1、如何取小鼠骨髓細胞
1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠)，放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後，拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨，用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚，用眼科剪小心剪開皮膚，並分離兩下肢的皮膚，往下在腳踝處剪斷，往上在髖關節處剪斷，這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉，分別剪下Femurs（大腿骨）and Tibias（脛骨）,剪去兩端軟骨，露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器，每支吸取1mlHBSS液，並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔，沖洗骨髓腔以獲得骨髓，一般用2-3ml培養基沖洗兩次，可沖出絕大部分細胞。
5、過濾：用2OO目的濾網過濾，將濾網的中央插入到離心管裡面25px處，然後用注射器吸取骨髓液，慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中，去除殘渣。
6、離心：將離心管放置離心機中離心10分鍾（1350r/min）
7、去上清，加入1ml紅細胞裂解液ACK，靜置3分鍾，再加9ml HBSS溶液，進行離心10分鍾，棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次，室溫，1350r/min離心10分鍾。計數活細胞，用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基，然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇，
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻，24孔板鋪板培養，每個孔1ml.
2、小鼠造模後16小時取材，怎麼計劃時間
小鼠造模方法。方法三次造模分別採用：免疫介導法：小鼠經6.0Gy60Coγ射線亞致死量全身
由尾靜脈輸入DBA/2小鼠的胸腺、淋巴結混合細胞懸液1×106個細胞/0.2ml/只。混合方法：小鼠一次全身3.0Gy60Coγ射線照射後，分照射後，
5、6天腹腔注射環磷醯胺50.0mg/kg及氯黴素62.5mg/kg。化學方法：用苯+玉米油，3次/w，別在第4、背部內皮下注射，共注射15次。同時腹腔注射環磷醯胺溶液（50mg/kg），每日1次共7次。結果
免疫介導法造模容後模型小鼠在15d內除1隻小鼠外全部死亡；混合方法造模，模型小鼠骨髓
免疫介導和混合方法造模速度快，對模型小鼠骨髓抑制明顯，與臨床急性AA
活檢提示造模失敗；化學方法造模，造模成功，模型維持時間長。
3、如何促進小鼠骨髓中的中性粒細胞移動到外周
小鼠骨髓中性粒細胞的分離
實驗器材：器械（眼科小直剪2把，小彎鑷3把），無菌塑料滴管，15ml離心管，4mlEP管，培養皿，1ml注射器，70um尼龍篩網，低溫離心機 試劑：PBS（1×，10×），HBSS，percoll，percoll儲存液（percoll:10×PBS=9:1），percoll溶液（45%，81%，62%，55%，50%，分別用1×PBS稀釋Percoll儲存液到相應濃度）Histopaque1119，小鼠中性粒細胞緩沖液（MNB，既含0.1%牛血清白蛋白，1%葡萄糖的HBSS溶液）
材料：8-12周C57小鼠 實驗步驟：
1.拉頸處死小鼠，分離其脛骨和股骨，用紗布將脛骨和股骨擦乾凈，置於75%酒精中浸泡5min
2.用小直剪剪掉骨髓兩端，暴露骨髓腔，用MNB沖洗，每次1ml，脛骨沖洗兩次，股骨沖洗3次。
3.沖洗液用70um尼龍篩網過濾，離心收集細胞，600g 4℃ 10min,低減速。 4.棄上清，用3ml45%percoll溶液重懸細胞
5.Percoll梯度准備：3ml81%，2ml62%，2ml55%，2ml50%percoll溶液 6.小心的將細胞懸液置於percoll梯度上，1600g,30min,10℃,無制動離心。 7.棄掉62%percoll層以上的溶液，收集62%-81%之間的percoll層。
8.10mlMNB洗兩次，600g,10℃,10min,離心。棄上清，用3mlMNB重懸細胞。
9.將細胞懸液小心得置於3mlHistopaque1119上，1600g,10℃,30min,無制動離心，去除紅細胞層。
10.收集1119和MNB之間的細胞層，10mlMNB 洗兩次，600g, 4℃ 10min,低減速離心 11.按需要將細胞用培養基重懸到一定的濃度。
4、如何提取小鼠骨髓細胞?
1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠)，放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後，拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨，用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚，用眼科剪小心剪開皮膚，並分離兩下肢的皮膚，往下在腳踝處剪斷，往上在髖關節處剪斷，這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉，分別剪下Femurs（大腿骨）and Tibias（脛骨）,剪去兩端軟骨，露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器，每支吸取1mlHBSS液，並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔，沖洗骨髓腔以獲得骨髓，一般用2-3ml培養基沖洗兩次，可沖出絕大部分細胞。
5、過濾：用2OO目的濾網過濾，將濾網的中央插入到離心管裡面25px處，然後用注射器吸取骨髓液，慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中，去除殘渣。
6、離心：將離心管放置離心機中離心10分鍾（1350r/min）
7、去上清，加入1ml紅細胞裂解液ACK，靜置3分鍾，再加9ml HBSS溶液，進行離心10分鍾，棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次，室溫，1350r/min離心10分鍾。計數活細胞，用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基，然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇，
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻，24孔板鋪板培養，每個孔1ml.
5、醫考問答提：骨髓標本採集如何穿刺？
骨髓標本大部分採用穿刺法吸取，骨髓穿刺部位選擇一般要從以下幾個方面考慮：
①骨髓腔中紅骨髓豐富；
②穿刺部位應淺表、易定位；
③應避開重要臟器. .
臨床上常用的穿刺部位包括胸骨、棘突、髂骨、脛骨等處 髂骨後上棘此處骨皮質薄，骨髓腔大，進針容易，骨髓液豐富，被血液稀釋的可能性小，故為臨床上首選的穿刺部位
6、如圖是制備分泌抗X抗體的過程，根據圖解回答問題：（1）給小鼠注射抗原的目的是______．（2）在單克隆抗
（1）首先應給小鼠注射抗原，①過程從小鼠的脾臟中取來得已免疫的B細胞，該細胞能夠產生抗體．
（2）細胞來源：B淋巴細胞能產生特異性抗體，在體外不能無限繁殖；骨髓瘤源細胞不產生專一性抗體，體外能無限繁殖；雜交瘤細胞既能無限增殖，又能產生特定抗體的特性．
（3）由圖中可看出，單克隆抗體制備過程運用動物細胞融合和動物細胞培養的技術手段，前者常用的誘導劑與植物原生質體融合不同的是滅活病毒．
（4）動物細胞培養液的配方通常為合成培百養基，含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素等，還應該加入動物血清或者血漿．
（5）在動物細胞度融合過程中，需要將所選取的組織細胞分散開，可用胰蛋白酶處理離體組織細胞使之分散．
（5）圖中有兩次篩選過程：步驟④篩選得到雜交瘤細胞（去掉未雜交的細胞以及自身融合的細胞）；步驟⑤⑥篩選出能夠產問生特異性抗體的細胞群．
故答案為：
（1）產生相應的（效應）B細胞
（2）體外無限增殖答 分泌特定抗體
（3）動物細胞融合 動物細胞培養 滅活病毒
（4）動物血清
（5）胰蛋白酶
（6）雜交瘤細胞 能產生特定抗體的細胞
7、小鼠酒精造模後多少小時後檢測血清中酒精含量
小鼠造模方法。方法三次造模分別採用：免疫百介導法：小鼠經6.0Gy60Coγ射線亞致死量全身
由尾靜脈輸入DBA/2小鼠的胸腺、淋巴結混合細胞懸液1×106個細胞/0.2ml/只。混合方法：度小鼠一次全身3.0Gy60Coγ射線照射後，分照射後，
5、6天腹腔注射環磷醯知胺50.0mg/kg及氯黴素62.5mg/kg。化學方法：用苯+玉米油，3次/w，別在第4、背部皮下注射，共注射15次。同時腹腔注射環磷醯胺溶液（50mg/kg），每日1次共7次。結果
免疫介導法造道模後模型小鼠專在15d內除1隻小鼠外全部死亡；混合方法造模，模型小鼠骨髓
免疫介導和混合方法造模速度快，對模型小鼠骨髓抑制明顯，與臨床急性AA
活檢提示造模失屬敗；化學方法造模，造模成功，模型維持時間長。
8、骨內注射技術的發展歷史
盡管在成年急診個體中通過骨髓腔內（intraosseous，IO）途徑給葯或補液在現代急診醫療設備系統中仍是一種新的技術，但是IO輸注卻有過一段長期的豐富的歷史。未經證實的觀點認為IO技術最早起源於十九世紀晚期，但是第一次科學地研究並記錄IO技術卻是在1922年，當時哈佛大學的Drinker博士在研究胸骨板循環時發現並提出骨內腔隙充滿一種非萎縮性靜脈，他通過實驗進一步證實灌注到骨髓腔中的物質能夠很快被中樞循環系統所吸收。在隨後的二十多年裡關於IO技術的研究得以突飛猛進的發展。
1940年，費城的Tocantins醫生和他的同事O』Neill通過臨床實驗一同證實了長骨和胸骨的骨髓腔也可以被用來作為血管輸注的通路，他們還證實了注射到兔脛骨腔內的紅色染料在注射後10秒鍾就出現在心臟中。此外，Tocantins還發表了一些研究IO輸注的案例報告，開發了一些用於臨床IO輸注的實用技術並設計了一些IO輸注專用的特殊針頭。1942年Papper博士證實了通過IO或靜脈通路給予輸液基本具有完全相似的循環時間，1944年，英國內科醫生Hamilton Bailey博士評論在戰時的倫敦使用IO輸注時提到IO針頭具有意外刺穿胸骨從而損傷心臟的潛在風險，為此Bailey設計了一種特殊的IO套管針用以保護心臟。
在二十世紀四五十年代，IO輸注技術已成為一種用於成年或兒童給予葯物或輸血的流行方案，這種技術也因此經常出現在醫學期刊中，這段時期主要使用的是手動穿刺針用於進行IO輸注操作。在二次世界大戰期間，IO輸注技術被戰地醫療救治機構廣泛使用，並挽救了4000餘名身受重傷的士兵性命，而在沒有使用IO輸注技術之前，許多失血性休克的士兵因不能建立靜脈輸液循環而導致死亡，因此，美國軍方認為IO輸注技術是一種救治嚴重受傷士兵的標准措施。遺憾的是，二戰以後至1968年由David Boyd博士等在芝加哥創建第一家EMS機構期間，IO輸注技術的成功經驗並未能從部隊轉移到地方。究其原因，主要是因為靜脈輸液用塑料導管的迅速發展和普及，以及EMS是由地方的創傷中心發展而來而不是誕生於軍隊之中。因此，很多創傷外科醫生並不了解IO技術，只要那些醫護人員能夠開展靜脈輸注他們就很滿足了。直至1984年，James Orlowski博士在參觀霍亂流行的印度時發現，IO輸注技術被用來輸液和給葯並挽救了許多可能死於霍亂的患者的生命，在他回國後發表了一篇名為「我的靜脈路線王國」的社論，其中他倡導在小兒科中使用IO技術。這篇社論重新喚起了對IO輸注技術的關注和興趣，並很快被兒科治療機構採納並被列入PALS（Pediatric Advanced Life Support兒童生命支持）准則之中，1986年，美國心臟協會（AHA）正式批准將IO輸注技術列入兒科的急救復甦程序當中。
在過去的三十多年中，開展了許多關於在不同動物模型中通過IO輸注方式給予葯物並進行葯代動力學的研究。其中，在1990年在《新英格蘭醫學雜志》上發表的一篇關於IO輸注的文獻綜述指出，任何可以利用靜脈進行給葯的操作也都可以通過IO途徑進行給葯，並且能夠被中樞循環系統快速吸收利用。2003年ACLS（Advanced Cardiac Life Support心臟生命支持）准則中推薦IO作為成年個體有價值的選擇方案，2005年美國FDA批准了三種用於成人IO輸液的新設備，分別為F.A.S.T.1；B.I.G.和EZ-IO。伴隨著IO技術的復興和流行，理應進一步深入觀察IO技術在成人個體輸注中的應用，以及它是如何改變醫護人員、護士和醫生在靜脈輸液困難情況下解決問題方案的。
9、骨髓穿刺怎麼個做法
【操作方法】
1.選好部位：選擇穿刺部位骼前上棘、髂後上棘、胸骨、腰椎棘突穿刺點。
2.消毒麻醉：常規消毒皮膚，戴無菌手套，鋪無菌孔巾，用2%利多卡因行局部皮膚、皮下及骨膜麻醉。
3.進行穿刺：穿刺抽吸將骨髓穿刺針固定器固定在一定長度，右手持針向骨面垂直刺，當針尖接觸骨質後則將穿刺針左右旋轉，緩緩鑽刺骨質，穿刺針進入骨髓腔後，拔出針芯，接上乾燥的10ml或20ml注射器，用適當力量抽吸骨髓液0.1～0.2ml滴於載玻片上，如需作骨髓液細菌檢查，再抽取1～2ml。
4.拔針抽吸完畢，重新插入針芯，用無菌紗布置於針孔處，拔出穿刺針，按壓1～2分鍾後，膠布固定紗布。
【護理要點】
1.術前注意：(1)化驗及葯物過敏試驗：查出血及凝血時間。若用普魯卡因作局部麻醉，病人需做皮試。(2)體位準備：根據穿刺部位協助病人採取適宜的體位，若於胸骨、骼前上棘作穿刺者取仰卧位，前者還需用枕頭墊於背後，以使胸部稍突出;若於髂後上棘穿刺者取側卧位或俯卧位;棘突穿刺點則取坐位，盡量彎腰，頭俯屈於胸前使棘突暴露。
2.術後注意：(1)觀察：注意觀察穿刺處有無出血，如果有滲血，立即換無菌紗塊，壓迫傷口直至無滲血為止。(2)保護穿刺處：指導病人48～72小時內不要弄濕穿刺處，多卧床休息，避免劇烈活動，防止傷口感染。
10、為什麼文獻中小鼠幹細胞移植都採用脾內注射的方法
你好，本來早期霍奇金淋巴瘤是一個能夠臨床治百愈的疾病，是能夠較長時間無病生存的，就以上看，有多處器官轉移了，應該屬於晚期了，效果不能很肯定，危險當然有，由於骨髓度中轉移，所以會造成血象極不穩定，所以要注意監測，幹細胞移植可回以考慮的。就天津來說，天津腫瘤醫院是比較好的，能夠得到恰當的治療，一般省會答腫瘤專科醫院的治療時比較規范的、謝謝。