1、制備小鼠骨髓染色體標本過程中有哪幾個主要步驟影響製片結果
在制備小鼠骨髓細胞染色體標本過程中以下幾個步驟需要注意:
提前3-4小時候注射秋水仙素,時間太長或者太短都會影響染色體中期的數目和形態。
在低滲過程中時間和吹打都很重要,低滲過度染色體膨脹,染色後肥肥的,低滲時間不過染色後染色體顏色很深看不出條帶。
滴片,如果是教學的實驗,要求玻片是冰的,而且要傾斜,滴的高度一般在25-30CM,滴完要過酒精燈,讓固定液蒸發。滴的數量不要太多否則會重疊.如果是醫院里的染色體製片有專門的滴片機。
小鼠骨髓細胞染色體標本製作:
原理:
由於小鼠四肢骨內骨髓細胞中的造血幹細胞是生成各種血細胞和原始細胞,具有高度的分裂能力,本實驗採用這一材料,通過前處理,低滲,固定,製片,染色等步驟製得染色體標本,可觀察到許多處於分裂中期的染色體,可以進行染色體組型分析;
試劑、試劑盒:秋水仙素、姬姆薩染液、固定液、低滲液、生理鹽水;
儀器、耗材:天平、離心機、恆溫培養箱、顯微鏡;
實驗步驟
一、材料和方法
1. 材料:小白鼠。
2. 設備:天平,離心機,恆溫培養箱,顯微鏡。
3. 葯品:秋水仙素,姬姆薩染液,固定液,低滲液,生理鹽水。
二、步驟
秋水仙素處理--取骨髓--低滲處理--固定--離心--再固定--再離心--滴片--染色--鏡檢--封片。
2、骨髓瘤細胞中用染色體製片,其中片的類型是什麼
染色與壓片
(1) 醋酸洋紅染色製片:取一處理好的根尖置於載玻片中間,用吸水紙吸去多餘的保存液,用刀片將根尖分生組織切 1 :。將其切成薄片,加一小滴醋酸洋紅染色液.約 5 分鍾後加蓋玻片。用吸水紙放在蓋玻片上面,左手按住載玻片,用右手拇指在吸水紙上對准根尖部位施加壓力。或用鉛筆的橡皮頭輕敲蓋玻片即可,使材料均勻分散,細胞分離壓平。壓力要適當,注意不要移動蓋片。為增強染色效果,可將載玻片在酒精燈上稍加熱,但不使其沸騰。以免染料沉澱。加熱的作用不僅可以使材料軟化和易於著色.而且可以破壞部分細胞質,使核和染色體有一個比較清爽的背景。如果整個細胞染色較淺,可沿蓋片一側,滴加少許染色液,使其慢慢滲入.放置片刻再進行加熱,如此反復進行染色。
醋酸洋紅常用於染色體的臨時製片,其著色不強,分色效果也不甚佳,故不宜製作永久製片,
(2) 醋酸地衣紅染色製片:由於地衣紅很容易溶於酒精。所以材料從保存液中取出後,應當充分洗凈後浸入 45 %醋酸中再進行染色。染色時,將材料置於小試管中,加入含鹽酸的 2 %地衣紅使材料浸沒,在酒精燈上加熱 2 - 3 秒鍾.靜置約半小時或更長時間,取出材料置載玻片上,加一滴不含鹽酸的 l %醋酸地衣紅染色液。如醋酸洋紅法操作進行壓片。地衣紅染色液染色,著色力比洋紅強,染色較深,尤其對根尖等體細胞染色體的染色比洋紅更顯優越。
(3) 鐵礬—蘇木精染色製片法:這是用在根尖細胞有絲分裂染色體計數中效果最好的一種方法,對各種植物的染色體均可染上較深的顏色,分色清晰,照像效果較好.利於標本長期保存。
3、有關小白鼠骨髓細胞染色體製片的幾個疑問!
1題答:因為使用骨髓細胞便於觀察
2題答:秋水仙素是在真核細胞有絲分裂時阻止紡錘絲的形成從而致使母細胞中染色體數目加倍。
3題答:利用低滲法來使細胞漲破,致使滴片時染色體能暴露在玻片上,便於觀察。
4題答:不知道....猜猜行不?我想是為了防止細菌的侵蝕吧....
5題答:我認為秋水仙素的步驟能夠影響實驗結果。
6題答:.....我給你個網站你看看吧。
http://www.bbioo.com/bio101/2008/22660.htm
還有http://www.bbioo.com/bio101/2007/8490.htm
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4、骨髓纖維化能活多久
骨髓纖維化是骨髓增殖性疾病的一種,是造血幹細胞克隆性腫瘤性疾病。骨髓纖維化在早期,可以出現外周血中血細胞數量的增高,同時伴有脾臟的腫大,在後期就會出現骨髓衰竭的情況,表現為外周血三系減少。目前骨髓纖維化還沒有特效的治療辦法,可以服用沙利度胺等葯物維持治療,一般病人的存活期在4年左右的時間。如果病人有條件做了骨髓移植,有治癒的可能。如果骨髓移植成功以後治癒了,病人的生存期就會得到明顯的延長,有的甚至與常人的壽命存活無異。所以,出現了骨髓纖維化,要積極的尋找骨髓配型,如果有合適的骨髓配型,要盡早做骨髓造血幹細胞移植治療。
5、骨髓細胞染色體製片的幾個疑問,1.為什麼用骨髓細胞
和時間無關吧,秋水仙素的作用是阻止紡綞絲生成,這樣分裂後期就不會發生染色體分離,從而形成多倍體。
6、捐獻造血幹細胞對年齡有什麼要求嗎?
健康者在多大年齡適合捐獻造血幹細胞?
年齡在18-45歲的健康者均可登記成為捐獻造血幹細胞的志願者,18-55歲健康者可採集造血幹細胞。
為什麼45-55歲的健康者不再接受登記?
採集造血幹細胞的最佳年齡為18-55歲,捐獻者登記入庫後到尋找到相合患者需要一定的時間。為充分利用有限的檢測資金,登記年齡以不超過45歲為宜。
造血幹細胞志願捐獻者的健康標准?
凡年齡在18-55周歲,身體健康,經下列血液檢查合格者,都可以成為造血幹細胞捐獻者。
丙氨酸氨基轉移酶(ALT)40單位
乙型肝炎病毒表面抗原:陰性
丙型肝炎病毒抗體:陰性
艾滋病病毒抗體:陰性
梅毒試驗:陰性
怎樣加入中國造血幹細胞捐獻者資料庫,成為一名捐獻造血幹細胞志願者?
如果你適齡、身體健康、志願捐獻造血幹細胞,可與當地紅十字會的熱線電話聯系報名、填寫志願捐獻書及有關表格,並抽取5毫升血液。組織配型實驗室將會對你的血液進行HLA分型等檢驗,並把你的所有相關資料錄入中國造血幹細胞捐獻者資料庫的計算機資料庫中,以供渴望移植治療的患者尋找配對,這樣你就成了一名光榮的捐獻造血幹細胞志願者。
我如何知道自己已成為捐獻造血幹細胞志願者?
中國造血幹細胞捐獻者資料庫設於全國各地的捐獻者服務機構將會通知你被接納為捐獻造血幹細胞志願者,並經常與你保持聯系。
捐獻登記和捐獻造血幹細胞有補貼嗎?
捐獻造血幹細胞是愛的奉獻和救人善舉。一般不提倡補貼。
志願者報名登記後,是否馬上就要捐獻造血幹細胞?
志願中報名登記後,首先要安排你抽取5毫升血做HLA分型檢驗,數據儲存到中國造血幹細胞捐獻者資料庫中備查。當某一位患者需要進行造血幹細胞移植時,由移植中心將患者的HLA分型數據傳送到資料庫,如果檢索結果得只你的HLA正好與患者吻合時,省級管理中心將通知你做捐獻的准備。這個過程可能很短,也可能要等若干年。而大部分志願者可能沒有捐獻的機會。
作為捐獻造血幹細胞的志願者還應注意哪些問題?
當你或你聯系人的電話、地址發生變化時,希望及時通知登記部門,以便在需要時能很快找到你,使患者的疾病及時得到治療,並保證你實現救人的願望。
我是否可以隨時改變捐獻造血幹細胞的決定?
造血幹細胞登記及捐獻都是建立在自願的基礎上,登記後資料庫會對你的自願性進行再確認。因檢測你的HLA資料庫要花費一定的資金。為了節約經費,如果提出終止捐獻,請作慎重考慮。但移植前,尤其簽署捐獻同意書後就不能撤消捐獻決定,因為在這個時候,患者為准備移植必須進行大劑量的放療和化療,這時患者已經喪失造血能力,此期間若你終止捐獻,再臨時尋找配型相合者已來不及,患者將有生命危險。
報名參加中國造血幹細胞捐獻者資料庫,為什麼要捐獻者本人填寫同意書和捐獻者登記表?
加入中國造血幹細胞捐獻者資料庫,成為一名捐獻造血幹細胞志願者,是崇高的奉獻行為,在需要的時候,捐獻者將無償捐獻造血幹細胞給患者,因此,中國造血幹細胞捐獻者資料庫必須得到捐獻者的是書面承諾,並且通過登記表了解捐獻者准確的通訊地址和聯系方式。
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中國造血幹細胞捐獻者資料庫簡介
中國造血幹細胞捐獻者資料庫亦稱「中華骨髓庫」,其前身是1992年經衛生部批准建立的「中國非血緣關系骨髓移植供者資料檢索庫」。 2001年12月,中央編辦批准成立中國造血幹細胞捐獻者資料庫管理中心(以下簡稱「資料庫」),統一管理和規范開展志願捐獻者的宣傳、組織、動員、白細胞抗原(HLA)分型、為患者檢索相合的造血幹細胞捐獻者及移植治療服務等。
建設「資料庫」是人類文明和醫療事業的需要。造血幹細胞移植可以治療白血病、急性放射病、重症再生障礙性貧血、重症地中海性貧血、重症免疫性疾病以及因癌症接受放化療後的免疫功能低下等多種疾病。在我國每年有近百萬患者需要造血幹細胞移植,僅白血病患者每年新增4萬餘人。造血幹細胞移植成功的關鍵在於患者與捐獻者兩者的HLA分型必須相合,這種相合率在同卵雙生兄弟姐妹之間為100%,在有血緣關系的兄弟姐妹之間為25%。現在大多數青少年是獨生子女,如患病後很難找到與之相合的同胞供者。要想進行造血幹細胞移植,只能依靠社會上非血緣的志願捐獻者提供配型相合的造血幹細胞,但非血緣關系中HLA相合率約為1/400---1/10000。根據我國的實際情況,盡快建設30萬人份以上的「資料庫」,才能適應臨床為白血病等患者進行造血幹細胞移植的需要。
中國紅十字會是從事人道主義工作的社會救助團體。建設中國造血幹細胞捐獻者資料庫是政府委託中國紅十字會的一項特殊任務。它是紅十字會人道主義救助工作新的服務領域,也是紅十字會踐行「三個代表」重要思想,為廣大人民群眾辦的一件實事、好事。近兩年來,「資料庫」得到了政府有關部門以及社會各界的大力支持和關注。目前,全國已建立了24個省級分庫、24個HLA定點組織配型實驗室和1個質量控制實驗室。可用於為患者檢索服務的白細胞抗原分型資料6萬多份,截至2003年8月底已受理檢索3000多人次,其中,近300份志願者的資料與患者白細胞抗原分型相合,已為50多例白血病患者提供了造血幹細胞進行移植。
建設「資料庫」是一項系統的社會救助工程。希望社會各界一如既往繼續關心、支持「資料庫」的建設,以拯救更多的白血病患者,讓中國紅十字會保護人的生命和健康,促進和平進步事業的人道主義宗旨得到廣泛傳播,使中國紅十字會的人道、博愛、奉獻精神發揚光大。
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科 普 知 識 介 紹
一、什麼是骨髓?
骨髓是存在於長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀鬆骨質間的網眼中,是一種海綿狀的組織,能產生血細胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。人出生時,紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細胞增多,相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,最後幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。此種變化可能是由於成人不需全部骨髓腔造血,部分骨髓腔造血已足夠補充所需血細胞。當機體嚴重缺血時,部分黃骨髓可被紅骨髓替代,骨髓的造血能力顯著提高。
二、人體中有多少骨髓?
人體骨髓量與體重等因素相關,成年人骨髓量一般為3千克左右。
三、什麼是造血幹細胞?它能再生嗎?
造血幹細胞是能自我更新、有較強分化發育和再生能力、可以產生各種類型血細胞的一類細胞。造血幹細胞來源於紅骨髓,可以經血流遷移到外周血液循環中,不會因獻血和捐獻造血幹細胞而損壞造血功能。
四、什麼是造血幹細胞移植?
正常人的造血幹細胞通過靜脈輸注到患者體內,重建患者的造血功能和免疫功能,達到治療某些疾病的目的,此一過程既為造血幹細胞移植。
五、造血幹細胞移植的分類?
根據造血幹細胞來源可分為骨髓造血幹細胞移植、外周血造血幹細胞移植、臍帶血造血幹細胞移植。
六、造血幹細胞移植能治療哪些疾病?
造血幹細胞移植可用於治療腫瘤性疾病如:白血病、某些惡性實體瘤等,以及非腫瘤性疾病如:再生障礙性貧血、重症免疫缺陷病、急性放射病、地中海貧血等。
七、捐獻造血幹細胞影響身體健康嗎?
人體內的造血幹細胞具有很強的再生能力。正常情況下,人體各種細胞每天都在不斷新陳代謝,進行著生成、衰老、死亡的循環往復,失血或捐獻造血幹細胞後,可刺激骨髓加速造血,1-2周內,血液中的各種血細胞恢復到原來水平,因此,捐獻造血幹細胞不會影響健康。
八、採集造血幹細胞的主要方法有哪些?
有二種主要方法
1、抽取骨髓造血幹細胞:捐獻者作全麻或局麻,從捐獻者髂骨中抽取骨髓血。
2、外周血中採集幹細胞:給捐獻者注射動員劑,進行血液成分單采術,從捐獻者外周血中採集造血幹細胞。
九、中國造血幹細胞捐獻者資料庫提倡哪種方法採集造血幹細胞?
中國造血幹細胞捐獻者資料庫提倡的採集方式是從外周血中採集造血幹細胞。用科學方法將骨髓血中的造血幹細胞大量動員到外周血中,從捐獻者手臂靜脈處採集全血,通過血細胞分離機提取造血幹細胞,同時,將其它血液成份回輸捐獻者體內。
十、從外周血採集造血幹細胞,對捐獻者有危險嗎?
至今沒有因採集外周血造血幹細胞引起對捐獻者傷害的報道,在採集完成後,一些輕微疼痛感和不適將會消失,所用的器材都經嚴格消毒並一次性使用,確保捐獻者安全 。
十一、捐獻者大約需採集多少造血幹細胞?
大約需採集10克的造血幹細胞。
十二、在採集造血幹細胞前,為什麼要對捐獻者使用造血幹細胞動員劑葯物?對人體有副作用嗎?
在正常生理條件下,外周血的造血幹細胞量極少,不能滿足移植的需要,葯物動員之後,加速骨髓造血幹細胞的生成並釋放到外周血中,可使外周血造血幹細胞增加20-30倍,以滿足移植需要。據多年的臨床觀察和國際上目前的報道,葯物動員劑對人體健康沒有副作用。
十三、什麼是HLA,它在造血幹細胞移植中的作用是什麼?
HLA即人類白細胞抗原(Human Leucocyte Antigen),存在於人體的各種有核細胞表面。它是人體生物學「身份證」,由父母遺傳;能識別「自己」和「非己」,並通過免疫反應排除「非己」,從而保持個體完整性。因而HLA在造血幹細胞移植的成敗中起著重要的作用,造血幹細胞移植要求捐獻者和接受移植者進行HLA配型。
十四、捐獻者和患者為什麼要進行HLA 分型?
由於不同種族、不同個體的HLA千差萬別,必須採用一定的方法對捐獻者和患者的HLA型別進行確定,從而選擇與患者HLA相配合的捐獻者進行移植,這是造血幹細胞移植治療成功的關鍵。
十五、兄弟姐妹的HLA相合率是多少?
同卵(同基因)雙生兄弟姐妹為100%,非同卵(異基因)雙生或親生兄弟姐妹是1/4。
十六、什麼是血緣關系和非血緣關系?
血緣關系是指同胞兄弟姐妹、父母、表(堂)兄弟姐妹;非血緣關系是指與患者無任何血緣關系者。
十七、非血緣關系捐獻者中與患者的HLA相合率是多少?
人類非血緣關系的HLA相合率是1/400-10,000,在較為罕見的HLA型別中,相合的幾率只有幾萬甚至幾十萬分之一。由於獨生子女家庭的普遍性,高相合率人群減少,今後移植主要依靠在非血緣關系供者中尋找相合者。