瑞氏染色觀察骨髓細胞

1、瑞氏染色血塗片的步驟

(1)鉛筆作標記，將血塗片平放在染色架copy上，蠟筆劃線可防液體外溢。
(2)血塗片自然乾燥後，滴瑞氏染百液（A液）數滴覆蓋血片，染約1min。
(3)滴加稍多體積的緩沖液度，用吸耳球將其與染液吹勻，染約5分鍾。
(4)慢慢搖動知玻片，然後用細的自來水流從玻片的一側沖去染液（不要先倒去染液再沖水），待血片自道然乾燥後(或用濾紙吸干)，即可鏡檢。

2、瑞氏染色步驟？

瑞氏染色法：

為了觀察細胞內部結構，識別各種細胞及異常變化，血塗片必須進行染色。
血塗片的各種染色方法大多是羅氏染色法衍變而來。目前常用瑞氏染色法。

【目的】掌握血塗片的染色方法。

【原理】
把已製成的血細胞分布均勻的薄膜塗片，
用復合染料染色。
其著色的原理包括物理
吸附及化學親和作用。
不同種類的細胞及同一細胞的不同成分及不結構，
對酸性及鹼性染料
的結合能力不同，因而使不同種類的細胞染成不同的顏色，呈現各自的特點。

【器材】我們今天的器材是：載玻片、推片、吸耳球、顯微鏡。

【試劑】

1
瑞氏染料

由酸性染料伊紅(eosin,E)和鹼性染料亞甲藍(methylene
blue,M|+)組成的復合染料。

★亞甲藍(又名美藍)為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結構，通常為氯鹽，即氯化美藍。美藍容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料(即天青)。

★伊紅通常為鈉鹽。

★將適量的伊紅，美藍溶解在甲醇中，即為瑞氏染料。

甲醇的作用：一是溶解美藍和伊紅ME，使其解離為M+和E+，後兩者可以選擇性地吸附於血細胞內的不同成分而使其著色；
二是具有很強的脫水作用，可固定細胞的形態，當細胞發生凝固時，蛋白質被沉澱為顆粒狀或者網狀，增加細胞結構的表面積，提高對染料的吸附作用，增強染色效果。

2
瑞氏染液的配製：取瑞氏染料1.0g、甲醇600ml、甘油。

操作如下：將全部染料放入清潔乾燥的乳缽中，先加少量甲醇慢慢地研
磨(至少半小時)，以使染料充分溶解，再加一些甲醇混勻，然後將溶解的部分倒入潔凈的棕色瓶內，乳缽內剩餘的未溶解的染料，再加入少許甲醇細研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完為止。再加15ml甘油，密閉保存。這只就是我們配製的I液。

說明：新鮮配製的染液偏鹼，染色效果較差，經在室溫下貯存一定時間，美藍逐漸轉變為天青B後方可使用，這一過程稱染料成熟。放置時間愈久，天青愈多，染色效果也就越好。但必須蓋嚴瓶口，以免甲醇揮發或氧化成甲酸。染液中也可加中性甘油3ml，防止甲醇揮發或氧化，同時也可使血細胞染色較清晰，但我們所用的甲醇必須純凈。

II液：又稱磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8)，包含磷酸二氫鉀0.3g，磷酸氫二鈉0.2g、蒸餾水加至1000ml。
配好後用磷酸鹽溶液校正PH，如無緩沖液可用新鮮蒸餾水代替。
也可用蒸餾水代替。

3
染色：①血塗片自然乾燥後，用蠟筆在兩端畫線，以防染色時染液外溢。隨後將玻片平置
於染色架上，滴加染液3-5滴，使其蓋滿血塗片，大約1分鍾後，滴加等量或稍多的II液，
用吸耳球輕輕混勻。
②沖洗：染色5-10分鍾用流水染液，待干。

③結果觀察，
將乾燥後的血塗片置顯微鏡下觀察。
先用低倍鏡觀察血塗片，
再用油鏡。

3、骨髓細胞染色常用什麼方法，各是用於何種檢測。

骨髓細胞內外鐵染色,是進行貧血分類的常用組織化學染色方法,一般均採用普魯士蘭染色法,該法雖操作簡便,但若掌握不好,常使玻璃上沉積大量污染鐵,無法判定結果,我們曾查閱多種材料,對該項試驗的一些細節問題均無詳細介紹。最近我們參照各家材料,經過多次試驗從玻片處理試劑配製、試驗的時間、溫度、最後漂洗的手法復染時間的控制等步驟上,對細胞內外鐵染色的方法進行探討,摸索出了一套較滿意的染色方法,現介紹如下。

【作者單位】： 黑龍江省寶泉嶺農場醫院
【關鍵詞】： 骨髓細胞 鐵染色 染色方法 組織化學 試劑配製 玻片處理 氰化鉀 貧血分類 普魯士蘭 染色法
【分類號】：R361
【正文快照】：
骨髓細胞內外鐵染色,是進行貧血分類的常用組織化學染色方法。一般均採用普魯士蘭染色法,該法雖操作簡便,但若掌握不好,常使玻璃上沉積大量污染鐵,無法判定結果,我們曾查閱多種材料,對該項試驗的一些細節同題均無詳細介紹。最近我們參照各家材料,經過多次試驗從玻片處理試劑

4、骨髓細胞檢查報告中的化學染色中的POX陽性13%是指什麼?

POX是細胞的過氧化物酶染色,染色後,在顯微鏡下觀察,細胞中有藍黑色顆粒的為陽性,POX陽性13%就是指呈陽性的細胞占總細胞數的13%

5、為什麼顯微鏡觀察血細胞是要染色

染色的目的是使細胞的主要結構,如細胞質、細胞核、細胞器等染上不同的顏色,便於顯微鏡下觀察.
血細胞又稱「血球」,主要含下列三個部分：紅細胞、白細胞、血小板.
紅細胞呈雙凹圓盤狀,中央較薄,周緣較厚,故在血塗片標本中呈中央染色較淺、周緣較深,無細胞核.白細胞顯色各異,如中性粒細胞的胞質染成粉紅色,含有許多細小的淡紫色及淡紅色顆粒；嗜酸性粒細胞染成桔紅色；嗜鹼性粒細胞著色較淺.血小板是紅骨髓巨核細胞細胞質的脫落物,本身不是細胞.在血塗片中,血小板常呈多角形,聚集成群.血小板中央部分有著藍紫色的顆粒,稱顆粒區（granulomere）；周邊部呈均質淺藍色,稱透明區（hyalomere）.
【瑞氏染色結果】在正常情況下,血膜外觀染成淡紫紅色.顯微鏡下,紅細胞呈粉紅色,在厚薄均勻處,略有碟狀感；白細胞漿中顆粒清楚,並顯示出各種細胞特有的色彩.細胞核染紫紅色,核染色質結構清楚.
染色偏酸,則紅細胞和嗜酸性粒細胞顆粒偏紅,白細胞核呈淡藍色或不著色.染色偏鹼,則所有細胞呈灰藍色,顆粒深暗.嗜酸性顆粒可染成暗褐色,甚至紫黑或藍色.中性顆粒偏粗、偏鹼,染成紫黑色,血膜厚的部位呈綠色.

6、瑞氏染色的步驟是什麼?

操作步驟：

1.滴加瑞氏吉姆薩A液(約0.5ml-0.8ml)塗片上，並讓染液覆蓋整個標本染色1min；

2. 再將瑞氏吉姆薩B液加於A液上面（滴加量為A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微風使液面產生漣漪狀，使兩液充分混合，染色3-10min。（染血片時間可略短，染骨髓片時間應視細胞量多少而異）

3.水洗（沖洗時不能先倒掉染液，應以流水沖去，以防有沉渣沉澱在標本上），乾燥、鏡檢。

注意事項：

1. 染色時間須視何種標本，塗片厚度，有核細胞多少，何種細胞及室溫等而定；通常染血液塗片時滴加B液後染2-4分鍾，染骨髓片則應不少於8分鍾；氣溫較低時，可適當延長染色時間。染色結果如出現嗜酸性粒細胞變鹼，則考慮是否染色時間太長所致。

2.做骨髓塗片時，因為骨髓纖維蛋白含量較高，凝固較快，所以塗片過程要快。骨髓不可用草酸鹽抗凝，否則會使血細胞核變形，核染色質緻密，胞漿空泡形成，出現草酸鹽結晶。

3.染液量需充足，勿使染液蒸發乾燥，以防染料沉著於塗片上。

4.做細胞染色時，當天氣寒冷或濕度較大時，應於37℃溫箱中保溫促干，以免細胞變形縮小或在染色時脫片。

5.染料放置時間越長，染色效果越好。

6. 本試劑應由專業人員使用。

拓展資料

Wrfeht和Giemsa都於1902年報告了各自的新的血液學染色劑，其主要特點是在制備多色性亞甲藍（主要指天青B）方面做了改進，使血細胞和瘧原蟲著色較好，操作簡便。

上述染色法均是含伊紅和亞甲基藍衍生物的復合染料。在臨床檢驗工作中，瑞氏染色法常用於血液、其他體液、分泌物和排泄物塗片中各種細胞的染色，有利於在顯微鏡下觀察細胞形態及對細胞進行分類檢查。

【染色原理】

瑞氏染色分兩相進行，第一相是酸性染料伊紅與細胞中的鹼性物質如血紅蛋白、嗜酸性顆粒等結合；鹼性染料天青B與細胞中的酸性物質如核染色質（chro－matin）、特異中性顆粒、血小板及富含核蛋白的胞質結合。第二相是天青B和伊紅在適宜條件下形成紫色的天青B一伊紅復合物（azure B－eosin complex），這種復合物是形成Romanowsky－Giemsa效應的基礎。

Romanowsky－Giemsa效應包括：①白細胞核染色質染成紫色，瘧原蟲的染色質染成紅色；②中性粒細胞的顆粒及血小板顆粒區染成紫色；③產生本效應必須有兩種染料參與，一種是天青B，另一種是伊紅。

Wittekind（1985）指出，天青B與DNA分子中的磷酸基結合，而伊紅既與DNA分子中的陽離子部位結合，又與天青B結合，與天青B的結合力來源於電子供一受體的電子轉移力，天青B的甲氨基（－NHCHs）與伊紅分子中的叛基（－COOH）間形成氫鍵。因此，天青B是噻嗪類染料中能與伊紅形成復合物的最佳選擇，因為擁有四個甲基側鏈的亞甲藍不能以氫鍵與伊紅結合。

甲醇除作為染料的溶劑，能將瑞氏染料解離成帶正電荷的天青B和帶負電荷伊紅外，因其具有脫水力，還可將細胞固定為一定形態，並使蛋白沉澱為顆粒狀、網狀結構，增加細胞與染料的接觸表面，增強染色效果。

細胞中的各種有機物質（特別是蛋白質）、染料等對環境的州值非常敏感。如環境偏酸，氫離子增多，降低對鹼性染料的親和力；增強伊紅著色，出現異常紅染；相反，則可出現異常藍染。最佳環境應維持在PH值6 4～6、8.因此，必須使用緩沖溶液。

參考資料：

網路_瑞氏染色

瑞氏染色原理及方法_醫學教育網

7、為什麼顯微鏡觀察血細胞是要染色？

染色的目的是使細胞的主要結構，如細胞質、細胞核、細胞器等染上不同的顏色，便於顯微鏡下觀察。
血細胞又稱「血球」，主要含下列三個部分： 紅細胞、白細胞、血小板。
紅細胞呈雙凹圓盤狀，中央較薄，周緣較厚，故在血塗片標本中呈中央染色較淺、周緣較深，無細胞核。白細胞顯色各異，如中性粒細胞的胞質染成粉紅色，含有許多細小的淡紫色及淡紅色顆粒；嗜酸性粒細胞染成桔紅色；嗜鹼性粒細胞著色較淺。血小板是紅骨髓巨核細胞細胞質的脫落物，本身不是細胞。在血塗片中，血小板常呈多角形，聚集成群。血小板中央部分有著藍紫色的顆粒，稱顆粒區（granulomere）；周邊部呈均質淺藍色，稱透明區（hyalomere）。

【瑞氏染色結果】在正常情況下，血膜外觀染成淡紫紅色。顯微鏡下，紅細胞呈粉紅色，在厚薄均勻處，略有碟狀感；白細胞漿中顆粒清楚，並顯示出各種細胞特有的色彩。細胞核染紫紅色，核染色質結構清楚。
染色偏酸，則紅細胞和嗜酸性粒細胞顆粒偏紅，白細胞核呈淡藍色或不著色。染色偏鹼，則所有細胞呈灰藍色，顆粒深暗。嗜酸性顆粒可染成暗褐色，甚至紫黑或藍色。中性顆粒偏粗、偏鹼，染成紫黑色，血膜厚的部位呈綠色。

8、瑞氏染色是細胞化學染色的一種嗎？

瑞氏染色是細胞化學染色的一種。其原理為：既有物理的吸附作用，又有化學的親和作用。各種細胞成分化學性質不同，對各種染料的親和力也不一樣。
細胞化學染色是根據化學反應的原理，應用塗片染色的方法，觀察細胞的化學成分及其變化的重要方法。
從上面兩者的對照就可知道瑞氏染色是細胞化學染色的一種。

9、骨髓片、血塗片主要依據瑞氏染色觀察細胞，為什麼還需要其他化學染色？比如鐵染色、過氧化物酶染色等。

骨髓片、血塗片主要依據瑞氏染色觀察細胞，為什麼還需要其他化學染色？比如鐵染色、過氧化物酶染色

10、瑞氏染色法的詳細介紹

1 ．瑞氏染料是由鹼性染料美藍（ Methvlem blue ）和酸性染料黃色伊紅（ Eostm Y ）合稱伊紅美藍 染料即瑞氏 （美藍－伊紅Y）染料。
伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子，無色部分為陽離子，其有色部分為酸性，故稱伊紅為酸性染料。美藍通常為氯鹽是鹼性的，美藍的中間產物結晶為三氯化鎂復鹽，其有色部分為陽離子，無色部分為陰離子，恰與伊紅鈉鹽相反。
2 ．用 甲醇作瑞氏 染料溶劑，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑，有兩種作用：
（ 1 ）甲醇使瑞氏染料中美藍（ M ）與伊紅（ E ）在溶液中離解，可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質而著色。
甲 醇
ME （瑞氏染料）—— —— → M + + E -
在配製的瑞氏染液中美藍如放置過久即可氧化而含有天青，美藍天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色，但不能使胞漿染為藍色，多餘 美藍就可以 使胞漿染成藍色，染色主要是化學作用，是離子彼此結合的反應。
（ 2 ）甲醇具有強大的脫水力，可將細胞固定在一定形態及增加細胞結構的表面積，提高細胞對染料吸收作用，同時由於甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應。
3. 瑞氏染液配製：
(1) 瑞氏染液配製：
瑞氏染料 830gm 或 1g
甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml
先稱乾燥（事先放入溫箱乾燥過夜）瑞氏染料放置乳缽內， 用乳棒輕輕 敲碎染料成粉末，再行研磨至聽不到 研芝麻聲 即呈細粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內顯「一面鏡」光澤，而無染料粉粒沉著，再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入 一 清潔儲存瓶內（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重復數次，直至乳缽內染料及甲醇用完為止，搖勻，密封瓶口，存室溫暗處，儲存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲存 3 個月以上為佳。
(2) 緩沖液：
1) 緩沖液作用：染色對氫離子濃度是十分敏感的，據觀察 pH 值的改變，可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。 緩沖液須保持 一定的 pH 使染色穩定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏鹼性染料可與緩沖液中 酸基起 中和作用，偏酸性染料則與緩沖液中的鹼基起中和作用，使 pH 恆定。
2) 緩沖液配製（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：
配方 1 ： 配方 2 ：
1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml
1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml
H 2 O( 新鮮 ) 加至 1000ml
置室溫黑暗處，瓶口密封，防止黴菌污染，如有污染則應報廢。
簡易步驟介紹：
1、 取病料塗片、自然乾燥
2、 滴加瑞氏染液染3分鍾,使標本被其中甲醛所固定;
3、 加等量PH6.4的磷酸鹽緩沖液(或等量超純水)輕輕晃動玻片,均勻靜置5分鍾;
4、 水洗、吸干、鏡檢。
5、 細菌染成藍色，組織細胞胞漿紅色，細胞核藍色或紫色。