼠,取出肝臟
6、求助,關於小鼠肺組織冰凍切片的製作
取材前做灌注的話,肺里的淤血會少些,灌注的越成功,肺里血越少,再就是取材的時候動作溫柔點,不要弄傷組織。取材後只能多洗,沒有什麼好的辦法。