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骨腫瘤分子標記物

發布時間:2020-09-26 08:50:26

1、腫瘤標記物就是癌胚抗原么

腫瘤標志物有很多種,胃部相關的腫瘤標志物有CEA、CA50、CA724、CA199、CA242;
慢性淺表性胃炎常導致消化不良,並出現過程較為緩慢的消瘦;
根據您的情況,建議及早檢查以上腫瘤標志物、綜合診斷。

2、分子標記技術有哪些

DNA分子標記技術
SSR分子標記技術
AFLP分子標記技術

3、一管血查腫瘤標記物,常見癌症的腫瘤標記物有哪些

在腫瘤的研究和臨床實踐中,早期發現、早期診斷、早期治療是關鍵。腫瘤標志物(Tumor Marker TM)在腫瘤普查、診斷、判斷預後和轉歸、評價治療療效和高危人群隨訪觀察等方面都具有較大的實用價值。
1、 定義
腫瘤標志物主要是指在惡性腫瘤的發生和發展過程中由腫瘤細胞合成分泌到體液或組織中,或是縮主對體內新生物反應而異常產生的,在體液或組織中含量明顯升高的一類生物活性物質。隨著分子生物學技術的發展,從分子水平發現基因結構或功能的改變以及具有一定生物學功能的基因產物的異常表達均與腫瘤的發生、發展密切相關,所以癌基因、抑癌基因及其產物也屬腫瘤標志物之列。
2、 腫瘤標志物的分類及臨床應用
腫瘤標志物用於臨床診斷的有許多種,可分為:癌胚類抗原、糖蛋白抗原、酶類、激素類、癌基因類和與腫瘤相關的病毒等。目前臨床常用的腫瘤標志物有:
2.1 甲胎蛋白(AFP)
AFP在胚胎期是功能蛋白,由卵黃囊、胚胎肝產生,臍帶血含量為1000-5000μg/L,出生後1年內降至成人水平(低於20μg/L)。約70%以上原發性肝細胞癌患者AFP在400μg/L以上,多逐漸升高,但亦有不高於400μg/L,甚至在正常水平的患者。妊娠、活動性肝病、生殖腺胚胎源性腫瘤等也可升高。
2.2癌胚抗原(CEA)
CEA是一種酸性糖蛋白,胚胎期在小腸、肝臟、胰腺合成,成人血清含量極低(<5μg/L) ,吸煙者可升高達15-20μg/L,少數可達20-40μg/L。 CEA開始被認為是結腸癌的標志物(60%-90%患者升高),但以後發現胰腺癌(80%)、胃癌(60%)、肺癌(75%)和乳腺癌(60%)等也有較高表達。某些肺癌患者也可輕度升高。
2.3 CA125
最初認為是卵巢癌特異的,但深入研究後發現,它也是一種廣譜的標志物。正常值以35U/ml為界,80%卵巢癌、58%胰腺癌、32%肺癌,其它如乳腺癌、肝癌等也可有不同程度的升高。子宮內膜炎、急性胰腺炎、腹膜炎、肝炎、肝硬化腹水、結核等良性疾病也可升高。
2.4 CAl5-3
是乳腺細胞上皮表面糖蛋白的變異體,為乳腺癌標志物,正常<30U/ml。乳腺癌晚期明顯升高。該標志物也是廣譜的,其它腫瘤如肝癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、腸癌、胰腺癌等也可見升高。
2.5 CA19-9
CAl9-9是一種類粘蛋白的糖蛋白成分,與Lewis血型成分有關。血清內正常值<37U/mL(>95%),是較可靠的胰腺癌標志,79%的胰腺癌升高。但異常升高也可見其它多種腫瘤,如67%膽道癌、膽囊癌,62%胃癌、部分結腸癌、肝癌、肺癌、乳腺癌等也有升高。少部分良性病變及正常人也可升高。
2.6 CA72-4
CA72-4是一種高分子量糖蛋白,正常人血清中含量<6U/ml,異常升高在各種消化道腫瘤、卵巢癌均可產生。對於胃癌的檢測特異性較高,>6U/ml為臨界值。良性胃病僅<1%者升高,而胃癌升高者比例可達42.6%,如與CAl9-9同時檢測,陽性率可達56%。

2.7 CA242
是一種粘蛋白型糖抗原,可作為胰腺癌和結腸癌較好的腫瘤標志物,其靈敏度與CA19-9相仿,但特異性、診斷效率則優於CA19-9。
2.8 鱗狀細胞相關抗原(SCC)
是由宮頸癌細胞中提純的,是宮頸癌較好的腫瘤標志物。正常人血清水平<2μg/L。異常升高可見於宮頸鱗癌,21%宮頸腺癌也有升高。肺鱗癌有較高的陽性率。食道鱗狀上皮癌、口腔鱗狀上皮癌皆有較高的陽性率,SCC是鱗狀上皮癌的重要標志物。
2.9細胞角蛋白19 (CYFRA21-1)
細胞角蛋白是細胞體的中間絲,根據其分子量和等電點不同可分為20種不同類型,其中細胞角蛋白19在肺癌診斷中有很大價值,在肺癌的血清濃度閾值為2.2μg/L,其敏感性、特異性及准確性分別為57.7%、91.9%和64.9%。從組織學角度看,鱗癌的敏感性 (76.5%)較腺癌(47.8%)為高,也高於SCC對兩者的診斷率。細胞角蛋白19與CEA聯合應用,診斷非小細胞肺癌符合率已可達到78%。
2.10 β2-微球蛋白
表達在大多數有核細胞表面,是HLA-A、B和-C抗原的一分子量為11800鏈。臨床上多用於證實淋巴增殖性疾病,如白血病、淋巴瘤及多發性骨髓瘤。其水平與腫瘤細胞數量、生長速率、預後及疾病活動性有關。
2.11 鐵蛋白
是一種鐵結合蛋白,存在於各種組織,病理狀態下,釋放到血液增加,在多種癌症患者血中均有不同程度的陽性率,肝癌患者的陽性率在70%以上,所以可輔助肝癌診斷。但不是腫瘤特異的標志,在發熱、肝炎、肝硬化、阻塞性黃疸、再生障礙性貧血及一些溶血性疾病等時都可能升高。
2.12 前列腺特異性抗原(PSA)
PSA是目前診斷前列腺癌最敏感的指標,可用於前列腺癌的診斷、監測療效及預測復發。PSA是由前列腺上皮細胞產生的一種大分子糖蛋白,它具有極高的組織器官特異性。正常人體血清內PSA <4μg/L,但有隨年齡增長而增高的趨勢。<50歲者一般低於4.0μg/L,50-55歲為4.4μg/L,60-69歲為6.8μg/L,>70歲可達7.7μg/L,異常升高預示有患前列腺癌的可能。以 >4μg/L為臨界值,早期前列腺癌63%-70%陽性,總陽性率可達69-92.5%。
2.13 神經原特異性烯醇化酶(NSE)
血清NSE是神經內分泌腫瘤的特異性標志,如神經母細胞瘤、甲狀腺髓質癌和小細胞肺癌(72%升高)。目前,NSE已作為小細胞肺癌重要標志物之一。抽血時發生溶血NSE也可升高。
2.14 絨毛膜促性腺激素(HCG)
是存在於胎盤中的糖蛋白激素,分於量為45000,當懷孕時血與尿中水平上升,正常血中只含微量。絨毛膜上皮癌患者顯著升高,60%的睾丸腫瘤明顯升高,在卵巢癌、乳腺癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、肝癌、肺癌等尿中HCG可呈陽性反應。一些良性疾病如消化性潰瘍、腸炎、肝硬化等血中HCG可升高。
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4、什麼是分子標記?

長期以來,植物育種中選擇都是基於植株的表型性狀進行的,當性狀的遺傳基礎較為簡單或即使較為復雜但表現加性基因遺傳效應時,表型選擇是有效的。但許多重要農藝性狀為數量性狀,如產量等;或多基因控制的質量性狀,如抗性等;或表型難以准確鑒定的性狀,如根系活力等,此時根據表型提供的對性狀遺傳潛力的度量是不確切的,因而選擇是低效的。

遺傳育種家們很早就提出了利用標記進行輔助選擇以加速育種改良進程的設想。形態學標記等常規遺傳標記是最早用於植物育種輔助選擇的標記,但由於它們數量少、遺傳穩定性差,且常常與不良性狀連鎖,因而利用受到很大限制。近十年來,分子生物學技術的發展為植物育種提供了一種基於DNA變異的新型遺傳標記——DNA分子標記,或簡稱分子標記。

與傳統應用的常規遺傳標記相比,分子標記具有許多明顯的優點,因而已被廣泛應用於現代作物遺傳育種研究的各個方面,正在為植物育種技術帶來一場新的變革。

5、臨床常見疾病的生物標記物有哪些

主要有以下幾類:
代謝標記物:

骨代謝標記物
通過測定尿中吡啶諾林(pyridinoline,PYD)及I型膠原N尾端交聯肽(NTX-I)和C尾端交聯肽(CTX-I)水平可反映骨I型膠原的代謝。研究發現OA患者中PYD水平明顯升高,進展期OA患者尿中CTX-I水平明顯高於對照組。血清降鈣素作為一種反映骨合成的標記物在OA患者的研究中表現出不一致的結果。
利用現有的骨代謝標記物反映OA病情欠滿意。更多學者致力於挖掘更具特異性、敏感性的反映軟骨和滑膜代謝的標記物。

軟骨代謝標記物
可通過數種標記物的檢測反映軟骨Ⅱ型膠原的合成代謝,其中,Ⅱ型膠原羧基木端肽(CTX-Ⅱ)最為重要。多項研究已證實0A和RA患者中尿CTX-Ⅱ水平明顯升高。通過測定血清PIICP(procollagen type Ⅱ C-terminalpropeptide,Ⅱ型前膠原羧基端前肽)發現Ⅱ型膠原合成在OA早期階段即有增加。Rousseau[2]利用ELISA法測定PIIANP,發現其水平在OA患者中降低。Deberg[3]發現了軟骨II型膠原2種降解產物肽:Coll2-1及Coll 2-1 NO2水平在OA患者中升高。Charni[4]發現膝OA患者中尿HELIX-Ⅱ水平較健康對照組顯著升高。表1 骨,軟骨,滑膜代謝標記物的BIPED分類組織分子合成標記物降解標記物BIPED 分類方法骨Ⅰ型膠原
診斷性標記物
盡管目前研究的大部分標記物水平(CTX-Ⅱ,COMP,PYD等)在大部OA個體中明顯升高,但在一定比率患者中卻表現出正常水平。這提示這些標記物單獨作為OA診斷工具仍不具備足夠敏感性。在無髖OA影像學特徵性表現的患者中,血COMP的升高已被觀察到與髖部相關症狀(疼痛,僵直)有關聯,但在膝OA患者中無此發現。COMP和NTX-I被發現與老年女性OA患者影像學進展有一定相關,在影像學表現超過4年的絕經後膝OA女性患者中,COMP和NTX-I水平升高。研究發現在伴有膝部創傷的患者中,在X線尚無表現但已有關節鏡下發現的軟骨退化的早期階段,滑液中PIICP水平即有升高,Chevalier發現滑液中CTX-Ⅱ水平在影像學無表現的OA早期階段即有升高,且其水平較對照組升高達三倍之多。
總之,盡管一些標記物可能在OA早期階段即明顯升高,但這些標記物因缺乏足夠敏感性,特異性尚不能被單獨用於個體OA患者的診斷。

疾病嚴重度標記物
疾病嚴重度標記物(burden ofdiseasemarkers)主要評估OA的嚴重程度或累及范圍,特別是某一時間點的疾病情況。在一項71例女性OA患者的研究中發現,全身多發性OA患者中CRP,PYD,YKL-40,MMP-3和nMP-1水平相對於僅罹患膝OA患者明顯升高。Elliott在一項包含多人種樣本病例的大型研究中發現白色人種HA水平相對黑種人明顯升高,男性高於女性。另一項含291例白人膝OA患者的研究發現:血COMP水平隨著患者K-L(Kellgren-Lawrence grades)評分增加而顯著升高。Garnero在324例絕經後婦女中研究發現,不同部位OA患者尿中CTX-Ⅱ水平也不相同,提示可以此鑒別不同部位的OA。
用於評估疾病嚴重程度的標記物與那些用於診斷的標記物參數相似,因此多數同時隸屬於以上兩類標記物。由於OA常存在於1個以上部位且常伴有各部位症狀不同程度的疊加,因此,疾病嚴重度標記物目前僅應用於臨床研究,尚不能在個體患者中僅憑一種標記物精確地反映疾病嚴重程度。

疾病預後標記物
研究發現相對非進展期或控制期患者,進展期OA患者CTX-I及血清降鈣素水平較高,然而另外一些研究得出相反的結果。這可能由於:骨代謝標記物不僅反映出OA引起的軟骨下骨異常,同時也反映全身骨骼代謝情況,因此易受年齡、絕經、骨質疏鬆及其他骨骼系統疾病影響。
在一項172例4年以上病程原發性膝OA患者中研究發現,進展期患者滑液中Ⅱ型膠原代謝產物PIICP水平較非進展期患者明顯升高。鹿特丹研究中心隨訪1 235例膝和(或)髖OA患者6.6年發現CTX-Ⅱ和HELlX-Ⅱ水平的升高與膝和髖OA的患病率和病情進展密切相關。在另一項含333例髖OA患者的研究中發現,CTX-II和HA處於高水平狀態的患者伴有影像學上病情的迅速進展表現。Deberg[9]研究發現膝OA患者尿Coll2-l和Coll2-l NO2高水平狀態超過1年可預測以後3年間關節間隙狹窄程度的變化。Pavelka隨訪89例膝OA患者2年發現,HA高基礎水平狀態與OA影像學上迅速進展相關。Sharif對115例膝OA患者隨訪5年發現,進展期患者COMP基礎水平明顯高於非進展期患者。Garnero隨訪75例膝OA患者1年發現,低PIIANP水平和高CTX-Ⅱ水平患者相比對照組膝關節損害速度加快8倍。在一項230例膝OA患者的研究中發現,通過測定Ⅱ型膠原代謝產物(C2C,PIICP,C1,2C,PIICP)基礎水平可預測18個月間OA影像學進展。
由於在OA患者,關節損傷包含骨、軟骨、滑膜,因此使用數種標記物的組合預測疾病預後十分必要。

療效標記物
BRISK研究中心在一項為期1年含186例輕至中度OA患者的前瞻性研究中發現,選用二磷酸鹽制劑治療後,尿CTX-Ⅱ水平顯著降低。在一項含20l例膝OA患者的研究中發現,應用非類固醇抗炎葯治療後尿CTX-Ⅱ水平下降。Garnero在另一組選用COX-2抑制劑治療的膝OA患者中得到類似結果。
Christgau在212例膝OA患者中研究發現,高CTX-Ⅱ基礎水平患者在使用硫酸氨基葡萄糖治療超過3年後CTX-Ⅱ水平明顯下降。在一項含301例絕經後女性OA患者的研究中,選擇性雌激素受體調節劑可使尿CTX-Ⅱ水平明顯降低。Manicourt發現膝OA患者中,鮭魚降鈣素治療後尿CTX-Ⅱ,C2C和MMP-1,3水平明顯下降。
一旦關於OA患者對於軟骨蛋白活性葯物治療的反應標記物的相關評測得以完善,生物標記物可能提供更多治療對於軟骨循環作用的相關信息,這將極大補充完善由臨床和影像學提供的信息。

研究性標記物
研究性標記物(investigative markers)是一類無足夠依據包含於其他分類中的標記物,採用新的研究方法獲得的標記物可歸於此類。例如,研究發現尿液中存在一種與膝和髖OA密切相關的新型標記物並與K-L評分相關可被歸於此類。然而,數項關於編碼關節軟骨和細胞外基質蛋白基因的研究尚未得到足夠證據去證實這些基因的非同義突變是原發性OA的危險因素。研究性標記物的臨床應用尚有待時機,但它們提供了OA發病機理的新信息,臨床具潛在應用前景。

6、肝癌骨轉移,腫瘤標志物有異常嗎

這個不是一定的,因為腫瘤的發生發展是與基因關系密切的,而腫瘤標志物僅作為一個參考指標,可以通過佳學基因腫瘤分子病理分型來分析疾病的預後、發生發展以及是否轉移。佳學基因

7、什麼是分子標記

分子標記是生物遺傳標記的一種。通過引物設計的不同,用PCR的方法在生物的基因組DNA上擴增出相關條帶,通過電泳、軟體識別、分析,可用作生物遺傳信息的研究。
分子標記種類有很多,第一代分子標記以RFLP為代表,是基於酶切位點的多態性開發的分子標記。
第二代分子標記以SSR為代表,是基於簡單重復序列的多態性。第二代分子標記通過引物的特殊設計,能夠擴增DNA上的相應位置的序列,根據它們的多態性,進行下一步分析。
第三代分子標記以SNP為代表,單核苷酸多態性。是基於高通量測序為基礎的新一代分子標記技術。

8、分子標記有哪些類型

分子標記大多以電泳譜帶的形式表現, 大致可分為三大類。
第一類是以分子雜交為核心的分子標記技術, 包括:(1) 限制性片段長度多態性標記(Restriction fragment length polymorphism, 簡稱 RFLP 標記); (2) DNA 指紋技術(DNA Fingerprinting); (3) 原位雜交(in situ hybridization) 等;
第二類是以 PCR 反應為核心的分子標記技術, 包括:(1) 隨機擴增多態性 DNA 標記(Random amplification polymorphism DNA, 簡稱 RAPD 標記); (2) 簡單序列重復標記(Simple sequence repeat, 簡稱 SSR 標記) 或簡單序列長度多態性(Simple sequence length polymorphism, 簡稱 SSLP 標記); (3) 擴展片段長度多態性標記(Amplified fragment length polymorphism, 簡稱 AFLP 標記); (4) 序標位(Sequence tagged sites, 簡稱 STS 標記); (5) 序列特徵化擴增區域(Sequence charactered amplified region, 簡稱 SCAR 標記) 等;
第三類是一些新型的分子標記,如: (1) 單核苷酸多態性(Single nuleotide polymorphism, 簡稱 SNP 標記); (2) 表達序列標簽(Expressed sequences tags, 簡稱 EST 標記) 等。

9、分子標記方法

分子標記
在農業基礎與應用研究領域,分子標記技術已開始應用於作物種質資源和育種的研究,特別是在構建分子遺傳圖譜和標記目的性狀基因方面取得了很大的進展。

形態標記(morphologica markers)即植物的外部特徵特性,如株高、穗長、粒色、千粒重等。此種形態標記簡單直觀,但是形態標記數少、多態性差、易受環境條件影響。在小麥抗葉銹病基因標記方面,SINGH[5]曾利用形態標記發現慢葉銹基因Lr34和小麥葉片尖部壞死基因緊密連鎖。

細胞標記(cytological markers)主要是染色體核型(染色體鼠數目、大小、隨體、著絲點位置等)和帶型(C帶、N帶、G帶等),這類標記的缺點是數目有限。目前,還未發現用其進行小麥抗葉銹基因的標記。

生化標記(biochemical markers)主要包括同工酶和儲藏蛋白。生化標記具有經濟方便的優點,但其標記數有限。DAVlD[6]等曾利用生化標記內肽酶同工酶EP-Dld作為遺傳標記對以Thatcher為背景的小麥抗葉銹病近等基因系進行連鎖分析,發現EP-Dld與Lr19緊密連鎖,重組值為(0.01士0.09)個作圖單位。WINZELER[7]等利用含Lr19的小麥抗葉銹病近等基因系,發現生化標記內肽酶同工酶EP-Dl的無效等位基因EP-Dlc可以作為與 Lr19緊密連鎖的生化標記,遺傳距離為(0.33士0.33)cM。

分子標記與形態標記、細胞標記、生化標記相比較,有以下幾方面的優點:①在植物體的多個組織及生育階段均可檢測到,不受時空限制。②數量多,遍及整個基因組。③有許多標記表現為共顯性,能夠鑒別基因型純合與否,提供完整的基因型。在標記小麥抗葉銹病基因方面,分子標記可以在更深層次上揭示小麥抗銹遺傳機制。通過找到與抗銹基因緊密連鎖的分子標記,不但能在遺傳背景不同的育種材料中特異性的檢測目的基因,而且可以在任一生育階段同時對多個抗性基因進行篩選,這為了解抗源和抗病品種中所含有的抗性基因提供了更為迅速、穩定、可靠的方法。

目前,用於標記小麥抗葉銹病基因的分子標記主要有以下幾種:

2.l RFLP技術在小麥抗葉銹病基因標記中的應用

RFLP(restriction fragment length polymorphism)作為遺傳分析的工具開始於1974年,80年代開始應用於植物。其基本原理是物種的基因組DNA在限制性內切酶的作用下,產生相當多的、大小不等的DNA片段,用放射性同位素標記的DNA做探針把與被標記DNA相關的片段檢測出來,從而構建出多態性圖譜;它所代表的是基因組 DNA在限制性內切酶消化後產生的片段在長度上的差異。RFLP技術被廣泛應用於小麥遺傳圖譜的構建標記和定位小麥的目的基因。

在小麥抗葉銹病基因的RFLP標記方面,SCHACHERMAYR等[8]將一編碼受體蛋白激酶的Lrkl0基因的3.9Kb的HindⅢ片段用 PstⅠ分成六個亞片段,將這些亞片段作為RFLP標記,尋找到了特異的Lrk10片段可作為與小麥抗葉銹病基因Lr10緊密連鎖的分子標記,將這一亞片段與已知抗性基因的單基因系進行Southern雜交,發現這一3.9Kb的HindⅢ片段僅存在於攜帶抗葉銹病基因Lr10的近等基因系中。進一步將此 RFLP標記Krkl0-6轉變為STS標記STSLrkl0一6,發現一282bp的片段僅存在於攜帶Lr10的品種中,F2群體分離進一步證明此 282bp的片段與Lr10緊密連鎖。SCHACHERMAYR等[9]利用近等基因系找到了與抗葉銹病基因Lr24緊密連鎖的RFLP和RAPD的標記。在供試的115個RFLP探針中,其中6個與Lr24緊密連鎖,從360個隨機RAPD引物中,找到了11個能夠揭示多態性的引物,其中一個與 Lr24緊密連鎖,並將該RAPD產物克隆、測序將其轉化為更為穩定可靠的STS標記,為分子標記輔助育種打下了良好的基礎。FEUILLET等[10] 利用小麥抗葉銹病近等基因系Lr1/6*Thatcher和Thatcher及感病品種Frisal,通過F2群體分離,將37個RFLP中的16個定位在了第五部分同源群,而且能在Lr1/6*Thatcher和Frisal之間揭示多態性,I1個RFLP探針能在近等基因系間揭示多態性,F2群體分離分析發現,其中3個與抗性基因連鎖,其中一定位在染色體5D上的探針pTAG621證明與Lr1緊密連鎖,並將這一RFLP標記轉化為了更為可靠的STS 標記。

AUTRIQUE[11]等利用4種含不同抗性基因的小麥近等基因系,根據抗性基因在其染色體上所處的位置選擇克隆,同時,從大麥的RFLP連鎖圖譜和D一基因組RFLP圖譜中,挑選了其它的克隆。通過雜交的方法來尋找多態性分子標記。結果發現,定位在染色體7DL和3DL上的8個分子標記,與抗性基因Lr19和Lr24共分離;來自Aegilops umbellulata的Lr9,被定位在染色體6B上,一克隆XksuD27與Lr9共分離,以及與Lr32緊密連鎖的兩個RFLP標記,遺傳距離分別為(3.3土2.6)cM和(6.9土3.6)cM。

2.2 小麥抗葉銹病基因的RAPD標記

NAIK等[12]利用含Lr28的抗葉銹病近等基因系,從80個隨機引物中找到了一個能在供體親本和輪回親本中揭示多態性的RAPD標記OPJ一 O1。將此387bp的多態性產物克隆、測序,將其設計成更為穩定的STS標記,利用BSA法,對F3群體進行分析,發現387bp的特異性產物只出現在抗性群體中,而在感病群體中表現缺失。證明了RAPD標記OPJ一O1和STS 標記均與Lr28緊密連鎖。SIELDLER等[13]利用400個隨機引物和14個DNA探針篩選近等基因系Lr9的多態性,並通過F2群體進行遺傳連鎖分析。結果表明2個RAPD標記和一個RFLP標記可以區分抗感品系,且與Lr9緊密連鎖。WILLIAM等[14]利用RAPD技術,從400個隨機引物中,找到了3個能在抗病群體和感病群體中揭示多態性的引物0PG-05、0P1-16和OPR-03,將其克隆轉化成探針後,對重組群體進行 Southern雜交,確定其中前兩個探針與持久抗葉銹病基因相關的數量性狀位點(QTL)緊密連鎖,其中定位在7BL上的QTL與抗葉銹病基因Lr34 部分同源。SCHACHERMAYR等[15]從395個隨機引物中篩選出了3個與小麥抗葉銹病基因Lr9連鎖的RAPD標記,將其特異性產物克隆、測序,然後轉化成更為穩定的STS標記,F2、F3分離群體檢測發現,所有的3個RAPD標記0PA-07、0PJ-l3、OPR-15和一RFLP標記 cMWG684與Lr9緊密連鎖。另一RFLP標記PSR546也與Lr9緊密連鎖,並與上述四個

DNA標記緊密連鎖,遺傳距離為(8士2.4)cM,此標記被定位在小麥染色體長臂6BL上。DEDRYVER等[16]利用含Lr24的小麥抗葉銹病近等基因系,在125個隨機引物中,只有引物OP-H5能在抗病親本RL6064中擴

增出一700bp的特異性的條帶,而在感病親本Thatcher中沒有。F2群體分離證明,該標記與Lr24完全連鎖。將其轉變成穩定、可靠的SCAR標記,為分子標記輔助育種提供了有力的工具。

3 其它分子標記

雖然RFLP和RAPD是兩種比較普遍的分子標記,但RFLP在小麥中檢測的多態性較低,僅為20%--38%。RAPD是方便經濟的分子標記,但是重復性和穩定性較差。其它的分子標記,如SSR、ISSR和AFLP的綜合信息量大,在作物特別是小麥遺傳資源的研究上有著廣闊的應用前景。

4 分子標記輔助選擇

目前,分子標記技術已開始應用於育種實踐,並表現出其獨特的優越性。尋找與重要的農藝性狀緊密連鎖的分子標記,是進行分子標記輔助選擇(又稱分子育種)和通過作圖克隆基因的基礎。分子標記輔助選擇(Molecular-assisted-selection簡稱MAS)是生物技術與傳統遺傳育種相結合而形成的,它可以減少傳統的回交育種過程中很難消除的連鎖累贅,還可以把不同抗葉銹病基因聚合到同一優良品種中,實現同效基因的累加作用,獲得持久抗性。在獲得穩定的分子標記的基礎上,通過染色體步行(Chromosome walking)等方法分離克隆該基因。

由於分子標記育種技術目前尚不成熟和完善,因此還不能作為一種育種方法單獨使用。我國傳統育種經驗豐富,因此,應注意將分子標記這一先進技術與育種家的豐富經驗相結合,使分子標記輔助選擇發揮其更大的作用。

10、請教分子標記SSR標記(STMS)原理和步驟

SSR:微衛星DNA又叫簡單重復序列,指的是基因組中由1~6個核苷酸組成的基本單位重復多次構成的一段DNA,廣泛分布於基因組的不同位置,長度一般在200bp以下。研究表明,微衛星在真核生物的基因組中的含量非常豐富,而且常常是隨機分布於核DNA中。

微衛星中重復單位的數目存在高度變異,這些變異表現為微衛星數目的整倍性變異或重復單位序列中的序列有可能不完全相同,因而造成多個位點的多態性。如果能夠將這些變異揭示出來,就能發現不同的SSR在不同的種甚至不同個體間的多態性,基於這一想法,人們發展起了SSR標記。
SSR標記又稱為sequence tagged microsatellite site,簡寫為STMS,是目前最常用的微衛星標記之一。由於基因組中某一特定的微衛星的側翼序列通常都是保守性較強的單一序列,因而可以將微衛星側翼的DNA片段克隆、測序,然後根據微衛星的側翼序列就可以人工合成引物進行PCR擴增,從而將單個微衛星位點擴增出來。由於單個微衛星位點重復單元在數量上的變異,個體的擴增產物在長度上的變化就產生長度的多態性,這一多態性稱為簡單序列重復長度多態性(SSLP),每一擴增位點就代表了這一位點的一對等位基因。由於SSR重復數目變化很大,所以SSR標記能揭示比RFLP高得多的多態性,這就是SSR標記的原理。

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