1、熒光色染發操作方法
免疫熒光染色的主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結合來顯示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗結合，其次是帶有熒光基團的二抗識別並結合一抗，熒光顯微鏡下即可觀察到熒光，下文主要列舉了三種細胞免疫熒光染色的實驗步驟。
一、zo-1的免疫熒光，步驟如下：
1. 細胞在蓋片上生長融合到95%-100%時，從孵箱中取出。
2. 用預溫的1×PBS洗3次，每次10分鍾。
3. 4%的甲醛室溫固定20-30分鍾。
4. 1×PBS洗3次，每次10分鍾。
5. 0.2%Triton X-100透化2-5分鍾。
6. 1×PBS洗3次，每次10分鍾。
7. 5%BSA室溫封閉30分鍾。
8. 加一抗（用1%BSA稀釋）放在濕盒裡，4度過夜。
9. 1×PBS洗3次，每次10分鍾。
10. 加二抗(用1%BSA稀釋)30分鍾，閉光。
11. 1×PBS洗3次，每次10分鍾。
12. 95%甘油封片。
註：4%甲醛，0.2%Triton，5%BSA均用1×PBS稀釋。
二、細胞爬片的免疫熒光步驟基本一致：
1. 取出細胞爬片放到35mm或60mm用過的細胞培養皿里，PBS洗三遍。注意：有的時候作的細胞爬片可能比較小，因此夾取的時候要小心，注意 反正面，放在皿里洗比較方便，避免了來回夾取，另外洗的時候加PBS不要太沖，不要細胞沖下來。洗的時候我都是多加PBS，稍晃一下就倒掉，沒有等5分鍾或10分鍾。
2. 4%冷的多聚甲醛固定20分鍾，PBS洗三遍。
3. 0.2%Triton X-100通透10分鍾，PBS洗三遍。
4. 與二抗相同宿主的血清封閉30分鍾，PBS洗三遍。
5. 一抗4度濕盒內過夜，也可37度2小時，感覺前者效果好，PBS洗三遍。
6. 二抗室溫2小時(避光)，或者37度1半小時，PBS洗三遍。
7. 最好用DAPI染核，然後直接照熒光片。
8. 蒸餾水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周，因為甘油不象樹脂那樣會干，所以不用指甲油封的話會弄的一塌糊塗。
建議：
1. 還是染完之後沒有封片前直接照一些，因為有的時候可能封片會出現問題，再想照反而沒有了，另外不要拖太長時間，熒光會崔滅的。
2. 熒光的片子一定要避光保存，保存的好的話，過一段時間仍然能照出很好的片子。
3. 二抗用之前一定離心，不然有的時候有那種沉澱，在片子上就是一個很大的非特異性熒光光點，非常難看。
三、細胞免疫熒光簡單實驗步驟如下：
1.漂洗血清蛋白H7、2-7、4 37度 PBS 2小時。
2. -20度甲醇固定20分鍾後,自然、乾燥 10分鍾。
3. PBS洗凈：3min×3。
4. 1%Triton：25 min~30 min、配成50 ultriton+5 mlpBS。
5. PBS洗凈：2×5 min。
6. 羊血清封閉：37度，20分鍾。
7. 一抗，4度過夜，一般要大於18小時或者37度，1-2小時。
8. 4度PBS洗凈，3 min×5次。
9. 二抗37度小於一小時。
10. 37度 PBS洗凈，3×5 min。
11. 涼干封片（封閉液PH8.5）
不管採用何種方法，在使用PBS緩沖液漂洗時，都要漂洗干凈並且要測下pH值，可以使用PBS多清洗幾次，也可以延長PBS清洗時間，如果結果背景較高可以延長漂洗的次數和時間。
2、求免疫組化冰凍切片熒光染色具體流程
wifgw
石蠟切片免疫組化染色步驟
石蠟切片免疫組化染色步驟
1、載玻片的處理： 抗原修復過程中，由於高溫、高壓、輻射等諸多因素的影響，極易造成脫片。為保證試驗的正常進行，可選用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等幾種試劑，對已清洗的載玻片進行處理。具體方法如下：
1.1 APES：現用現配。將洗凈的玻片放入以1:50比例丙酮稀釋的APES中，停留20~30秒鍾，取出稍停片刻，再入純丙酮溶液或蒸餾水中涮去未結合的APES，置通風櫥中晾乾即可。用此載玻片撈片時應注意組織要一步到位，並盡量減少氣泡的存在，以免影響染色結果。
1.2 HistogripTM：將洗凈的玻片放入以1:50比例丙酮稀釋的Histogrip液中，停留1~2分鍾，然後用雙蒸水快速清洗三次，室溫乾燥或60oC烤箱烘烤一小時，裝盒備用。
1.3 Poly-L-Lysine：將洗凈、乾燥的載玻片放入以1:10比例去離子水稀釋的多聚賴氨酸溶液中，浸泡5分鍾，60oC烤箱烘烤一小時或室溫過夜乾燥。裝盒備用。試驗中使用的器具均為非玻璃製品。 2、常用酶消化： 2.1 胰蛋白酶：一般使用濃度為0.05%~0.1%，消化時間為37℃、10~40分鍾，主要用於細胞內抗原的顯示。
2.2 胃蛋白酶：一般使用濃度為0.4%，消化時間為37℃、30~180分鍾，主要用於細胞間質抗原的顯示，如：Laminin（層粘蛋白），Collagen IV（IV型膠原）等。
g/ml的saponin溶液，消化時間為室溫孵育30分鍾。 2.3 皂素（Saponin）：一般使用濃度為2~10 3、抗原熱修復： 可根據實驗室的具體條件，選用微波爐抗原修復、高壓鍋抗原修復或水浴高溫抗原修復。抗原熱修復可選用各種緩沖液，如TBS、PBS、重金屬鹽溶液等，但實驗證明，以0.01M枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）效果最好。請選用我公司提供的ZLI-9064 枸櫞酸鹽緩沖液（粉劑）配製，取該粉劑一包溶於1000ml的蒸餾水中，混勻，其pH值在6.0 0.1，如因蒸餾水本身造成的pH值偏差，請自行調整。
3.1 石蠟切片微波爐抗原修復操作方法：切片脫蠟至水後，3％H2O2處理10分鍾，蒸餾水洗2分鍾×3。將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（工作液）的容器中，置微波爐內加熱使容器內液體溫度保持在92℃~98℃之間並持續10~15分鍾（注意：無論是使用醫用或家用微波爐，請根據具體機型酌情設置條件，務必滿足以上步驟中對溫度和時間的要求）。取出容器，室溫冷卻10~20分鍾（注意：不可將切片從緩沖液中取出冷卻，以便使蛋白能夠恢復原有的空間構型）。PBS洗，下接免疫組化染色步驟。
3.2 石蠟切片高壓抗原修復操作方法：切片脫蠟至水。將1500ml~3000ml的枸櫞酸鹽緩沖液（工作液）注入不銹鋼壓力鍋中加熱至沸騰。切片置於金屬架上，放入鍋內，使切片位於液面以下，蓋鍋壓閥。當壓力鍋開始慢慢噴氣時（約加熱5~6分鍾後），計時1~2分鍾，然後將壓力鍋端離熱源，冷水沖至室溫後，取下氣閥，打開鍋蓋，取出切片，蒸餾水洗後，PBS洗2分鍾×3，下接免疫組化染色步驟。
3.3 石蠟切片電爐煮沸抗原修復操作方法：切片脫蠟至水後，放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（工作液）的容器中，並將此容器置於盛有一定數量自來水的大器皿中，電爐上加熱煮沸，從小容器的溫度到達92℃~98℃起開始計時15~20分鍾，然後端離電爐，室溫冷卻20~30分鍾，蒸餾水沖洗，PBS洗，下接免疫組化染色步驟。 4、免疫組化染色步驟： （以美國ZYMED公司SP試劑盒為例）
石蠟切片脫蠟至水。
3%H2O2室溫孵育5~10分鍾，以消除內源性過氧化物酶的活性。
蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鍾，(如需採用抗原修復，可在此步後進行)。
5~10％正常山羊血清（PBS稀釋）封閉，室溫孵育10分鍾。傾去血清，勿洗，滴加適當比例稀釋的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小時或4℃過夜。
PBS沖洗，5分鍾×3次。
滴加適當比例稀釋的生物素標記二抗（1%BSA-PBS稀釋），37℃孵育10~30分鍾；或滴加第二代生物素標記二抗工作液，37℃或室溫孵育10~30分鍾。
PBS沖洗，5分鍾×3次。
滴加適當比例稀釋的辣根酶標記鏈霉卵白素（PBS稀釋），37℃孵育10~30分鍾；或第二代辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，37℃或室溫孵育10~30分鍾。
PBS沖洗，5分鍾×3次。
顯色劑顯色（DAB或AEC）。
自來水充分沖洗，復染，封片。
冰凍切片免疫組化染色步驟
m，室溫放置30分鍾後，入4℃丙酮固定10分鍾，PBS洗，5分鍾×3。用3％過氧化氫孵育5~10分鍾，消除內源性過氧化物酶的活性。PBS洗，5分鍾×2。冰凍切片4~8
免疫組化非特異性染色的消除方法
一、非特異性染色的主要因素
組織的非特異性染色的機理很復雜，其產生的原因主要可分為以下幾點：
（1）一部分熒光素未與蛋白質結合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去
。
（2）抗體以外的血清蛋白與熒光素結合形成熒光素脲蛋白，可與組織成分結合。
（3）除去檢查的抗原以外，組織中還可能存在類屬抗原（如Forssman氏抗原），可與組織中特異性抗原以外之之相應抗體結合。
（4）從組織中難於提純抗原性物質，所以制備的免疫血清中往往混雜一些抗其他組織成分的抗體，以致容易混淆。
（5）抗體分子上標記的熒光素分子太多，這種過量標記的抗體分子帶過多的陰離子，可吸附於正常組織上而呈現非特異性染色。
（6）熒光素不純，標本固定不當等。 二、消除非特異性染色的方法
消除熒光抗體非特異性染色的方法應根據產生的原因採取適當的方法，常用的方法有以下幾種：
（一）動物臟器粉末吸收法
常用肝粉（豬、大白鼠或小白鼠），其次是骨髓粉、鼠腦粉和雞胚粉等。每毫升熒光抗體中加入肝粉50～100mg,在離心管中充分混勻，在室溫中振動2h，4℃中過夜，再攪拌10min，高速離心（3000～15000r/min）30min，1～2次後，即可使用其上清液。吸收一般應在臨用前進行，吸收後之熒光抗體保存冰箱中勿超過2周。染色應作吸收前後之比較，吸收時可先用緩沖鹽水將組織乾粉浸濕，離心（3000～15000r/min）30min，除去上清液，再加入熒光抗體進行吸收，以免消耗過多的抗體。
肝粉或新鮮細胞吸收是一種非特異性的消除方法，對熒光抗體的熒光色素和蛋白都有吸附作用。如檢查組織中的病毒抗原時，也可用相同的組織乾粉或勻漿沉澱物吸收之。
用臟器肝粉吸收對熒光抗體損失較多，如果根據Hiramotos氏等的方法將組織的20%生理鹽水勻漿液，用生理鹽水洗2～3次，12000r/min
10min離心沉澱，用其沉澱物吸收其熒光抗體即能完全達到目的，京極方久氏認為這樣吸收對熒光抗體幾乎沒有損失，他們常用此法，效果甚佳，吸收後放置一周左右，用時有必要再吸收一次。
【肝粉的製法】
（1）將若干只小白鼠或大白鼠放血殺死，取出肝臟，用生理鹽水洗2～3次，除去血液，剝掉表面的結締組織的脂肪。
（2）剪碎，用生理鹽水反復洗滌至無血色止，然後再加生理鹽水少許，用組織搗碎機或勻漿器作成勻漿。
（3）將肝勻漿裝入離心管內（1/3左右），交換地用2～3倍量生理鹽水和丙酮反復洗滌各三次，至上清無血色止，每次完畢先用2000r/min離心沉澱15 min後，再除去上清液。
（4）最後用丙酮洗滌肝漿，再用布氏漏斗過濾，或離心沉澱，將沉澱物平鋪在潔凈的玻璃板上，37℃烤乾（過夜）。
（5）在乳缽中充分研磨，用120目銅篩篩選過後，分裝，密封，低溫乾燥保存。
2006-12-22 13:24 wifgw
二）透析法
熒光素如FITC分子可以通過半透膜，而蛋白質大分子不能透過，可將未與蛋白結合的熒光素透析除去。
（1）將標記完畢的熒光蛋白液裝入一透析袋或玻璃紙袋內，液面稍留空隙，緊扎。
（2）浸入0.02mol/pH
7.1～7.4的PBS中（懸於大於標記物體積約50～100倍的PBS內），在4℃中透析，每日更換3～4次PBS，約5～7天，透析液中無熒即可（在熒光光源照射下）。
（三）葡聚糖凝膠G-50柱層析法
除游離熒光素可用2×46cm柱層析法，詳細方法參閱第二章。加入熒光抗體15～18ml（按床體積的5%～10%加樣），使其緩慢滲入柱內，待即將全部入柱時，加入PBS少許，關閉下口，停留30～40min ，使游離熒光充分進入細篩孔中，然後再接通洗脫瓶開始滴入洗脫液。加入洗脫液一定量後，熒光抗體即向下移行，逐漸與存留於上端的游離熒光素之間拉開明顯的界線，隨著大量洗脫液的不斷加入，二者分離距離越來越大，熒光抗體最先流出，分前、中、後三部分收集，測F/P比值，合格者合並，濃縮，分裝。洗脫液用20%磺基水楊酸測定蛋白（發生沉澱反應），繼續洗脫，游離熒光素則相繼被洗脫下來，至洗脫液中無蛋白和熒光素後，此層析柱即可再用。
若用以除去熒光抗體中的游離熒光素和硫酸銨等鹽類，可先在過柱前透析一夜，否則，NH4+太濃，在蛋白未完全洗脫時即出現NH4+，因而影響提純與回收蛋白，一般待洗脫液出現蛋白時，即進行收集，之後出現SO4++（用1%BaCl2檢查發生白色沉澱）。最後是NH4+，（用納氏試劑檢查呈黃棕色沉澱），待洗脫液無SO4++及NH4+後可再用。
如僅用小量熒光抗體，可用1×20cm的柱層析柱，取2g Sephadex G-50裝柱，即可過濾2～3.5ml熒光抗體。
（四）DEAE纖維素柱層析法
標記過多或過少熒光素的抗體分子可用DEAE-纖維素柱層析法除去。方法如下： DEAE-纖維素柱的裝柱，洗脫、再生方法等與提純IgG方法相同。裝柱所需DEAE-纖維素量以乾重每克交換20～50mg標記蛋白量為宜
。常用梯度洗脫法如下：
（1）層析柱用0.01mol/L、pH7.2PB平衡，標記物上柱後，先用0.01mol/L、pH7.2PB洗脫，洗出無色或淡綠色液體，洗脫液量（根據床體積大小每梯度乘3），然後依下列各種離子強度洗脫液，
分別洗脫和收集：
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.05mol/L NaCl）……洗脫部分1。
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.01mol/L NaCl）……洗脫部分2。
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.02mol/L NaCl）……洗脫部分3。
將此三部分收集液（每管5ml）分別測定其F/P比值，0.05mol/L NaCl pH7.2PB洗脫液280nm光密度高峰管合並，濃縮保存備用。因這部分非特異性染色熒光最少，是比較好的熒光抗體。其他兩部分可以廢棄。
（2）柱上吸附的過度標記蛋白可繼續增加NaCl的濃度至
2.0mol/L洗脫完。
經過DEAE-纖維素層析後的標記抗體，其抗體量一般約損失50%，因此有些要求不太高的抗體，如抗細菌熒光抗體，不一定要這樣處理，可用染色效價測定的稀釋法除去非特異性染色。
（五）熒光抗體稀釋法
先測定熒光抗體特異性染色與非特異性染色的效價，若二者效價相差較大，則可將熒光抗體稀釋至一臨界濃度，使特異性染色呈陽性，而使非特異性染色保持陰性，稀釋方法和染色效價測定方法相同。
（六）純化抗原法
用各種方法提純單一成分的抗原是產生單價特異性抗體的最主要條件。近代免疫化學技術（免疫吸收法）和柱層析法等提供了很大的可能性，可參考有關專著。
（七）純化抗體法---免疫吸收法
例如抗IgA血清的純化方法---免疫吸收法。如分泌型IgA（ SIgA）抗原純度不高，所制的抗血清常與IgG呈交叉反應，為此需要吸收，常採用純化的人IgG戊二醛聚合物加以吸收純化。方法如下：
1．人IgG聚合物的制備 在5ml含40mg/ml人IgG的0.1mol/L pH7.0磷酸緩沖溶液中，加入2.5%戊二醛溶液1ml，邊加邊攪，5min即出現混濁，逐現大塊膠塊，放置30min後，用研缽將凝膠磨細，繼用1.0mol/L pH7.0磷酸緩沖溶液反復洗滌3次，末次加蒸餾水至20ml，即為人IgG聚合物懸液。
2．免疫吸收法 將待吸收的抗SIgG血清加入待量IgG聚合物懸液，置室溫攪拌60min,離心沉澱，上清液即稀釋1倍的純化抗SIgA血清。如用IgG聚合物作少量分次吸收，其效果更好。
（八）伊文氏藍（Evans blue）襯染法
用0.01%伊文氏藍的0.01mol/L pH7.2PBS稀釋熒光抗體，可將背景細胞和組織染色，呈紅色熒光，與特異性黃綠色熒光形成鮮明的對比，減少了非特異性熒光，宜作常規應用。伊文氏藍一般先配成1%溶液，保存於4℃，用前再稀釋至0.01%用以
和然釋熒光抗體。
此外，還可以用胰酶消化組織切片或用10%牛血清蛋白封閉法等消除非特異性染色，提高特異性染色。
3、II型膠原染色原理和方法
直染料在溶液中被纖維吸附到表面，然後不斷向纖維的無定形區擴散，與纖維大分子形成氫鍵和范德華力的結合。其派生的染料有直接耐曬染料和直接銅鹽染料。染料染色時，為縮短染色時間，染色溫度採用80一90℃
4、您好！卡爾科弗盧爾熒光染色劑（Calcofluor)對幾丁質進行染色的具體操作步驟您知道嗎？謝謝指導！
你可以去印染在線看看，哪裡有好多文章看以看的，應該有這類的文章。另外網站也有專家回答問題。你可以試試咯。
5、免疫熒光染色的詳細步驟及應注意的細節
免疫熒光染色方法快捷,靈敏.
標本是冰凍切片,還是石蠟切片?切片的厚薄?影響到一抗孵育的時間.
選用較佳的一抗的工作濃度.
二抗需A液B液在室溫混合15分鍾後再用.
標本需保存在-20度.
6、sigma的33258熒光染料怎麼用
使用方法（僅供參考）：
1. 用PBS或合適的緩沖液制備10～50µM Hoechst 33258染色液。
2. 固定的細胞或組織染色：
對於固定的細胞或組織樣品，固定後，適當洗滌去除固定劑。隨後如果需要進行免疫熒光染色，則先進行免疫熒光染色，染色完畢後再按後續步驟進行Hoechst33258染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行後續的Hoechst 33258染色。
a) 對於貼壁細胞或組織切片：加入適量Hoechst 33258染色液，覆蓋住樣品即可。對於懸浮細胞：至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鍾。
b) 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鍾。
c) 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片後熒光顯微鏡下觀察。激發波長350nm，發射波長460nm。
3. 活細胞或組織染色：
a) 細胞培養物中加入適量Hoechst 33258染色液，約1/10細胞培養基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對於六孔板一個孔需加入1ml染色液，對於96孔板一個孔需加入100μl染色液。
b) 在 37℃培養細胞 10～20 分鍾。
c) 用 PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。
d) 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片後熒光顯微鏡下觀察。激發波長350nm，發射波長460nm。
7、求助hoechst33258染色步驟
7.If staining for extracellular markers (i.e.: Sca-1, Lineage, c-kit, etc) then resuspend cells in 300mL of PBS, and stain cells on ice in dark for 30 minutes with antibodies. (N.B.: You can not use a PE antibody, as Pyronin Y fluorescence is in this channel, and you can not use a UV antibody, as Hoechst is in this channel.)
8.After staining, or if just spun down w/o staining, resuspend in 2mL of 5% paraformaldehyde.
9.Samples must sit at least overnight in 5% PFA in fridge, can sit for 1-2 weeks fine too.
10.When you want to add PY, make 1:100 dilution then add 10uL to each mL PFA (so, final dilution is 1:1000 from stock – but for some reason, it looks better if dilution is done in this stepwise fashion rather than dye added directly to cells from stock!)
11.Put tube in fridge for 30 minutes to incubate w/ PY.
12.Spin down, resuspend cells in 500mL 5% PFA, analyze.
13.When analyzing, remember that antibody fluorescence is log scale, PY fluorescence and Hoechst fluorescence are linear scale.
JianH：熒光顯微鏡可以配備有三種熒光：blue，green，UV。Hoechest只能用UV.
icepiao：Hoechst染色好像就是很淺，我曾用來檢測過支原體，不知道你當時又沒有固定細胞。
heartbeyond：我沒有固定細胞，因為我要得到的是活的細胞，文章上看到的改種染色，顏色不是很淺，可是我的染色結果不是淺的問題，是蹤影皆無，新買了染色劑，還是不行。會不會是熒光顯微鏡的問題
shifang99：我的方法和你差不多，但是染的效果很好，細胞核看得很明顯的，而且半個月後，還是很清楚的。估計可能是你的顯微鏡的問題。我用的好象是藍光啊。你再看看。你可以看看有沒有其他的熒游標記物，染一下，做個對照檢查一下。
wnwnwang：我也請教一個問題，由於我要到別的地方觀察，我不想消化細胞後進行染色，而是直接在六孔板里進行染色，pbs洗，然後觀察計數。不知道這樣對貼壁的細胞而言，染色是否會不夠充分，效果如何？
altbenair：第一次做檢測凋亡，也不知道凋亡細胞應該是什麼樣的，而且我們的條件差，手工拍照。我們的熒光顯微鏡只有三種激發光顏色 不能調激發光波長。說明書是這樣寫的：透鏡轉盤位置，激發光顏色，適用熒光素。WB 藍 FITC(綠色熒光) WG 綠 TRITC（紅色熒光） WU 紫外 自發熒光
用WB WG 只有少數發綠色 和紅色熒光的地方，用WU 可以清楚看到很多細胞 。
drake015：細胞核基本正常，屬於正常細胞核，光線太亮。
照碧雲天hoechst染出來的說法，只要核染出來比正常核小，而且亮度高就是凋亡細胞。他們的技術人員都在國外，沒人能夠提供詳細的解釋。都是染核的染料，結果應該差不多，不過一般我們作不出那麼典型的圖片。可是你那張圖也實在不太象細胞核。
belgern: 觀察物誘導腫瘤細胞的凋亡，僅只做光鏡和熒光顯微鏡能說明問題嗎？用Hoechst33258染色檢測培養的細胞凋亡的具體方法是怎樣的？塗片的載波片需特殊處理嗎？
drake015: 最好再加一種流式計數或其他的方法。形態學加定量比較理想
belgern: 但如果我不想做細胞爬片，選擇hoechst33342染色（因hoechst33342可以對活細胞直接進行染色），能否直接將染料加入培養液中，染色10min，棄培養液和染料，4%福爾馬林4℃固定10min,棄固定液,直接將培養瓶放在倒置的熒光顯微鏡下觀察呢?
drake015:呵呵，思路這么清楚摸索一遍有何妨？祝你成功！33258也可染活細胞的，我做過，33342沒用過。有倒置顯微鏡我想可以直接染色。不過為什麼不倒掉培養液再染？染料是固體？我想還是現配成溶液比較好。不管怎麼說試驗不難，可以試試看。
非關凋亡的討論
future04：實驗需要標記幹細胞，有人說可以用Hoechst標記，可是我查的大部分使用來標記凋亡的，究竟Hoechest可以標記細胞嗎？能維持多久？
dp：最好別用他來標記移植細胞,體內雖然可維持很長時間,但後期的污染現象(染周圍的細胞)特別嚴重,根本無法分析你的結果.切記!我實驗失敗的嚴重教訓.
cardiohong: 我的研究方向是幹細胞移植，現在實驗已經完成。主要是在體外將移植細胞以hoechst33342染色，而後植入體內。2周後取標本復查，熒光很好，而且非常密集；但4周後再檢查的時候，熒光卻蹤影全無。我對這種現象很難解釋。可能的原因不外乎：1、細胞死亡，2、細胞排出染料，3、染料熒光自然衰減，或發生猝滅。但查了查有關資料，一直沒查到hoechst33342的熒光壽命，以及在什麼條件下會猝滅。
midas: cardiohong 我對您的問題談一些我的看法（個人觀點，歡迎討論），
首先我對細胞（包括幹細胞）移植後的存活問題始終存有疑慮：且不說移植後的免疫排斥問題，我們談談細胞的外部生存條件：培養細胞在體外有充足的營養供應，有它適合生存的培養基及介質，然而到了體內它周圍有什麼？條件自然比體外要差的多。所以我認為不解決移植細胞在體內的存活問題，那麼移植的可靠性和實用性就會大大！
我曾經用綠色熒光蛋白（一種標記細胞漿的熒光染料）標記嗅鞘細胞（體外觀察很好），但是把它移植到正常的脊髓中，confocol結果發現一堆綠色的亂七八糟的小渣子，根本沒有細胞的形態，但是用hoechst33342標記的，仍然有不少表面上顯示正常的核的結構。從這一點上我們可以得出－－這時細胞的狀態並不正常！雖然它們的核仍然完整。
下來談談hoechst的問題，hoechst是一種核酸特異性染料，與A－T鍵優先結合。因此在正常情況下hoechst熒光壽命的時間應該是較長的，直到A－T鍵被破壞。所以說熒光消失的問題就很可能是細胞死亡後，被周圍的巨噬細胞吞噬消化掉的結果（如果沒有完全消化，就仍然有熒光的顯示）。
BlueSadNess: 首先Hoechst 33342 effulx是什麼意思？是Hoechst 33342 拒染嗎？
還有為什麼幹細胞（至少精原幹細胞）會表現Hoechst 33342 efflux的特性？其原理是什麼？
qjzhou2000: 不是拒染，而是能將染料泵出，所以在過流式的時候繪出現side-population的現象。至於具體原因還未明確，不過有些文章可以參考！
The ABC transporter Bcrp1/ABCG2 is expressed in a wide variety of stem cells and is a molecular determinant of the side-population phenotype