1、牛骨髓中所提取的膠原蛋白和深海魚皮中所提取的膠原蛋白區別是什麼
至於牛體內和魚鱗提取的區別,網上提到的就更多了。無疑是魚鱗提取的更好了,它比牛體提取的要高出一倍。區別在於膠原蛋白活性激發的溫度。牛體內提取的膠原蛋白活性要在35度才能把活性全部激發。也就是說要在35度以上吸收的效果才會達到最佳。而魚鱗提取的活性激發溫度就要低很多,十度以上就能發揮最好的效果。如果是僅僅食用的話選用牛提取的牛已經可以了。但如果是外用美容那麼就請您選購魚鱗提取的。人的體表溫度要低於35度並不能很好的激發牛膠原的活性
2、怎樣提取骨髓
我就提取過骨髓,一般是從屁股左測或右側兩邊的骨頭上提取
3、怎樣提取幹細胞中的蛋白?
你的問題我沒學過,以下是我在網上找的,希望對你有用!
細胞內蛋白質的提取:
1、Trixon-100或NP-40裂解液裂解;
2、凍融裂解法;
3、研磨法;
「經典的就是分子克隆2講的,用RIPA裂解,然後刮下來,冰裕30min,超生,4度離心10min」
(1) 單層貼壁細胞總蛋白的提取:
1、倒掉培養液,並將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養液(或將瓶直立放置一會兒使殘余培養液流到瓶底然後再用移液器將其吸走)。
2、每瓶細胞加3ml 4℃預冷的PBS(0.01M pH7.2~7.3)。平放輕輕搖動1min洗滌細胞,然後棄去洗液。重復以上操作兩次,共洗細胞三次以洗去培養液。將PBS棄凈後把培養瓶置於冰上。
3、按1ml裂解液加10 μl PMSF(100mM),搖勻置於冰上。(PMSF要搖勻至無結晶時才可與裂解液混合。)
4、每瓶細胞加400 μ含PMSF的裂解液,於冰上裂解30min,為使細胞充分裂解培養瓶要經常來回搖動。
5、裂解完後,用干凈的刮棒將細胞刮於培養瓶的一側(動作要快),然後用槍將細胞碎片和裂解液移至1.5ml離心管中。(整個操作盡量在冰上進行。)
6、於4℃下12000rpm離心5min。(提前開離心機預冷)
7、將離心後的上清分裝轉移倒0.5min的離心管中放於-20℃保存。
(2) 組織中總蛋白的提取:
1、將少量組織塊置於1~2ml勻漿器中球狀部位,用干凈的剪刀將組織塊盡量剪碎。
2、加400 μl單去污劑裂解液裂(含PMSF)於勻漿器中,進行勻漿。然後置於冰上。
3、幾分鍾後再碾一會兒再置於冰上,要重復碾幾次使組織盡量碾碎。
4、裂解30 min後,即可用移液器將裂解液移至1.5ml離心管中,然後在4℃下12000rpm離心5min,取上清分裝於0.5ml離心管中並置於-20℃保存。
(3) 加葯物處理的貼壁細胞總蛋白的提取:
由於受葯物的影響,一些細胞脫落下來,所以除按(一)操作外還應收集培養液中的細胞。以下是培養液中細胞總蛋白的提取:
1、將培養液倒至15ml離心管中,於2500rpm離心5min。
2、棄上清,加入4ml PBS並用槍輕輕吹打洗滌,然後2500rpm離心5min。棄上清後用PBS重復洗滌一次。
3、用槍洗幹上清後,加100 μl裂解液(含PMSF)冰上裂解30min,裂解過程中要經常彈一彈以使細胞充分裂解。
4、將裂解液與培養瓶中裂解液混在一起4℃、12000rpm離心5min,取上清分裝於0.5ml離心管中並置於-20℃保存。
(二)蛋白含量的測定
(1) 製作標准曲線
1、從-20℃取出1mg/ml BSA,室溫融化後,備用。
2、取18個1.5ml離心管,3個一組,分別標記為0μg,2.5μg,5.0μg ,10.0μg ,20.0μg ,40.0μg。
3、按下表在各管中加入各種試劑。
0μg 2.5μg 5.0μg 10.0μg 20.0μg 40.0μg
1mg/ml BSA - 2.5μl 5.0μl 10.0μl 20.0μl 40.0μl
0.15mol/L NaCl 100μl 97.5μl 95.0μl 90.0μl 80.0μl 60.0μl
4、混勻後,室溫放置2min。在生物分光光度計(Bio-Photometer,Eppentoff)上比色分析。
(2) 檢測樣品蛋白含量
1、取足量的1.5ml離心管,每管加入4℃儲存的考馬斯亮藍溶液1ml。室溫放置30min後即可用於測蛋白。
、取一管考馬斯亮藍加0.15mol/L NaCl溶液100 μl,混勻放置2分鍾可做為空白樣品,將空白倒入比色杯中在做好標准曲線的程序下按blank測空白樣品。
3、棄空白樣品,用無水乙醇清洗比色杯2次(每次0.5ml),再用無菌水洗一次。
取一管考馬斯亮藍加95 μl 0.15mol/L NaCl NaCl溶液和5μl待測蛋白樣品,混勻後靜置2min,倒入扣乾的比色杯中按sample鍵測樣品。
注意:每測一個樣品都要將比色杯用無水乙醇洗2次,無菌水洗一次。可同時混合好多個樣品再一起測,這樣對測定大量的蛋白樣品可節省很多時間。測得的結果是5 μl樣品含的蛋白量。
(三) SDS-PAGE電泳
(1) 清洗玻璃板:
一隻手扣緊玻璃板,另一隻手蘸點洗衣粉輕輕擦洗。兩面都擦洗過後用自來水沖,再用蒸餾水沖洗干凈後立在筐里晾乾。
(2) 灌膠與上樣
1、玻璃板對齊後放入夾中卡緊。然後垂直卡在架子上准備灌膠。(操作時要使兩玻璃對齊,以免漏膠。)
2、配分離膠,加入TEMED後立即搖勻即可灌膠。灌膠時,可用10ml槍吸取5ml膠沿玻璃放出,待膠面升到綠帶中間線高度時即可。然後膠上加一層水,液封後的膠凝的更快。(灌膠時開始可快一些,膠面快到所需高度時要放慢速度。操作時膠一定要沿玻璃板流下,這樣膠中才不會有氣泡。加水液封時要很慢,否則膠會被沖變型。) " S9 O. L+ `- T: E
3、當水和膠之間有一條折射線時,說明膠已凝了。再等3min使膠充分凝固就可倒去膠上層水並用吸水紙將水吸干。
4、配5%的濃縮膠,加入TEMED後立即搖勻即可灌膠。將剩餘空間灌滿濃縮膠然後將梳子插入濃縮膠中。灌膠時也要使膠沿玻璃板流下以免膠中有氣泡產生。插梳子時要使梳子保持水平。由於膠凝固時體積會收縮減小,從而使加樣孔的上樣體積減小,所以在濃縮膠凝固的過程中要經常在兩邊補膠。待到濃縮膠凝固後,兩手分別捏住梳子的兩邊豎直向上輕輕將其拔出。
5、用水沖洗一下濃縮膠,將其放入電泳槽中。(小玻璃板面向內,大玻璃板面向外。若只跑一塊膠,那槽另一邊要墊一塊塑料板且有字的一面面向外。)
測完蛋白含量後,計算含50μg蛋白的溶液體積即為上樣量。取出上樣樣品至0.5ml離心管中,加入5×SDS 上樣緩沖液至終濃度為1×。(上樣總體積一般不超過20μl,加樣孔的最大限度可加25μl樣品。)上樣前要將樣品於沸水中煮5min使蛋白變性。
7、加足夠的電泳液後開始准備上樣。(電泳液至少要漫過內測的小玻璃板。)用微量進樣器貼壁吸取樣品,將樣品吸出不要吸進氣泡。將加樣器針頭插至加樣孔中緩慢加入樣品。(加樣太快可使樣品沖出加樣孔,若有氣泡也可能使樣品溢出。加入下一個樣品時,進樣器需在外槽電泳緩沖液中洗滌3次,以免交叉污染。
(3) 電泳 電泳時間一般1-2 h,電壓為80較好,也可用100。電泳至溴酚蘭剛跑出即可終止電泳,進行轉膜。
(四)轉膜
(1) 轉一張膜需准備6張7.0~8.3cm的濾紙和1張7.3~8.6cm的硝酸纖維素膜。切濾紙和膜時一定要戴手套,因為手上的蛋白會污染膜。將切好的硝酸纖維素膜置於水上浸2 h才可使用。(用鑷子捏住膜的一邊輕輕置於有超純水的平皿里,要使膜浮於水上,只有下層才與水接觸。這樣由於毛細管作用可使整個膜浸濕。若膜沉入水裡,膜與水之間形成一層空氣膜,這樣會阻止膜吸水。
(2) 在加有轉移液的搪瓷盤里放入轉膜用的夾子、兩塊海綿墊、一支玻棒、濾紙和浸過的膜。
(3) 將夾子打開使黑的一面保持水平。在上面墊一張海綿墊,用玻棒來回擀幾遍以擀走裡面的氣泡。(一手擀另一手要壓住墊子使其不能隨便移動。)在墊子上墊三層濾紙(可三張紙先疊在一起在墊於墊子上),一手固定濾紙一手用玻棒擀去其中的氣泡。
(4) 要先將玻璃板撬掉才可剝膠,撬的時候動作要輕,要在兩個邊上輕輕的反復撬。撬一會兒玻璃板便開始松動,直到撬去玻板。(撬時一定要小心,玻板很易裂。)除去小玻璃板後,將濃縮膠輕輕颳去(濃縮膠影響操作),要避免把分離膠刮破。小心剝下分離膠蓋於濾紙上,用手調整使其與濾紙對齊,輕輕用玻棒擀去氣泡。將膜蓋於膠上,要蓋滿整個膠(膜蓋下後不可再移動)並除氣泡。在膜上蓋3張濾紙並除去氣泡。最後蓋上另一個海綿墊,擀幾下就可合起夾子。整個操作在轉移液中進行,要不斷的擀去氣泡。膜兩邊的濾紙不能相互接觸,接觸後會發生短路。(轉移液含甲醇,操作時要戴手套,實驗室要開門以使空氣流通。)
將夾子放入轉移槽槽中,要使夾的黑面對槽的黑面,夾的白面對槽的紅面。電轉移時會產熱,在槽的一邊放一塊冰來降溫。一般用60轉移2 h或40轉移3 h。 (6) 轉完後將膜用1×麗春紅染液染5min(於脫色搖床上搖)。然後用水沖洗掉沒染上的染液就可看到膜上的蛋白。將膜晾乾備用。 / h3 P" o9 d8 n% U8 X. R
(五)免疫反應
(1) 將膜用TBS從下向上浸濕後,移至含有封閉液的平皿中,室溫下脫色搖床上搖動封閉1h。
(2) 將一抗用TBST稀釋至適當濃度(在1.5ml離心管中);撕下適當大小的一塊兒保鮮膜鋪於實驗檯面上,四角用水浸濕以使保鮮膜保持平整;將抗體溶液加到保鮮膜上;從封閉液中取出膜,用濾紙吸去殘留液後,將膜蛋白面朝下放於抗體液面上,掀動膜四角以趕出殘留氣泡;室溫下孵育1~2h後,用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次,每次10min;再用TBS洗一次,10min。 (3) 同上方法准備二抗稀釋液並與膜接觸,室溫下孵育1~2h後,用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次,每次10min;再用TBS洗一次,10min,進行化學發光反應。
(六)化學發光,顯影,定影
將A和B兩種試劑在保鮮膜上等體積混合;1min後,將膜蛋白面朝下與此混合液充分接觸;1min後,將膜移至另一保鮮膜上,去盡殘液,包好,放入X-光片夾中。
在暗室中,將1×顯影液和定影液分別到入塑料盤中;在紅燈下取出X-光片,用切紙刀剪裁適當大小(比膜的長和寬均需大1cm);打開X-光片夾,把X-光片放在膜上,一旦放上,便不能移動,關上X-光片夾,開始計時;根據信號的強弱適當調整曝光時間,一般為1min或5min,也可選擇不同時間多次壓片,以達最佳效果;曝光完成後,打開X-光片夾,取出X-光片,迅速浸入顯影液中顯影,待出現明顯條帶後,即刻終止顯影。顯影時間一般為1~2min(20~25℃),溫度過低時(低於16℃)需適當延長顯影時間;顯影結束後,馬上把X-光片浸入定影液中,定影時間一般為5~10min,以膠片透明為止;用自來水沖去殘留的定影液後,室溫下晾乾。
應注意的是:顯影和定影需移動膠片時,盡量拿膠片一角,手指甲不要劃傷膠片,否則會對結果產生影響。
凝膠圖象分析 將膠片進行掃描或拍照,用凝膠圖象處理系統分析目標帶的分子量和凈光密度值。
4、骨髓如何抽取?
朋友,詳細介紹給你了, 1.骨髓是人體的造血組織,位於人體許多骨骼內.成年人的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓.紅骨髓能製造紅細胞、血小板和各種白細胞.血小板有止血作用,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,抱括細菌、病毒等;某些淋巴細胞能製造抗體。因此,骨髓不但是制血器官,它還是重要的免疫器官。黃骨髓主要是脂肪組織,當人體貧血時,它可以轉化為紅骨髓。 2.捐獻骨髓會不會影響捐獻者的身體健康? 捐款骨髓不會影響人的健康。許多人認為捐獻骨髓是抽取脊髓,這完全是一種誤解。骨髓移植是需要人體內的紅骨髓——造血幹細胞。一個成年人的造血幹細胞是3公斤,一名捐獻者提拱不到10克的骨髓幹細胞就能救活一名白血患者、因此不會減盡弱其免疫能力和造血能力。骨髓是在生能力很強的組織,對於健康捐獻者,會在10天左右即可補足所捐獻的幹細胞量。 3.健康者在什麼年齡段適合捐獻骨髓? 健康者在18~55歲均可捐獻骨髓。 4.什麼是骨髓移植? 骨髓移植是指把骨髓中的造血幹細胞從一個人體內移植到另一個人體內(一般是通過靜脈輸入)。確切地說,骨髓移植就是造血幹細胞的移植。 5.什麼人需要進行骨髓移植? 人體血液系統及免疫系統的嚴重疾病,如白血病(俗稱血癌)。淋巴瘤、再生障礙性貧血地中海貧血、重病放射病患者,繼續生存的希望就是骨髓移植。我國每年約400萬名各類疾病的患者等待著骨髓移植。 除了對捐獻者的休重、血壓等身體健康程度和獻血條件一樣外,捐獻骨髓者一般要求在18周歲以上、45周歲以下,最好有獻血或捐獻血小板的經歷,一旦抽樣,配對也要求是身體、心理等都較成熟者,以便於救治患者,從嚴格意義上來說,捐髓實際上是捐獻造血幹細胞,一次性捐獻量約20克左右,對身體沒有影響,市民可在義務獻血的同時填寫一張自願捐髓表,這樣醫院將有關資料輸入信息庫後,可隨時約請志願者救死扶傷。 樣捐獻骨髓 1.如何成為志願捐獻者? 如果您年齡在18至55歲之間、身體健康,可撥打中華骨髓庫骨髓捐獻熱線電話:(北京)010-65126600,(上海)021-62478117,或到區縣級以上紅十字會報名,並填寫志願捐獻書及有關表格。 2.捐獻骨髓有哪些步驟? 1)報名後,骨髓庫或紅十字會安排您驗血5毫升,並將化驗的HLA分型結果儲存在中國造血幹細胞捐獻者資料庫中,供患者尋找配對。 2)供者與受者初步配型相同,骨髓庫的工作人員會向您詳細介紹捐獻過程,同時請您接受全身檢查。 3.如何抽取骨髓? 抽取骨髓造血幹細胞有兩種方法:一是醫生在供者的髂骨部位穿刺採集骨髓中的造血幹細胞,術後一兩天內有些疼痛,一周內就可完全恢復。二是用科學的方法有效地動員骨髓和其他部位的造血幹細胞大量釋放到外周血液中去,從供者的手臂靜脈中採集,並通過機器將造血幹細胞分離出來,剩餘的血液回輸到供者體內。 4.捐獻骨髓會不會影響身體健康? 許多人認為捐獻骨髓是抽取脊髓,這完全是一種誤解。骨髓移植需要的是人體內的紅骨髓——造血幹細胞。一個成年人的骨髓重量為3公斤,一名供髓者提供不足10克的骨髓造血幹細胞就能挽救一名白血病患者的生命。骨髓是再生能力很強的組織,一般健康者捐獻造血幹細胞後在十天左右即可補足所捐的幹細胞量。因此,捐獻骨髓不會影響人的身體健康。
5、如何提取細胞內的蛋白並定量
細胞裂解——離心取上清(蛋白在上清中)——測定蛋白濃度(可用試劑盒,BCA法Bradford法等)——如需鑒定蛋白大小和種類可用SDS-PAGE,考馬斯亮藍染色
6、骨髓是從血液里提取的,還是從骨骼里提取的?
骨髓是人體的造血組織,位於身體的許多骨骼內。
成年人的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能製造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細菌、病毒等;某些淋巴細胞能製造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。黃骨髓主要是脂肪組織,當人體貧血時,它可以轉化為紅骨髓。有些葯物如氯黴素及呋喃類,在長期大量使用後,可影響骨髓造血功能,引起再生障礙性貧血.
充填在骨髓腔和骨松質的間隙內,分為紅骨髓和黃骨髓兩類,紅骨髓內涵不同發育階段的紅細胞和某些白細胞及脂肪組織。
骨髓
①藏於骨腔中的髓質。《素問·平人氣象論》:「臟真下於腎,腎藏骨髓之氣也。」
②指病在骨髓,喻疾病部位較深。《靈樞·寒熱病》:「絡脈治皮膚,……經脈治骨髓、五臟。」
什麼是骨髓
骨髓是存在於長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔,扁平骨(如髂骨、肋骨)和不規則骨(胸骨、脊椎骨等)的松質骨間網眼中的一種海綿狀的組織,能產生血細胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。成人的一些骨髓腔中的骨髓含有很多脂肪細胞,呈黃色,且不能產生血細胞,稱為黃骨髓。人出生時,全身骨髓腔內充滿紅骨髓,隨著年齡增長,骨髓中脂肪細胞增多,相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,最後幾乎只有扁平骨松質骨中有紅骨髓。此種變化可能是由於成人不需全部骨髓腔造血,部分骨髓腔造血已足夠補充所需血細胞。當機體嚴重缺血時,部分黃骨髓可轉變為紅骨髓,重新恢復造血的能力。
骨髓有什麼作用
人體內的血液成分處於一種不斷的新陳代謝中,老的細胞被清除,生成新的細胞,骨髓的重要功能就是產生生成各種細胞的幹細胞,這些幹細胞通過分化再生成各種血細胞如紅細胞、白細胞、血小板、淋巴細胞等,簡單的說骨髓的作用就是造血功能。因此,骨髓對於維持機體的生命和免疫力非常重要。
7、直接告訴我骨髓是從哪裡提取的?
我是醫生,我的答案最權威.下面的老弟說的脊椎中端 抽的是腦脊液.是在骨盆兩側,准確的說是髖骨側面用穿刺陣穿刺抽取的
8、關於蛋白質提取
種子中蛋白質的含量不可能這么高的。其成分大部分是澱粉,也就是糖類。
你所說的資料庫中蛋白質提取率是不是說提取效率——也就是說,是種子中的蛋白提取率。比如100g
的種子中有20g的蛋白,但是這20g蛋白不能被全部提取出來,只能提取16g,這樣,提取率為80%。
9、如何提取細胞中的蛋白質?
用細胞裂解試劑盒,應該可以,進口的比較貴,你可以打電話問一下南京凱基國產的盒子能一能用