1、同一隻小鼠的骨髓細胞可以混在一起嗎?
同一隻小鼠的骨髓細胞一般來說是可以混在一起的也就是通過混在一起把他們的一些物質提取出來,不過一般研究的是不同生物。
2、如何從小鼠骨髓中分離和培養DC
拉頸處死小鼠,無菌剝離股骨和脛骨,用Hank』S沖出骨髓細胞,PBS洗
滌1次,用0.83%Tris—NH4CL裂解紅細胞,RPMI1640培養液洗滌2次,調整細胞濃度為1×106個/mL,
並加入rmGM—CSF(1000 U/mL)和rmlL-4(500 U/mL),接種於24孔培養板,置於37~C,5%CO2孵箱中
培養.第3天輕輕搖動培養板,吸走大部分懸浮細胞,加人等量的培養液,並補足細胞因子.隔日半量換液
1次,第7天收集懸浮或稍微貼壁的細胞.
3、如何提取小鼠骨髓細胞?
1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後,拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨,用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚,用眼科剪小心剪開皮膚,並分離兩下肢的皮膚,往下在腳踝處剪斷,往上在髖關節處剪斷,這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉,分別剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(脛骨),剪去兩端軟骨,露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔,沖洗骨髓腔以獲得骨髓,一般用2-3ml培養基沖洗兩次,可沖出絕大部分細胞。
5、過濾:用2OO目的濾網過濾,將濾網的中央插入到離心管裡面25px處,然後用注射器吸取骨髓液,慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中,去除殘渣。
6、離心:將離心管放置離心機中離心10分鍾(1350r/min)
7、去上清,加入1ml紅細胞裂解液ACK,靜置3分鍾,再加9ml HBSS溶液,進行離心10分鍾,棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次,室溫,1350r/min離心10分鍾。計數活細胞,用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基,然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇,
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻,24孔板鋪板培養,每個孔1ml.
4、請問一隻小鼠有多少骨髓單個核細胞?
單核細胞(monocytes)是體積最大的白細胞.其細胞核常偏位,呈多形性,如卵圓形、腎形、馬蹄形、不規則形等,常有折疊感;染色質呈疏鬆網狀,著色較淺.胞質較多,嗜鹼性,但因含大量細小的嗜天青顆粒而染成灰藍色,顆粒含過氧化物酶.血塗片,Giemsa染色 .
單個核細胞是指只有一個細胞核的細胞.一般醫學檢驗書上說的是「外周血中單個核的白細胞」包括「淋巴細胞和單核細胞」.外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear
cell,PBMC)即外周血中具有單個核的細胞,包括淋巴細胞和單核細胞.體外檢測淋巴細胞首先要分離外周血單個核細胞,目前主要的分離方法是
Ficoll-hypaque(葡聚糖-泛影葡胺)密度梯度離心法,因為血液中各有形成分的比重存在差異,因此得以分離.紅細胞和
粒細胞密度大於分層液,同時因紅細胞遇到Ficoll而凝集成串錢狀而沉積於管底.血小板則因密度小而懸浮於血漿中,唯有與分層液密度相當的單個核細胞密
集在血漿層和分層液的界面中,呈白膜狀,吸取該層細胞遞經洗滌高心重懸.本法分離單個核細胞純度可達95%,淋巴細胞約佔90%~95%,細胞獲得率可達
80%以上,其高低與室溫有關,超過25℃時會影響細胞獲得率.
5、如何取小鼠骨髓細胞
1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後,拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨,用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚,用眼科剪小心剪開皮膚,並分離兩下肢的皮膚,往下在腳踝處剪斷,往上在髖關節處剪斷,這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉,分別剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(脛骨),剪去兩端軟骨,露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔,沖洗骨髓腔以獲得骨髓,一般用2-3ml培養基沖洗兩次,可沖出絕大部分細胞。
5、過濾:用2OO目的濾網過濾,將濾網的中央插入到離心管裡面25px處,然後用注射器吸取骨髓液,慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中,去除殘渣。
6、離心:將離心管放置離心機中離心10分鍾(1350r/min)
7、去上清,加入1ml紅細胞裂解液ACK,靜置3分鍾,再加9ml HBSS溶液,進行離心10分鍾,棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次,室溫,1350r/min離心10分鍾。計數活細胞,用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基,然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇,
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻,24孔板鋪板培養,每個孔1ml.
6、為什麼實驗室取小白鼠股骨骨髓時沒見小白鼠出血?
請及時注射狂犬疫苗,
並且與醫生溝通注射出血熱疫苗,
沒關系!
~放鬆心態!