1、求助流式細胞儀鑒定間充質幹細胞的問題
間充質幹細胞最早在骨髓中發現，隨後還發現存在於人體發生、發育過程的許專多種組織中。目前, 我們能夠從骨屬髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉、肺、肝、胰腺等組織以及羊水、臍帶血中分離和制備間充質幹細胞，用得最多的是骨髓來源的間充質幹細胞。但骨髓來源的間充質幹細胞存在以下問題：隨著年齡的老化，幹細胞數目顯著降低、增殖分化能力大幅度衰退；制備過程不容易質控；移植給異體可能引起免疫反應；取材時對患者有損傷，患者有骨髓疾病時不能採集，即使是健康供者，亦不能抽取太多的骨髓。這都限制了骨髓間充質幹細胞臨床應用，使得尋找骨髓以外其他可替代的間充質幹細胞來源成為一個重要的問題。
2、如何取小鼠骨髓細胞
1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠)，放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後，拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨，用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚，用眼科剪小心剪開皮膚，並分離兩下肢的皮膚，往下在腳踝處剪斷，往上在髖關節處剪斷，這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉，分別剪下Femurs（大腿骨）and Tibias（脛骨）,剪去兩端軟骨，露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器，每支吸取1mlHBSS液，並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔，沖洗骨髓腔以獲得骨髓，一般用2-3ml培養基沖洗兩次，可沖出絕大部分細胞。
5、過濾：用2OO目的濾網過濾，將濾網的中央插入到離心管裡面25px處，然後用注射器吸取骨髓液，慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中，去除殘渣。
6、離心：將離心管放置離心機中離心10分鍾（1350r/min）
7、去上清，加入1ml紅細胞裂解液ACK，靜置3分鍾，再加9ml HBSS溶液，進行離心10分鍾，棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次，室溫，1350r/min離心10分鍾。計數活細胞，用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基，然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇，
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻，24孔板鋪板培養，每個孔1ml.
3、誰知道小鼠骨髓間充質幹細胞的培養條件？
幹細胞的培養條件比較高，一定要避免污染！血清要進行支原體檢測，自配的培養基要進行污染測試。為了實驗自己最好找現成的！可以根據自己的條件，盡量選用質量好的各種試劑。厚百提供。
4、骨髓間充質幹細胞表面標志物cd45是單標還是雙標
不同的幹細胞有自己特異的細胞表面抗原，鑒定細胞的種類最准確直接的方法就是用流式細胞儀檢測其表面抗原。
以骨髓間充質幹細胞（MSC）為例，需要鑒定CD34、CD44、SH1等表面標志。除此之外，骨髓間充質幹細胞還需要進行分化實驗，以回證實其可以分化為骨、軟骨、細胞。以上兩條，即表面標志及分化實驗沒有問題，就可以確定培養的細胞為骨髓間充質幹細胞。
不同的幹細胞有不答同的表面標志及分化能力，所以MSC只是做為一個例子來說明。
5、如何提取小鼠骨髓細胞?
1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠)，放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後，拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨，用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚，用眼科剪小心剪開皮膚，並分離兩下肢的皮膚，往下在腳踝處剪斷，往上在髖關節處剪斷，這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉，分別剪下Femurs（大腿骨）and Tibias（脛骨）,剪去兩端軟骨，露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器，每支吸取1mlHBSS液，並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔，沖洗骨髓腔以獲得骨髓，一般用2-3ml培養基沖洗兩次，可沖出絕大部分細胞。
5、過濾：用2OO目的濾網過濾，將濾網的中央插入到離心管裡面25px處，然後用注射器吸取骨髓液，慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中，去除殘渣。
6、離心：將離心管放置離心機中離心10分鍾（1350r/min）
7、去上清，加入1ml紅細胞裂解液ACK，靜置3分鍾，再加9ml HBSS溶液，進行離心10分鍾，棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次，室溫，1350r/min離心10分鍾。計數活細胞，用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基，然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇，
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻，24孔板鋪板培養，每個孔1ml.
6、免疫組化鑒定骨髓間充質幹細胞買什麼試劑盒
單靠免疫組化的方法是不能定量，定性的。
Bone Mesenchymal Stem Cells 作為一個細胞群體，還沒有發現有特定細胞表面marker. 對於那些可以代表自我更新和分化的marker, 也不清楚到底要發現哪一個的表達才能確定該細胞就是BMSC。
目前常用的方法，就是採用培養，colony-forming unit-fibroblasts (CFU-F)這個方法。一般BMSC可以24-48小時貼壁。
流式細胞計數，比如STRO-1，但是一般認為STRO-1陽性的細胞更趨向於造血幹細胞，和BMSC簡單區別還不是很清楚。
這里有個培養分化的產品
http://www.rndsystems.com/pdf/SC020.pdf
7、如何鑒定獲得的細胞是間充質幹細胞
?
8、小鼠骨髓間充質幹細胞在正常生理條件下能否和成熟的T淋巴細胞接觸
成熟的T淋巴細胞在免疫過程中也是可以通過血液和淋巴循環的吧？這樣的話應該也會接觸到骨髓間充質肝細胞