骨髓瑞氏染色注意事項

1、瑞氏染色步驟？

瑞氏染色法：

為了觀察細胞內部結構，識別各種細胞及異常變化，血塗片必須進行染色。
血塗片的各種染色方法大多是羅氏染色法衍變而來。目前常用瑞氏染色法。

【目的】掌握血塗片的染色方法。

【原理】
把已製成的血細胞分布均勻的薄膜塗片，
用復合染料染色。
其著色的原理包括物理
吸附及化學親和作用。
不同種類的細胞及同一細胞的不同成分及不結構，
對酸性及鹼性染料
的結合能力不同，因而使不同種類的細胞染成不同的顏色，呈現各自的特點。

【器材】我們今天的器材是：載玻片、推片、吸耳球、顯微鏡。

【試劑】

1
瑞氏染料

由酸性染料伊紅(eosin,E)和鹼性染料亞甲藍(methylene
blue,M|+)組成的復合染料。

★亞甲藍(又名美藍)為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結構，通常為氯鹽，即氯化美藍。美藍容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料(即天青)。

★伊紅通常為鈉鹽。

★將適量的伊紅，美藍溶解在甲醇中，即為瑞氏染料。

甲醇的作用：一是溶解美藍和伊紅ME，使其解離為M+和E+，後兩者可以選擇性地吸附於血細胞內的不同成分而使其著色；
二是具有很強的脫水作用，可固定細胞的形態，當細胞發生凝固時，蛋白質被沉澱為顆粒狀或者網狀，增加細胞結構的表面積，提高對染料的吸附作用，增強染色效果。

2
瑞氏染液的配製：取瑞氏染料1.0g、甲醇600ml、甘油。

操作如下：將全部染料放入清潔乾燥的乳缽中，先加少量甲醇慢慢地研
磨(至少半小時)，以使染料充分溶解，再加一些甲醇混勻，然後將溶解的部分倒入潔凈的棕色瓶內，乳缽內剩餘的未溶解的染料，再加入少許甲醇細研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完為止。再加15ml甘油，密閉保存。這只就是我們配製的I液。

說明：新鮮配製的染液偏鹼，染色效果較差，經在室溫下貯存一定時間，美藍逐漸轉變為天青B後方可使用，這一過程稱染料成熟。放置時間愈久，天青愈多，染色效果也就越好。但必須蓋嚴瓶口，以免甲醇揮發或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油3ml，防止甲醇揮發或氧化，同時也可使血細胞染色較清晰，但我們所用的甲醇必須純凈。

II液：又稱磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8)，包含磷酸二氫鉀0.3g，磷酸氫二鈉0.2g、蒸餾水加至1000ml。
配好後用磷酸鹽溶液校正PH，如無緩沖液可用新鮮蒸餾水代替。
也可用蒸餾水代替。

3
染色：①血塗片自然乾燥後，用蠟筆在兩端畫線，以防染色時染液外溢。隨後將玻片平置
於染色架上，滴加染液3-5滴，使其蓋滿血塗片，大約1分鍾後，滴加等量或稍多的II液，
用吸耳球輕輕混勻。
②沖洗：染色5-10分鍾用流水染液，待干。

③結果觀察，
將乾燥後的血塗片置顯微鏡下觀察。
先用低倍鏡觀察血塗片，
再用油鏡。

2、骨髓片、血塗片主要依據瑞氏染色觀察細胞，為什麼還需要其他化學染色？比如鐵染色、過氧化物酶染色等。

骨髓片、血塗片主要依據瑞氏染色觀察細胞，為什麼還需要其他化學染色？比如鐵染色、過氧化物酶染色

3、瑞氏染色的步驟是什麼?

操作步驟：

1.滴加瑞氏吉姆薩A液(約0.5ml-0.8ml)塗片上，並讓染液覆蓋整個標本染色1min；

2. 再將瑞氏吉姆薩B液加於A液上面（滴加量為A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微風使液面產生漣漪狀，使兩液充分混合，染色3-10min。（染血片時間可略短，染骨髓片時間應視細胞量多少而異）

3.水洗（沖洗時不能先倒掉染液，應以流水沖去，以防有沉渣沉澱在標本上），乾燥、鏡檢。

注意事項：

1. 染色時間須視何種標本，塗片厚度，有核細胞多少，何種細胞及室溫等而定；通常染血液塗片時滴加B液後染2-4分鍾，染骨髓片則應不少於8分鍾；氣溫較低時，可適當延長染色時間。染色結果如出現嗜酸性粒細胞變鹼，則考慮是否染色時間太長所致。

2.做骨髓塗片時，因為骨髓纖維蛋白含量較高，凝固較快，所以塗片過程要快。骨髓不可用草酸鹽抗凝，否則會使血細胞核變形，核染色質緻密，胞漿空泡形成，出現草酸鹽結晶。

3.染液量需充足，勿使染液蒸發乾燥，以防染料沉著於塗片上。

4.做細胞染色時，當天氣寒冷或濕度較大時，應於37℃溫箱中保溫促干，以免細胞變形縮小或在染色時脫片。

5.染料放置時間越長，染色效果越好。

6. 本試劑應由專業人員使用。

拓展資料

Wrfeht和Giemsa都於1902年報告了各自的新的血液學染色劑，其主要特點是在制備多色性亞甲藍（主要指天青B）方面做了改進，使血細胞和瘧原蟲著色較好，操作簡便。

上述染色法均是含伊紅和亞甲基藍衍生物的復合染料。在臨床檢驗工作中，瑞氏染色法常用於血液、其他體液、分泌物和排泄物塗片中各種細胞的染色，有利於在顯微鏡下觀察細胞形態及對細胞進行分類檢查。

【染色原理】

瑞氏染色分兩相進行，第一相是酸性染料伊紅與細胞中的鹼性物質如血紅蛋白、嗜酸性顆粒等結合；鹼性染料天青B與細胞中的酸性物質如核染色質（chro－matin）、特異中性顆粒、血小板及富含核蛋白的胞質結合。第二相是天青B和伊紅在適宜條件下形成紫色的天青B一伊紅復合物（azure B－eosin complex），這種復合物是形成Romanowsky－Giemsa效應的基礎。

Romanowsky－Giemsa效應包括：①白細胞核染色質染成紫色，瘧原蟲的染色質染成紅色；②中性粒細胞的顆粒及血小板顆粒區染成紫色；③產生本效應必須有兩種染料參與，一種是天青B，另一種是伊紅。

Wittekind（1985）指出，天青B與DNA分子中的磷酸基結合，而伊紅既與DNA分子中的陽離子部位結合，又與天青B結合，與天青B的結合力來源於電子供一受體的電子轉移力，天青B的甲氨基（－NHCHs）與伊紅分子中的叛基（－COOH）間形成氫鍵。因此，天青B是噻嗪類染料中能與伊紅形成復合物的最佳選擇，因為擁有四個甲基側鏈的亞甲藍不能以氫鍵與伊紅結合。

甲醇除作為染料的溶劑，能將瑞氏染料解離成帶正電荷的天青B和帶負電荷伊紅外，因其具有脫水力，還可將細胞固定為一定形態，並使蛋白沉澱為顆粒狀、網狀結構，增加細胞與染料的接觸表面，增強染色效果。

細胞中的各種有機物質（特別是蛋白質）、染料等對環境的州值非常敏感。如環境偏酸，氫離子增多，降低對鹼性染料的親和力；增強伊紅著色，出現異常紅染；相反，則可出現異常藍染。最佳環境應維持在PH值6 4～6、8.因此，必須使用緩沖溶液。

參考資料：

網路_瑞氏染色

瑞氏染色原理及方法_醫學教育網

4、如何判斷瑞氏染色結果的好壞？

陽性菌呈藍紫色，陰性菌呈紅色。染色後除可以看到細菌形態，細分細菌種類。

染色陽性菌包括：致病菌如金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌、碳疽桿菌等。

陰性菌包括：百日咳桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌、淋病雙球菌等

5、血細胞染色常用的瑞氏染色法的原理？主要講一下瑞氏染液。

瑞氏染色法：用瑞氏染色液對細菌進行染色以便進行顯微鏡檢查的染色法

原理
甲醇具強大脫水力，可將細胞固定在一定形態及增加細胞結構表面積，提高細胞對染料吸收作用
同時吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速反應

6、求簡述瑞氏染色法的原理，

瑞氏染色法：用瑞氏染色液對細菌進行染色以便進行顯微鏡檢查的染色法
原理
甲醇具強大脫水力，可將細胞固定在一定形態及增加細胞結構表面積，提高細胞對染料吸收作用
同時吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速反應

7、瑞氏試劑染到衣服怎麼洗

您好！衣服沾到瑞氏試劑，應盡快清洗，污漬長時間的停留，會滲入到衣物纖維，增大衣服的洗凈難度，可採用以下方法清洗：
1、衣服乾的時候，用手洗專用洗衣液原液塗抹在污漬處，完全覆蓋污漬，靜置5分鍾後（可輕輕搓洗），加入洗衣液常規洗滌；
2、如經過上述方法污漬仍無法去除，則
（1）純白色的棉、麻、滌綸材質的衣物：每半盆水（約2升）加入白色衣物色漬凈（600g規格）1瓶蓋（40克），攪勻，放入衣物浸泡30min，漂洗干凈。
*視需要可適當延長浸泡時間，若2小時後色漬未去除，將衣物取出，往盆中添加白色衣物色漬凈（每半盆水加1瓶蓋），攪勻，放入衣物繼續浸泡，累計浸泡時長不超過6小時。
（2）彩色或其他材質的白色衣物：將衣物放入盆中，污漬部位貼盆底，用彩色衣物色漬凈（600g規格）瓶蓋量取1/4瓶蓋（10克）彩色衣物色漬凈和1/4瓶蓋（10克）衣領凈，倒在污漬處，用衣物其他無污漬部位蓋住污漬，防止風干，靜置2小時，漂洗干凈。若2小時後仍有污漬未去除，可延長靜置時間至過夜。
注意事項：
1、白色衣物色漬凈適用於白色棉、麻、滌綸、滌棉、棉麻面料，請勿用於有顏色的衣服（包括白底條紋、白底花格、白底印花），勿用於絲毛氨綸尼龍及其他不可氯漂衣物，勿直接使用原液。
2、彩色衣物色漬凈不適用於易褪色衣物、乾洗衣物，使用時避免接觸衣物上的金屬紐扣、拉鏈、金屬飾物等，避免陽光直射。

8、瑞氏染色血塗片的步驟

(1)鉛筆作標記，將血塗片平放在染色架copy上，蠟筆劃線可防液體外溢。
(2)血塗片自然乾燥後，滴瑞氏染百液（A液）數滴覆蓋血片，染約1min。
(3)滴加稍多體積的緩沖液度，用吸耳球將其與染液吹勻，染約5分鍾。
(4)慢慢搖動知玻片，然後用細的自來水流從玻片的一側沖去染液（不要先倒去染液再沖水），待血片自道然乾燥後(或用濾紙吸干)，即可鏡檢。

9、正常紅細胞的瑞氏染色？

瑞氏染色是染血細胞的，而革蘭氏和美蘭染色主要是染細菌的。
1.
瑞氏染料中有美藍和伊紅兩種成分，前者為鹼性，後者為酸性，它們與細胞內的各種物質具有不同的親和力，使其顯現出不同的色調。血細胞核由去氧核糖核酸和強鹼性的組蛋白、精蛋白等形成核蛋白。這種強鹼性的物質與瑞氏染料中的酸性染料伊紅有親和力，所以染成紅色；核蛋白中還有少量的
弱酸性蛋白，它們又與染液中的鹼性染料美藍起作用而染成藍色，但含量太少，藍色反應極弱
，故核染色呈現紫紅色。較幼稚的細胞之胞漿和細胞核之核仁中含有酸性物質，它們與染料中的鹼性染料美藍有親和力，故染成藍色。
2.
革蘭氏染色通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙，，因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差，在遇脫色劑後，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而鬆散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出，因此通過乙醇脫色後仍呈無色，再經沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
染色的差異主要是由於陰性與陽性細菌細胞壁的差異所引起的。
3.
美蘭又叫亞甲基藍。染色原理：細菌經過進行有氧呼吸產生大量的二氧化碳,使添加亞甲基藍的培養液變弱酸性,亞甲基藍由氧化態的藍色變成還原態的無色,所以可以檢測細菌的數目多少。細菌越多，變無色的區域越多。