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小鼠骨髓細胞微核標本

發布時間:2021-05-13 15:28:11

1、制備小鼠骨髓染色體標本過程中有哪幾個主要步驟影響製片結果

在制備小鼠骨髓細胞染色體標本過程中以下幾個步驟需要注意:

提前3-4小時候注射秋水仙素,時間太長或者太短都會影響染色體中期的數目和形態。

在低滲過程中時間和吹打都很重要,低滲過度染色體膨脹,染色後肥肥的,低滲時間不過染色後染色體顏色很深看不出條帶。

滴片,如果是教學的實驗,要求玻片是冰的,而且要傾斜,滴的高度一般在25-30CM,滴完要過酒精燈,讓固定液蒸發。滴的數量不要太多否則會重疊.如果是醫院里的染色體製片有專門的滴片機。

小鼠骨髓細胞染色體標本製作:

原理:

由於小鼠四肢骨內骨髓細胞中的造血幹細胞是生成各種血細胞和原始細胞,具有高度的分裂能力,本實驗採用這一材料,通過前處理,低滲,固定,製片,染色等步驟製得染色體標本,可觀察到許多處於分裂中期的染色體,可以進行染色體組型分析;

試劑、試劑盒:秋水仙素、姬姆薩染液、固定液、低滲液、生理鹽水;

儀器、耗材:天平、離心機、恆溫培養箱、顯微鏡;

實驗步驟

一、材料和方法

1.  材料:小白鼠。

2.  設備:天平,離心機,恆溫培養箱,顯微鏡。

3.  葯品:秋水仙素,姬姆薩染液,固定液,低滲液,生理鹽水。

二、步驟

秋水仙素處理--取骨髓--低滲處理--固定--離心--再固定--再離心--滴片--染色--鏡檢--封片。

2、小鼠骨髓細胞染色體標本制備和觀察實驗報告

首先要提前2小時向小鼠注射秋水仙素,處死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理鹽水,離心取細胞(離心管底部),再經低滲處理,染色,滴冰片,鏡檢。很麻煩,具體的你可以去圖書館查閱相關資料(動物染色體制備)。

3、如何提取小鼠骨髓細胞?

1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後,拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨,用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚,用眼科剪小心剪開皮膚,並分離兩下肢的皮膚,往下在腳踝處剪斷,往上在髖關節處剪斷,這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉,分別剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(脛骨),剪去兩端軟骨,露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔,沖洗骨髓腔以獲得骨髓,一般用2-3ml培養基沖洗兩次,可沖出絕大部分細胞。
5、過濾:用2OO目的濾網過濾,將濾網的中央插入到離心管裡面25px處,然後用注射器吸取骨髓液,慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中,去除殘渣。
6、離心:將離心管放置離心機中離心10分鍾(1350r/min)
7、去上清,加入1ml紅細胞裂解液ACK,靜置3分鍾,再加9ml HBSS溶液,進行離心10分鍾,棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次,室溫,1350r/min離心10分鍾。計數活細胞,用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基,然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇,
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻,24孔板鋪板培養,每個孔1ml.

4、小鼠骨髓細胞的染色體標本一般制備成什麼片

小鼠骨髓細胞的染色體標本一般制備成什麼片
首先要提前2小時向小鼠注射秋水仙素,處死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理鹽水,離心取細胞(離心管底部),再經低滲處理,染色,滴冰片,鏡檢.很麻煩,具體的你可以去圖書館查閱相關資料(動物染色體制備).

5、小鼠骨髓細胞微核實驗,Giemsa染色師,微核的色質與核質一樣。都呈現什麼顏色。A淺黃色B深藍色C粉紅色D黃

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