骨髓塗片的製作的實驗器材

1、人血塗片的製作方法

血塗片-實驗材料、試劑
3.1實驗材料：醫用采血針、酒精棉球、載玻片、血推片、消毒牙簽
3.2實驗試劑：瑞氏染液、抗B血清、抗A血清、生理鹽水、蒸餾水
3.3儀器設備：Motic光學顯微鏡
血塗片-實驗步驟 聽語音
4.1ABO血型鑒定
4.1.1取一塊清潔玻片，用記號筆標上記號。
4.1.2用小滴管吸A型標准血清（抗B）一滴加入左側，用另一小滴管吸B型標准血清（抗A）一滴加入右側
4.1.3以穿刺法自左手無名指指尖取血，在玻片的每側各放入一小滴血，用牙簽攪拌，使每側抗血清和血液混和。每邊用一支牙簽，切勿混用。
4.1.4靜置室溫下10—15min後，觀察有無凝集現象，並據此判斷血型。
4.2血塗片的製作及血細胞觀察
4.2.1取末捎血一滴置於玻片的一端,左手持載玻片,右手以邊緣平滑的推片的一端從血滴前方後移接觸血滴，血滴即沿推片散開。然後便推片與載片夾角保持30-45度平穩地向前移動,載片上保留下一薄層血膜
4.2.2血塗片製成後可手持玻片在空氣中揮動,使血膜迅速乾燥,以免血細胞皺縮.
4.2.3用蠟筆在血膜兩側劃線,以防染液溢出,然後將血膜平放在染色架上.加瑞氏染液2-3滴,使覆蓋整個血膜,固定0.5-1.0分鍾.滴加等量或稍多的新鮮蒸餾水,與染料混勻染色5-10分鍾.
4.2.4用清水沖去染液,待自然乾燥後或用吸水紙吸干,即可置血塗片於顯微鏡下進行鏡檢。
4.2.5白細胞分類計數。
選擇塗片的體尾交界處染色良好的區域,在油鏡下計數100個紅細胞,按其形態特徵進行分類計數,求出各類細胞所佔比值。

2、如何用顯微鏡檢驗血液，製作塗片如何利用一台生物顯微

如何用顯微鏡檢驗血液，製作塗片如何利用一台生物顯微
用顯微鏡觀察人血塗片的步驟：
1．右手握住鏡臂，左手托住鏡座。
2．把顯微鏡放在實驗台上，略偏左（顯微鏡放在距實驗台邊緣7厘米左右
處）。安裝好目鏡和物鏡。
3．轉動轉換器，使低倍物鏡對准通光孔(物鏡的前端與載物台要保持2厘
米的距離)。
4．把一個較大的光圈對准通光孔。左眼注視目鏡內(右眼睜開，便於以後同時畫圖)。轉動反光鏡，使光線通過通光孔反射到鏡筒內。通過目鏡，可以看到白亮的視野。
5．把所要觀察的玻片標本（也可以用印有「6」字的薄紙片製成）放在載物台上，用壓片夾壓住，標本要正對通光孔的中心。
6．轉動粗准焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標本為止（眼睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標本）。
7．左眼向目鏡內看，同時反方向轉動粗准焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。再略微轉動細准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。
8.移動裝片，使要觀察的目標移到視野中央。
9.轉運轉換器，換用高倍鏡。
10.調節細准焦螺旋，直到看到清晰的物像。

3、怎麼製作血塗片？

血常規是醫院常作的檢查項目，但是由於大部分的醫院用的都是三分類的血球儀（五分類血球儀價格太高），在分析上存在一定的缺陷，而血塗片則能在一定程度上很好的補償，使得三分類的血球儀也能起到五分類的效果。而且血塗片的作用還不僅於此，它還能更直觀的放映細胞的形態，以及血液的一種狀態。現在就血塗片的製作和應用做一個介紹。

血塗片的製作：

血塗片的製作方法很多，但需要的材料也都是一樣的，載玻片和（或）蓋玻片。現在介紹一種我們醫院常用的塗片方法：

1、首先左手持一載玻片，將採到的血（做血常規剩下的血）滴一滴到載玻片一端：

血塗片

2、右手持一蓋玻片作為推片，成30-45度角於血滴前方靠近血滴

血塗片

3、右手移動蓋玻片使其一端與血液接觸

血塗片

4、右手持蓋玻片往前推動，速度不能太慢，保證血液均勻的被推開

血塗片

5、做好的血塗片

血塗片

5、血塗片做好後需要風干，之後就可以進行染色，盡管每個醫院所用染色液可能不一樣，但基本的方法都一致，也可以根據染色液的說明進行具體操作，我們醫院用的是diff-quick染液。

染好的片子就需要在顯微鏡下觀察，一般我們會從低倍鏡開始觀察，再逐次轉換為高倍鏡甚至油鏡。

。
細胞分類計數器

一般情況下，我們會在顯微鏡下找到一個合適的視野開始計數，按照一定的方向順序來數白細胞，而這個視野的選著會很重要，在做血塗片的時候血塗片上通常會有三條帶，中間的那一條帶就是我們觀察的區域，鏡下會顯示細胞既不重疊也不太稀疏。然後我們會把數的100個白細胞記錄下來並分類，並分別記下各類細胞所佔的比例。

細胞分類計數器

（細胞分類計數器）

通過這樣的方法，我們就可以得到白細胞下各個種類的比例，結合血常規的白細胞數目就可以得到一個五分類的項目，這對於分析動物的身體狀況更加的全面和科學。如上圖的結果是：嗜中性粒細胞百分比：70%（分葉：57%，桿狀：13%）；淋巴性細胞百分比：25%；單核細胞百分比：3%；嗜酸性粒細胞百分比：2%；嗜鹼性粒細胞百分比：0。

再簡單舉例說一下血塗片在臨床上的應用，也是結合血常規的分析。如下圖為一隻犬的血常規結果：

從結果上看，RBC(紅細胞)下降，HGB(血紅蛋白)下降，HCT（紅細胞壓積）下降。很明顯的可以判定為貧血。但是貧血也分很多種的，到底是否為再生性，又或者是否是出血或溶血造成的。然後根據血塗片可以知道：

從該血塗片我們可以看到，紅細胞中間淡然區明顯擴大，說明了這是正紅細胞低色素性貧血，也就是由於缺鐵性貧血，需要補充鐵元素，增強營養。一方面我們知道動物的具體情況，可以針對性的幫助解決問題。

當然，血塗片在臨床上的作用不僅僅如此，我們不僅可以用來來計數分類白細胞，還可以觀察紅細胞的形態來判斷如果出現異性紅細胞的原因，白細胞形態異常的原因，還可以看到血液寄生蟲如：巴貝斯焦蟲，血吸蟲的微絲蚴。而且對於血常規儀器還可以起到一種驗證的作用，就是說如果血常規的結果與你在顯微鏡下看到的結果出入較大的時候，如果你保證你血塗片的製作和觀察都沒問題的話，就要懷疑機器的判讀有問題了。比喻抽血過程比較慢，導致血凝的出現而使得機器讀書的血小板極低，以及由於貓的血小板和紅細胞體積較近而出現的判讀等都可以用血塗片來糾正和驗證。

4、制備小鼠骨髓染色體標本過程中有哪幾個主要步驟影響製片結果

在制備小鼠骨髓細胞染色體標本過程中以下幾個步驟需要注意：

提前3-4小時候注射秋水仙素，時間太長或者太短都會影響染色體中期的數目和形態。

在低滲過程中時間和吹打都很重要，低滲過度染色體膨脹，染色後肥肥的，低滲時間不過染色後染色體顏色很深看不出條帶。

滴片，如果是教學的實驗,要求玻片是冰的,而且要傾斜，滴的高度一般在25-30CM，滴完要過酒精燈，讓固定液蒸發。滴的數量不要太多否則會重疊.如果是醫院里的染色體製片有專門的滴片機。

小鼠骨髓細胞染色體標本製作：

原理：

由於小鼠四肢骨內骨髓細胞中的造血幹細胞是生成各種血細胞和原始細胞，具有高度的分裂能力，本實驗採用這一材料，通過前處理，低滲，固定，製片，染色等步驟製得染色體標本，可觀察到許多處於分裂中期的染色體，可以進行染色體組型分析；

試劑、試劑盒：秋水仙素、姬姆薩染液、固定液、低滲液、生理鹽水；

儀器、耗材：天平、離心機、恆溫培養箱、顯微鏡；

實驗步驟

一、材料和方法

1.  材料：小白鼠。

2.  設備：天平，離心機，恆溫培養箱，顯微鏡。

3.  葯品：秋水仙素，姬姆薩染液，固定液，低滲液，生理鹽水。

二、步驟

秋水仙素處理--取骨髓--低滲處理--固定--離心--再固定--再離心--滴片--染色--鏡檢--封片。

5、血塗片的血塗片-實驗步驟

4.1ABO血型鑒定
4.1.1取一塊清潔玻片，用記號筆標上記號。
4.1.2用小滴管吸A型標准血清（抗B）一滴加入左側，用另一小滴管吸B型標准血清（抗A）一滴加入右側
4.1.3以穿刺法自左手無名指指尖取血，在玻片的每側各放入一小滴血，用牙簽攪拌，使每側抗血清和血液混和。每邊用一支牙簽，切勿混用。
4.1.4靜置室溫下10—15min後，觀察有無凝集現象，並據此判斷血型。
4.2血塗片的製作及血細胞觀察
4.2.1取末捎血一滴置於玻片的一端,左手持載玻片,右手以邊緣平滑的推片的一端從血滴前方後移接觸血滴，血滴即沿推片散開。然後便推片與載片夾角保持30-45度平穩地向前移動,載片上保留下一薄層血膜
4.2.2血塗片製成後可手持玻片在空氣中揮動,使血膜迅速乾燥,以免血細胞皺縮.
4.2.3用蠟筆在血膜兩側劃線,以防染液溢出,然後將血膜平放在染色架上.加瑞氏染液2-3滴,使覆蓋整個血膜,固定0.5-1.0分鍾.滴加等量或稍多的新鮮蒸餾水,與染料混勻染色5-10分鍾.
4.2.4用清水沖去染液,待自然乾燥後或用吸水紙吸干,即可置血塗片於顯微鏡下進行鏡檢。
4.2.5白細胞分類計數。
選擇塗片的體尾交界處染色良好的區域,在油鏡下計數100個紅細胞,按其形態特徵進行分類計數,求出各類細胞所佔比值。
1.瑞氏染液:瑞氏染料1g加甲醇(AR)600ML。將瑞氏染料放在清潔乾燥乳缽中,加少量甲醇,充分研磨使染料溶解.將已完全溶解的部分倒入棕色試劑瓶中,未溶解部分再加少量甲醇研磨,直至染料完全溶解於甲醇為止。新配製的染料偏鹼,須在室溫和37℃下一定時間待染料成熟,主要美藍逐漸增多為天青B後才能使用.貯存時間越久染色效果越好,因此,Deamgilliland等採用吸光度比值(rA)作為瑞氏染料的質量規格.rA測定方法如下:取瑞氏染液15-25ul(視染液濃度而定)加甲醇10ml稀釋,混勻後以甲醇為空白管分別以波長650nm,525nm比色,rA=A650/A525。因為美藍吸收峰為波長650nm,伊紅吸收峰波長為525nm,天青B吸收峰也為650nm,但吸光度A約為美藍的一半.所以新配製染料的RA接近2,隨著美藍逐漸氧化為天青B,RA也相應下降,RA下降達1.3±0.1即可使用.瑞氏染料在貯存過程中必須塞嚴,以防甲醇揮發和氧化為甲酸.有人主張配方中加入30ml甘油,防止甲酸揮發,並可使細胞染色清晰.甲醇必須純凈,如甲醇中丙酮含量過多,染色偏酸,使細胞著色不良。磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8)：磷酸二氫鉀0.3g加磷酸氫二鈉0.2g再加蒸餾水至1000ml,配製成磷酸鹽緩沖液調整PH,如無緩沖液可用新鮮蒸餾水代替。

6、小鼠骨髓細胞染色實驗中有哪些材料可用作制備染色標本,其基本特性是什麼

在明視野下，若能看清的話就不要染色了。因為在無法觀測清楚時，才會染色。通常染色劑會影響微生物的活性，更多的是使細胞死亡。即使是活性染料也有一定的影響。 根據經驗 不染色完全可以看見顯微結構 細胞膜 細胞壁 液泡 核 基本可以看見 葉綠體隱約可以看見 當然解析度和光圈大小需要調整到最佳狀態 鞭毛可以隱約看見 黴菌放線菌細菌的形態當然是不染色完全可以看 如果想看更細致些 比如線粒體 高爾基體 核膜 微囊體 膜泡等亞顯微結構 需要用特定的分子染料進行染色再進行觀察 如果你不需要做活體實驗而只是觀察的話，染色吧，清晰度好一些。

7、什麼是血塗片？如何製作血塗片？

認識紅細胞和白細胞。
材料用具: 脫脂棉、已消毒過的針和載玻片，體積分數為
75%的酒精。
方法步驟: 1、用蘸有何種分數為75%的酒精的脫脂棉，
（邊講解邊演示）
對將要取血的部位（如指尖）進行消毒；
2、用已消毒的針尖刺破指尖的皮膚；
3、擠出一滴血，滴在已消毒的載玻片上；

4、另取一片載玻片作推片，將推片自血滴左

側向右移動；
5、當血滴均勻地附著在兩片之間後，再將推

片向左平穩地推移（兩片成30~45度夾角）；
6、推出均勻的血膜。

8、塗片是指用什麼的生物材料經過什麼製成的

塗片是指用從患者身上採集的液體標本（如血液，骨髓液等）均勻的塗抹在玻璃片上製成的標本，用於實驗室診斷和病理診斷。