小鼠骨髓單核巨噬細胞的鑒定

1、請教：小鼠腹腔巨噬細胞提取的經驗方法

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2、小鼠來源的巨噬細胞系RAW264.7細胞是什麼？？用來做哪方面的研究比較適宜？

RAW 264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞. 此細胞株源自雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。專 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此屬細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。 可以胞飲中性紅並吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。 可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。 LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。用含4mM L-谷氨醯胺，4.5g/L 葡萄糖， 1.5g/L 碳酸氫鈉的DMEM培養基，90%；胎牛血清 10%培養。

3、小鼠骨髓誘導巨噬細胞求助

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4、單核細胞和巨噬細胞表型一樣嗎,我分離組織，需要巨噬細胞，我怎麼能把單核細胞和巨噬細胞分開？怎麼區分呢

可以根據細胞表面抗原來區別：
建議參考
http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.pone.0008668

5、小鼠單核細胞RAW264.7的細胞生物學特徵

目的觀察小鼠單核／巨噬細胞RAW264．7的一般細胞生物學特徵。方法用倒置相差顯微鏡觀察細胞的形態特徵，胎盤藍染色細胞計數，繪制細胞生長曲線。半定量逆轉錄聚合酶鏈反應觀察細胞3～2l天破骨細胞表型和功能基因表達譜變化。結果RAW264.7細胞形態以類圓形和不規則多邊形為主，一般含l～2個核，有偽足，細胞胞體較小。細胞生長快，5～6天可匯合。RAW264．7細胞能表達成熟破骨細胞的表型標志基因如核因子KB受體活化子（RANK）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、基質金屬蛋白酶9（MMP9）及骨吸收有關的功能基因如組織蛋白酶K（CaK）、整合素av（integrin av）等。RAW264。7細胞培養3～21天，上述基因的mRNA表達不隨培養時間改變。結論RAW264．7具有破骨細胞特徵性基因表達譜，是一種較好的破骨前體細胞模型。

6、RAW 264.7小鼠巨噬細胞是小鼠單核巨噬細胞白血病細胞嗎？想在上海細胞庫買，不知道這兩者是一樣的嗎？

應該是的，atcc細胞庫網站上的描述是macrophage; Abelson murine leukemia virus transformed。以及這個細胞我養過，傳代不能用胰酶消化。。。密度也不能高。。。

7、漿細胞、巨噬細胞、單核細胞、單核—巨噬細胞都有什麼區別和聯系啊

一、區別：

1、功能上的區別：

漿細胞具有合成、貯存抗體即免疫球蛋白（immunoglobulin）的功能，參與體液免疫反應。免疫球蛋白主要在粗面內質網池內形成，用免疫熒光技術已證實注射一種抗原到機體後，相應的抗體首先在漿細胞的細胞質中出現。

巨噬細胞（英語：Macrophages，縮寫為mø[1]）是一種位於組織內的白血球，源自單核細胞，而單核細胞又來源於骨髓中的前體細胞。

巨噬細胞和單核細胞皆為吞噬細胞，在脊椎動物體內參與非特異性防衛（先天性免疫）和特異性防衛（細胞免疫）。

它們的主要功能是以固定細胞或游離細胞的形式對細胞殘片及病原體進行噬菌作用（即吞噬以及消化），並激活淋巴球或其他免疫細胞，令其對病原體作出反應。

單核細胞，目前認為它是巨噬細胞和樹突狀細胞的前身，具有明顯的變形運動，能吞噬、清除受傷、衰老的細胞及其碎片。單核細胞還參與免疫反應，在吞噬抗原後將所攜帶的抗原決定簇轉交給淋巴細胞，誘導淋巴細胞的特異性免疫性反應。

單核巨噬細胞功能：單核-巨噬細胞是機體重要的免疫細胞，具有抗感染、抗腫瘤和免疫調節等重要作用。

（1）抗感染：非特異性吞噬殺傷多種病原微生物，是機體非特異性免疫防禦中的重要細胞。

（2）提呈抗原、啟動免疫應答：在特異性免疫應答中，絕大多數TD抗原（胸腺依賴抗原）都需經巨噬細胞吞噬和加工處理，並與其表面的MHC分子形成抗原肽-MHC復合物，表達在細胞膜表面，提呈給T細胞。

巨噬細胞表面有很多黏附分子，可與T細胞表面的協同刺激分子受體結合，產生協同刺激信號，誘導T細胞的活化，啟動免疫應答。

（3）抗腫瘤：巨噬細胞被某些細胞因子如IFN-γ激活後能有效地殺傷腫瘤細胞，是參與免疫監視的重要效應細胞。④免疫調節：在特異性免疫應答中，巨噬細胞可分泌釋放多種細胞因子，參與免疫調節。

2、增植方式上的區別：

漿細胞（plasmacell）B淋巴細胞在抗原刺激下分化增殖而形成的一種不再具有分化增殖能力的終末細胞。在分化過程中獲得特有的漿細胞抗原，這是漿細胞區別於淋巴細胞的主要膜標志。漿細胞在體內的分布與淋巴細胞大致相似，主要分布在淋巴結和脾臟。

B細胞接受抗原信息刺激後，最初形成體積較大的漿母細胞。在漿母細胞的細胞質內有許多平行排列的扁平狀的粗面內質網。而由漿母細胞進一步分化增殖而成的漿細胞的粗面內質網內，充滿細小的絮狀物質，即羅氏小體，是由免疫球蛋白分子組成。

故漿細胞可合成及分泌抗體。科學家認為，由單個B細胞增殖分化成的漿細胞系，僅能合成一種類型的免疫球蛋白分子。正常機體中有許多不同的免疫活性細胞克隆，故可發展成不同的漿細胞系，並合成針對各種抗原的抗體。

巨噬細胞，當單核細胞經血管的內皮細胞層進入一已受損的組織時（這過程被稱為白血球外滲作用），它經過一連串轉變以成為巨噬細胞。

單核細胞會因化學趨向性而被化學物質的刺激吸引至受損處，這些刺激包括受傷細胞、病原體、由肥大細胞和嗜鹼性細胞所釋放的組織胺，以及由已於該處的巨噬細胞釋出的細胞因子。在某些地方，如睾丸，巨噬細胞已被證實會透過增殖以移殖於此。

與壽命較短的中性粒細胞不同，其壽命可達數個月至數年不等。

單核細胞（monocytes）是血液中最大的血細胞，也是體積最大的白細胞，是機體防禦系統的一個重要組成部分。單核細胞來源於骨髓中的造血幹細胞，並在骨髓中發育，當它們從骨髓進入血液時仍然是尚未成熟的細胞。

單核-巨噬細胞包括骨髓中的前單核細胞、外周血中的單核細胞、以及組織內的巨噬細胞(Mφ)。Mφ來源於血液中的單核細胞，而單核細胞又來源於骨髓中的前體細胞。

二、聯系：

漿細胞由淋巴細胞分化而來，參與細胞免疫 單核細胞具有強大吞噬功能，能吞噬細菌 組織碎片 壞死細胞 寄生菌 抗原傳遞免疫信息，活化B T淋巴細胞，在特異免疫中起重要作用。 

單核細胞具有強大吞噬功能也稱單核-巨噬細胞。 單核細胞游出血管壁到達組織，體積變大，吞噬能力更強，稱作巨噬細胞 

(7)小鼠骨髓單核巨噬細胞的鑒定擴展資料：

漿細胞存在位置：

B細胞 在血液中B細胞約占淋巴細胞總數的15%。固定在B細胞膜表面的免疫球蛋白（主要是單體IgM和IgD）是抗原的特異性受體。當它們初次與某一個抗原接觸而被致敏時，一部分B細胞即分化成熟為漿細胞，漿細胞即開始生成對該抗原特異的免疫球蛋白並將它們釋放到周圍的組織液中，這就是免疫抗體。

只有當某些調節性因子，如由輔助性T細胞所釋放的淋巴因子和巨噬細胞釋放的白細胞介素-1存在時，B細胞才能被抗原激活。漿細胞不再在血液中循環，在它們生存的2-3天時間里一直停留在組織中。漿細胞一般停留在各種淋巴結。

正常機體漿細胞存在在脾、淋巴結的相應組織結構處，漿細胞生成抗體並將它們釋放到周圍的組織液中，通過淋巴結血液通路開放的循環匯集成髓靜脈，髓靜脈進入小梁靜脈，最後匯集成靜脈出淋巴結

輸入淋巴管經淋巴結後以輸出淋巴管出淋巴結，故少部分抗體可直接進入淋巴。所以抗體先進入組織液，而不是直接分布在血漿中。抗體以開放於髓竇血液通路直接匯入靜脈而進入血漿的。抗體可以分布在淋巴內。

漿細胞形態：

漿細胞直徑10-20μm；核較小，占細胞的1/2以下，多偏於一側，偶可見雙核；染色質粗密、聚集成堆、常染成紫丁香色、不均勻，在近核處一邊常伸出半月狀淡染區；漿中偶見有空泡或有泡沫感。

原始漿細胞直徑14-20μm；核較大，約占細胞2/3，圓或橢圓形，常偏於一側；染色質細致、呈顆粒狀，均勻分散或呈細網狀。

核仁2-5個，淡藍色，不顯著。胞漿較其它原始細胞為多，深藍而不透明，近核處著色較淺，無顆粒，偶可見到空泡。原始漿細胞在正常骨髓中極少見到，只有在多發性骨髓瘤和漿細胞白血病時才可大量存在，並有形態變異。

8、如何進行小鼠單核巨噬細胞RAW264.7的消化及傳代

5mM EDTA 消化，不需PBS 洗，吸棄原培養液，加入5mM EDTA 晃動消化1min 左右，吸棄，放置1min，加入新鮮培養液即可。
傳代1：10~20傳就行

9、請教外周血單核，巨噬細胞的分離和培養方法

博凌科為以前認為紅細胞、粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞等都是分化終末細胞.很難在體外培養生長或僅能短期培養而不能傳代,但是近來技術的發展,有血細胞培養純化的 報道.血細胞可從外周血中用梯度離心法獲得,也可從脾臟中用機械法切碎過篩分離獲得(尤其是淋巴細胞).從腹腔沖洗可獲得較多的巨噬細胞.也可從骨髓中取 前體血細胞,然後加上促進單核/巨噬細胞分化和生長的細胞因子,從而誘導前體血細胞向所要的細胞方向分化.