1、骨髓間充質幹細胞提取什麼動物最方便
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2、如何設計sd大鼠的骨髓間充質幹細胞pcr引物前體
如何設計sd大鼠的骨髓間充質幹細胞pcr引物前體
所謂骨髓移植，是從捐髓者的骨骼(通常是盤骨)抽取健康的骨髓細胞，過程約需半小時，然後以輸血形式注入病人體內；病人亦可與醫生商量，選擇於手部抽取血液，透過分離機收集當中的血幹細胞，但過程較從盤骨抽取骨髓細胞長，至少需時三小時。
抽取骨髓造血幹細胞有兩種方法：一是醫生在供者的髂骨部位穿刺採集骨髓中的造血幹細胞，術後一兩天內有些疼痛，一周內就可完全恢復。二是用科學的方法有效地動員骨髓和其他部位的造血幹細胞大量釋放到外周血液中去，從供者的手臂靜脈中採集，並通過機器將造血幹細胞分離出來，剩餘的血液回輸到供者體內。
3、大鼠腹膜間皮細胞提取如何去除成纖維細胞
實驗技術名稱:大鼠成纖維細胞培養（貼塊培養法）
實驗技術介紹或原理:一般來說，貼塊培養法，只要不加一些選擇性的添加物（血清濃度10％，不加生長因子，不加肝素，不加地塞米松等）最後成纖維細胞必然成為優勢細胞，因為：巨噬細胞是終末細胞，內皮細胞較嬌氣，平滑肌細胞貼壁較慢，也不易爬出，肺上皮細胞會被血清抑制，增殖能力也很弱，所以，成纖維細胞是很容易培養的。
實驗基本步驟:
1.明膠包被培養過夜（准備2－3個），取出明膠，用2ml培養液沖洗培養瓶一遍，置於超凈台中。
2.解剖取肺：將乳鼠在酒精中浸泡後取出，轉移至超凈台上的玻璃培養皿中，用碘酒消毒胸部皮膚，再用酒精棉球脫碘，左手捏緊乳鼠頸背部皮膚以充分展露胸部，右手以眼科直剪剪開皮膚，充分撕拉開，再用酒精棉球消毒，繼而以另一把眼科彎剪沿胸骨柄左下緣向上剪開肋骨，然後在切口中間橫剪胸骨。用眼科聶取出肺，置於盛有PBS（含有200U/ml青鏈黴素）的玻璃平皿中，沖洗去血。
3.用眼科剪將肺分成幾個肺葉，用鑷子去除周邊的血凝塊及纖維組織，用眼科剪剪去肺門處的支氣管和血管，再用含有雙抗的PBS沖洗1遍。
4.用眼科彎剪將肺組織剪碎成1mm3大小，加入含有雙抗的PBS，將肺組織塊吹打開，靜置15min後，更換新的PBS
5.用200ul微量加樣器（最好是超凈台中專用，臨用時用酒精棉球好好檫試槍柄）取200ul加樣槍頭一個，剪去尖，在酒精燈上用火焰燒彎。用槍頭吸取組織塊接種於培養瓶中，每瓶20－25塊左右，每小塊間距0.5cm左右。組織塊放置好後，輕輕將培養瓶翻轉，讓瓶底朝上，向瓶內加入2ml左右的培養液，蓋好瓶蓋，將培養瓶傾斜放置在溫箱中，干貼壁2－4小時後，將培養瓶慢慢翻轉平放，繼續靜置培養。注意上述操作過程中動作要輕柔，讓液體慢慢覆蓋組織小塊，嚴禁動作過快致使液體產生的沖力使粘貼的組織塊飄起而造成原代培養的失敗。48小時後換液，更換2－3ml即可。
6.貼塊貼壁72小時後，鏡下可見大量的成纖維細胞爬出，將組織塊去除，繼續培養2－3天，待細胞長滿，即可傳代。註：因為血清濃度低，內皮細胞可以爬出少量，但是很快就會死掉。
7.傳代用0.25％胰酶常規消化，以1：2傳代，傳代完後，採用差速貼壁法純化一次，即待細胞貼壁1.0－1.5h後（即絕大部分成纖維細胞都已經貼壁），棄去未貼壁的細胞和培養液，更換新的培養液
4、大鼠顆粒細胞的提取和細胞中RNA的抽提
大鼠顆粒細胞的提取和細胞中RNA的抽提
總RNA提取試劑盒（TRIzol法）
RIpure試劑是直接從細胞或組織中提取總RNA的試劑。它在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性。加入氯仿後離心，樣品分成水樣層和有機層。RNA存在於水樣層中。收集上面的的水樣層後，RNA可以通過異丙醇沉澱來還原。在除去水樣層後，樣品中的DNA和蛋白也能相繼以沉澱的方式還原。乙醇沉澱能析出中間層的DNA，在有機層中加入異丙醇能沉澱出蛋白。共純化DNA對於樣品間標准化RNA的產量十分有用。
無論是人、動物、植物還是細菌組織，該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細胞(>107)均有較好的分離效果。TRIPURE試劑操作上的簡單性允許同時處理多個的樣品。所有的操作可以在一小時內完成。TRIPURE抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染。故而能夠作RNA印跡分析、斑點雜交、poly(A)+選擇、體外翻譯、RNA酶保護分析和分子克隆。如果是用於PCR，當兩條引物位於單一外顯子內時，建議用擴增級的DNase I來處理抽提的總RNA。
TRIpure試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如，從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳並用溴化乙啶染色，可見許多介於7 kb和15 kb之間不連續的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分)，兩條優勢核糖體~5 kb (28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介於0.1和0.3 kb之間 (tRNA, 5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。
5、要從大鼠皮層神經元中提蛋白質，請教具體的操作步驟，越詳細越好！是不是等到細胞鋪滿才能提？
我用的試劑盒步驟如下
A． 細胞總蛋白提取
1. 裂解液制備：每500ul冷的Buffer I（蛋白質裂解液）中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻後置冰上備用。
2. 取5-10×106個細胞，在4℃，1000rpm條件下離心5-10分鍾，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞
3. 用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌後盡可能吸幹上清。
4. 每5×106個細胞中加入500ul冷的裂解液，混勻後，在4℃條件下振盪15-20分鍾。
5. 在4℃，14000rpm條件下離心15分鍾。
6. 快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。
6、如何提取小鼠骨髓細胞?
1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠)，放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後，拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨，用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚，用眼科剪小心剪開皮膚，並分離兩下肢的皮膚，往下在腳踝處剪斷，往上在髖關節處剪斷，這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉，分別剪下Femurs（大腿骨）and Tibias（脛骨）,剪去兩端軟骨，露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器，每支吸取1mlHBSS液，並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔，沖洗骨髓腔以獲得骨髓，一般用2-3ml培養基沖洗兩次，可沖出絕大部分細胞。
5、過濾：用2OO目的濾網過濾，將濾網的中央插入到離心管裡面25px處，然後用注射器吸取骨髓液，慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中，去除殘渣。
6、離心：將離心管放置離心機中離心10分鍾（1350r/min）
7、去上清，加入1ml紅細胞裂解液ACK，靜置3分鍾，再加9ml HBSS溶液，進行離心10分鍾，棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次，室溫，1350r/min離心10分鍾。計數活細胞，用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基，然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇，
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻，24孔板鋪板培養，每個孔1ml.
7、大鼠的骨髓間充質幹細胞培養的時候需要添加什麼細胞因子
大鼠的骨髓間充質幹細胞培養的時候需要添加什麼細胞因子
檢測 SD大鼠骨髓間充質幹細胞(BMSC)-肝細胞共培養上清液中的細胞因子,探討細胞因子的作用,為生物人工肝及臨床治療肝功能衰竭提供理論依據。