1、動物染色體標本制備的原理及主要步驟
1)動物的選擇,一般用小鼠,其繁殖能力強,易於飼養.我們常用的是它們的骨髓細胞和精巢,因其分裂指數較高,不用體外培養就可以得到分裂中期的細胞.
2)秋水仙素用量要注意,太多或處理時間過長,會導致染色體的過分凝縮或著絲點裂解,最終會引起染色體形態不正常,甚至被破壞或溶解。
3) 低滲處理很關鍵。低滲液的量、處理時間均與細胞的數量有關。低滲過度,細胞會破裂;低滲不足則染色體在一起,分散不開。
4) 離心速度或離心時間也能影響染色體標本的制備。離心速度過大或離心時間過長,則會引起細胞破裂;反之,離心速度過小或離心時間過短,則細胞沉降不下來,則會引起大量細胞的丟失。
5) 固定液要隨用隨配,固定徹底後再打散細胞團塊,否則細胞容易破碎,染色體分散亦受到影響。
6) 載玻片要預冷.冷卻不夠,則會影響染色體的附著和鋪展。
7) 用吸管吹散細胞時用力必須盡量輕柔,用力過大則會造成細胞破裂,而染色體也會彌散在溶液中,在隨後的離心中將會丟失。
8) 滴片時的高度很重要,高度過低細胞不會破裂;過高則染色體過於分散甚至丟失,無法辨別出染色體的准確數量。
2、動物染色體標本的制備與觀察的實驗過程中低滲不足或過度會出現什麼問題
1)動物的選擇,一般用小鼠抄,其繁殖能力強,易於飼養.我們常用的是它們的骨髓細胞和精巢,因其分裂指數較高,不用體外培養就可以得到分裂中期的細胞.
2)秋水仙素用量要注意,太多或處理時間過長,會導致染色體的過分凝縮或著絲點裂解,最終會引起染色體形態不正常,甚至被破壞或溶解.
3)
低滲處理很關鍵.低滲液的量、處理時間均與細胞的數量有關.低滲過度,細胞會破裂;低滲不足則染色體在一起,分散不開.
4)
離心速度或離心時間也能影響染色體標本的制備.離心速度過大或離心時間過長,則會引起細胞破裂;反之,離心速度過小或離心時間過短,則細胞沉降不下來,則會引起大量細胞的丟失.
5)
固定液要隨用隨配,固定徹底後再打散細胞團塊,否則細胞容易破碎,染色體分散亦受到影響.
6)
載玻片要預冷.冷卻不夠,則會影響染色體的附著和鋪展.
7)
用吸管吹散細胞時用力必須盡量輕柔,用力過大則會造成細胞破裂,而染色體也會彌散在溶液中,在隨後的離心中將會丟失.
8)
滴片時的高度很重要,高度過低細胞不會破裂;過高則染色體過於分散甚至丟失,無法辨別出染色體的准確數量.
3、小鼠骨髓細胞染色體標本制備和觀察實驗報告
首先要提前2小時向小鼠注射秋水仙素,處死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理鹽水,離心取細胞(離心管底部),再經低滲處理,染色,滴冰片,鏡檢。很麻煩,具體的你可以去圖書館查閱相關資料(動物染色體制備)。
4、制備良好的動物染色體標本應注意哪些問題?為什麼?
1)動物的選擇抄,一般用小鼠襲,其繁殖能力強,易於飼養.我們常用的是它們的骨髓細胞和精巢,因其分裂指數較高,不用體外培養就可以得到分裂中期的細胞.
2)秋水仙素用量要注意,太多或處理時間過長,會導致染色體的過分凝縮或著絲點裂解,最終會引起染色體形態不正常,甚至被破壞或溶解。
3) 低滲處理很關鍵。低滲液的量、處理時間均與細胞的數量有關。低滲過度,細胞會破裂;低滲不足則染色體在一起,分散不開。
4) 離心速度或離心時間也能影響染色體標本的制備。離心速度過大或離心時間過長,則會引起細胞破裂;反之,離心速度過小或離心時間過短,則細胞沉降不下來,則會引起大量細胞的丟失。
5) 固定液要隨用隨配,固定徹底後再打散細胞團塊,否則細胞容易破碎,染色體分散亦受到影響。
6) 載玻片要預冷.冷卻不夠,則會影響染色體的附著和鋪展。
7) 用吸管吹散細胞時用力必須盡量輕柔,用力過大則會造成細胞破裂,而染色體也會彌散在溶液中,在隨後的離心中將會丟失。
8) 滴片時的高度很重要,高度過低細胞不會破裂;過高則染色體過於分散甚至丟失,無法辨別出染色體的准確數量。
5、制備骨髓細胞染色體標本是怎樣的
因為在之前你得到的染色體都處於不同的分裂期,預固定是為了使這些細胞及其染色體都固定在當前所處的時期,便於觀察。
6、小鼠骨髓細胞的染色體標本一般制備成什麼片
小鼠骨髓細胞的染色體標本一般制備成什麼片
首先要提前2小時向小鼠注射秋水仙素,處死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理鹽水,離心取細胞(離心管底部),再經低滲處理,染色,滴冰片,鏡檢.很麻煩,具體的你可以去圖書館查閱相關資料(動物染色體制備).
7、牛蛙骨髓細胞染色體標本文獻有哪些
蛙骨髓細胞染色體玻片標本的製作
一、實驗目的
1、了解動物細胞染色體製片的原理。
2、學習蛙骨髓細胞染色體製片的方法。
3、觀察蛙染色體的數目和形態。
二、實驗原理
小型動物染色體製片最好、最有效的材料就是骨髓組織。在骨髓細胞中,有絲分裂指數相當高,可直接得到中期細胞。為提高有絲分裂指數,實驗前,於動物腹腔內注射一定量的秋水仙素溶液,取骨髓後,經低滲處理、固定、滴片、空氣乾燥後即可獲得良好的中期分裂相。
三、實驗材料、
蛙類
四、器具及葯品
注射器,離心管、解剖器、離心機,冰箱、電子天平,顯微鏡,搪瓷缸,載玻片,燒杯,滴管,秋水仙素,KCl,甲醇、冰乙酸,乙醇。
五、實驗步驟
一離心法(適合於個體大的蛙)
1、前處理
目的:改變細胞質的粘度,抑制或破壞紡錘體的形成,使染色體縮短和分散,獲得較多中期分裂相。
實驗前8-20小時,將蛙稱重,按每克體重10-40ug的劑量(無尾類10-20ug,有尾類30-40ug)經腹腔注射秋水仙素溶液,秋水仙素溶液濃度100-1000ug/ml,按蛙大小來配。
2、取骨髓細胞
將蛙麻醉,用手術剪剝開腹腔,取下四肢骨,剔凈肌肉,放到盛有0.046mol/l的KCl的小燒杯中洗一下,用鑷子夾出來,剪掉兩端關節,將裝有0.046mol/l的KCl的注射器從骨一頭插入,沖骨髓細胞於干凈的離心管內,反復沖洗幾次,直到骨變白為止。注意這一過程不要讓組織塊掉入離心管。
3、低滲處理
目的:使細胞吸水膨脹,細胞膜易破裂,有助於染色體的分散。
當骨髓細胞全部沖入離心管後,開始計時,即低滲開始。室溫下低滲處理30-40分鍾,在此過程中,要用吸管反復吹打。
另外取預先洗凈的載玻片放入盛有蒸餾水的搪瓷缸中,置冰箱中冰凍。
4、固定
目的:盡快殺死細胞,使細胞盡可能保持原有的狀況,並且還可以去掉細胞質。
將離心管兩兩平衡後,對稱放入離心機內,以1000轉/分離心10分鍾,輕輕取出,棄上清液,沿管壁緩慢加入現配卡諾氏固定液6ml左右,並用吸管吹散細胞團,固定30分鍾,平衡後再離心,棄上清液,加卡諾氏固定液進行第二次固定。
注意,固定液要現配,每次離心前都要平衡,離心的時間、速度均同第一次。由於每離心一次,細胞要損失30%左右,因此對個體小的蛙第二次固定也可省去,但固定次數少,細胞質不易去掉,影響效果,固定次數多,離心後細胞損失多。這一茅盾的解決有待多次實驗的摸索,原則上大型蛙可固定2-3次,小型蛙1次。