骨髓液單個核細胞RNA提取

1、骨髓單個核細胞分離，目的用於RNA的提取

用淋巴細胞分離液就可以了。天津生產的，90元一瓶，200毫升。
1 骨髓液3毫升，用3毫升PBS稀釋混勻；
2 平鋪於6毫升淋巴細胞分離液液面上，保持界面清晰；
3 2000轉/分水平離心30分鍾；
4 1毫升針頭吸取中間雲霧層；
5 用PBS洗滌兩次。
骨髓液用抗凝管收集就可以了，不要放到4度冰箱，避免溶血；淋巴細胞分離液使用前室溫平衡；離心機必須為水平離心，不要突然剎車，應使速度緩慢下降；骨髓液和淋巴細胞分離液必須保持界面清晰。

2、單個核細胞提取液的配方

用ficoll液或precoll液分離單個核細胞，利用密度梯度離心的原理。其中較常用ficoll液。
聚蔗糖－泛影葡胺的主要成分是一種合成的蔗糖聚合物稱聚蔗糖（商品名為ficoll）。ficoll液好像都是從外面買的，所以它的具體配方我也沒有找到。

3、單個核細胞提取的最佳方法是什麼？

利用密度梯度離心的原理，用ficoll液或precoll液分離單個核細胞。
（一）Ficoll分層液法
是一種單次密度梯度離心分離法。聚蔗糖－泛影葡胺是一種較理想的細胞分層液，其主要成分是一種合成的蔗糖聚合物稱聚蔗糖（商品名為Ficoll），分子量為40kD，具有高密度、低滲透壓、無毒性的特點。高濃度的Ficoll溶液粘性高，易使細胞聚集，故通常使用60g/L的低濃度溶液，密度為1.020，添加比重為1.200的泛影葡胺（urografin）以增加密度。國外常用商品Isopaque或Hypaque，故又稱Ficoll-Hypaque分層液，將適量340g/L泛影葡胺加入Ficoll溶液中即可配製成密度合適分層液。分離人外周淋巴細胞以密度為1.077±0.001的分層液最佳，因為人的紅細胞密度為1.093，粒細胞密度為1.092，單個核細胞在1.076～1.090之間。而不同動物血中的單個核細胞對分離液的密度要求各不相同，如小鼠為1.088，馬為1.090。分離時先將分層液置試管底層，然後將肝素化全血以Hanks液或PBS液作適當稀釋後，輕輕疊加在分層液上面，使兩者形成一個清晰的界面。水平式離心後，離心管中會出現幾個不同層次的液體和細胞帶。紅細胞和粒細胞密度大於分層液，同時因紅細胞遇到Ficoll而凝集成串錢狀而沉積於管底。血小板則因密度小而懸浮於血漿中，唯有與分層液密度相當的單個核細胞密集在血漿層和分層液的界面中，呈白膜狀，吸取該層細胞遞經洗滌高心重懸。本法分離單個核細胞純度可達95％，淋巴細胞約佔90％～95％，細胞獲得率可達80％以上，其高低與室溫有關，超過25℃時會影響細胞獲得率。
（二）Percoll分層液法
這是一種連續密度梯度離心分離法。Percoll是一種經聚乙烯吡喀烷酮(PVP)處理的硅膠顆粒，對細胞無毒性。利用Percoll液經高速離心後形成一個連續密度梯度的原理，將密度不等的細胞分離純化。用Percoll原液(密度1.135)與約等量雙離子強度的磷酸緩沖液均勻混合，高速離心後，使分層液形成一個從管底到液面密度逐漸遞減的連續密度梯度，再將已制備的單個核細胞懸液輕輕疊加在液面上，低速離心後，便得四個細胞層。表層為死細胞殘片和血小板，底層為粒細胞和紅細胞，中間有兩層，上層富含單個核細胞(75％)，下層富含淋巴細胞(98％)。該法是純化單核細胞和淋巴細胞的一各較好的方法，但操作流程較長，手續較多。

目前比較常用ficoll分層液法

4、提取血液的RNA怎麼提取

取新鮮的血液（紫管），加入3倍體積紅細胞裂解液，混勻後室溫放置10分鍾，10,000 rpm離心1分鍾。

徹底吸棄上清，收集白細胞沉澱。

每100-200μl血液收集的白細胞沉澱加入1ml TRIzol。室溫放置5min，使樣品充分裂解。

4℃12,000 rpm 離心10分鍾，取上清（）。

每1ml TRIzol加入200μl氯仿，劇烈振盪混勻後室溫放置3-5 min，自然分相。

4℃ 12,000rpm離心10-15min。樣品會分成三層：黃色的有機相，中間層和無色的水相，RNA主要在水相中，把水相轉移到新管中（小心吸取水相）

在上清中加入等體積冰冷的異丙醇（），室溫放置10-20min。

4℃ 12,000 rpm離心10min，棄上清，RNA沉澱於管底。

RNA沉澱中加入1ml 75%乙醇（用RNase-free水配製，），溫和振盪離心管，懸浮沉澱。

4℃5,000-8,000 rpm離心1-2min，棄上清。

室溫放置1-2分鍾晾乾沉澱。 

沉澱中加入50-100μl RNase-free水，輕彈管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存。

檢測純度和濃度（OD260/OD280在2.0左右）

5、RNA的提取方法步驟及原理.

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:

Trizol是一種總RNA抽提試劑，內含異硫氰酸胍等物質，能迅速裂解細胞，抑制細胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進行提取組織或細胞中的RNA。

Trizol作用原理:

在勻質化或溶解樣品中，Trizol試劑可保持RNA的完整性，同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心後，裂解液分層成水相和有機相。RNA存在於水相中。

水相轉移後，RNA通過異丙醇沉澱回收。移去水相後，用乙醇可從中間相沉澱得到DNA，加入異丙醇沉澱可從有機相得到蛋白質。

(5)骨髓液單個核細胞RNA提取擴展資料

與DNA不同，RNA一般為單鏈長分子，不形成雙螺旋結構，但是很多RNA也需要通過鹼基配對原則形成一定的二級結構乃至三級結構來行使生物學功能。

RNA的鹼基配對規則基本和DNA相同，不過除了A-U、G-C配對外，G-U也可以配對。

在細胞中，根據結構功能的不同，RNA主要分三類，即tRNA（轉運RNA），rRNA（核糖體RNA），mRNA（信使RNA）。mRNA是合成蛋白質的模板，內容按照細胞核中的DNA所轉錄；tRNA是mRNA上鹼基序列（即遺傳密碼子）的識別者和氨基酸的轉運者；rRNA是組成核糖體的組分，是蛋白質合成的工作場所。

6、怎樣提取細胞核內的RNA

怎樣提取細胞核內的RNA
如何分別從細胞漿和細胞核中抽提RNA
操作步驟：
樣品處理：
a. 植物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混勻。
b. 動物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液，用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。
c. 貼壁細胞：直接在培養板中加入裂解液裂解細胞，每106細胞加1ml 裂解液。用取樣器吹打混勻。
d. 細胞懸液：離心收集細胞。每106動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加1ml裂解液混勻。
e. 血液處理：取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細胞裂解液，混勻後室溫放置10分鍾，10000rpm離心1分鍾。棄上清，若沉澱含有紅細胞，可加入2倍體積紅細胞裂解液重復裂解步驟。離心後沉澱加入1 ml裂解液混勻。
將處理後的樣品在室溫放置5分鍾，使得核酸蛋白復合物完全分離。
向勻漿樣品中加0.2ml氯仿，蓋好管蓋，劇烈振盪15秒，室溫放置3-5分鍾。
2-8℃ 12000 rpm離心10分鍾。RNA主要在上層無色的水相中，把水相轉移到新管中，不要吸到沉澱。

7、如何提取單個細胞的RNA

如何提取單個細胞的RNA

首先嚴格說不是DNA的降解，是DNA被打斷後形成的片段，因為一般DNA都很長，在操作過程中容易受外力的作用而斷裂，形成片段，這是正常現象，提取中無法避免，只能盡量減少；

如果是降解的話，會形成彌散形的條帶，條帶區分不明顯；

操作中注意用力要柔和，不要用力的搖晃和吹打等，所使用的槍頭最好提前用剪刀斜著剪一下，使槍頭孔徑變大，可以保證抽吸的時候減少對DNA的剪切力；

注意加入RNA酶，降解RNA；

8、要提取mRNA的外周血單個核細胞如何保存

-80°

9、外周血單個核細胞和總白細胞分別提取RNA，哪個更好，有沒有文獻支持，最好外文的。謝謝

這個完全取決於你要用RNA做什麼，單核細胞和總白細胞提出來的RNA是不一樣的，沒有哪個更好一說。

10、外周血單個核細胞RNA的提取不用低溫離心機行不行?我們實驗室沒有低溫離心機。

建議最好還是用低溫離心機，因為rna比較容易講解，特別還是血磁暴中的，含量又少，不低溫會很悲劇。。