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小鼠骨髓淋巴細胞提取步驟

發布時間:2021-02-27 13:01:00

1、制備小鼠骨髓染色體標本過程中有哪幾個主要步驟影響製片結果

在制備小鼠骨髓細胞染色體標本過程中以下幾個步驟需要注意:

提前3-4小時候注射秋水仙素,時間太長或者太短都會影響染色體中期的數目和形態。

在低滲過程中時間和吹打都很重要,低滲過度染色體膨脹,染色後肥肥的,低滲時間不過染色後染色體顏色很深看不出條帶。

滴片,如果是教學的實驗,要求玻片是冰的,而且要傾斜,滴的高度一般在25-30CM,滴完要過酒精燈,讓固定液蒸發。滴的數量不要太多否則會重疊.如果是醫院里的染色體製片有專門的滴片機。

小鼠骨髓細胞染色體標本製作:

原理:

由於小鼠四肢骨內骨髓細胞中的造血幹細胞是生成各種血細胞和原始細胞,具有高度的分裂能力,本實驗採用這一材料,通過前處理,低滲,固定,製片,染色等步驟製得染色體標本,可觀察到許多處於分裂中期的染色體,可以進行染色體組型分析;

試劑、試劑盒:秋水仙素、姬姆薩染液、固定液、低滲液、生理鹽水;

儀器、耗材:天平、離心機、恆溫培養箱、顯微鏡;

實驗步驟

一、材料和方法

1.  材料:小白鼠。

2.  設備:天平,離心機,恆溫培養箱,顯微鏡。

3.  葯品:秋水仙素,姬姆薩染液,固定液,低滲液,生理鹽水。

二、步驟

秋水仙素處理--取骨髓--低滲處理--固定--離心--再固定--再離心--滴片--染色--鏡檢--封片。

2、如何從小鼠脾臟中提取淋巴細胞

您好,很高興能幫助您,
建議抗原
你的採納是我前進的動力,還有不懂的地方,請你繼續「追問」!
如你還有別的問題,可另外向我求助;答題不易,互相理解,互相幫助!

3、B淋巴細胞在小鼠的什麼位置能取到?

T淋巴細胞來(又名T細胞)及其表面受源體和B淋巴細胞(又名B細胞)都起源於骨髓中的造血幹細胞;T細胞隨血循環到胸腺,在胸腺激素等的作用下成熟, B細胞則到脾臟或腔上囊發育成熟。然後再隨血循環到周圍淋巴器官,在各自既定的區域定居、繁殖(主要為脾臟),整裝待發。

4、如何提取小鼠骨髓細胞?

1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後,拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨,用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚,用眼科剪小心剪開皮膚,並分離兩下肢的皮膚,往下在腳踝處剪斷,往上在髖關節處剪斷,這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉,分別剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(脛骨),剪去兩端軟骨,露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔,沖洗骨髓腔以獲得骨髓,一般用2-3ml培養基沖洗兩次,可沖出絕大部分細胞。
5、過濾:用2OO目的濾網過濾,將濾網的中央插入到離心管裡面25px處,然後用注射器吸取骨髓液,慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中,去除殘渣。
6、離心:將離心管放置離心機中離心10分鍾(1350r/min)
7、去上清,加入1ml紅細胞裂解液ACK,靜置3分鍾,再加9ml HBSS溶液,進行離心10分鍾,棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次,室溫,1350r/min離心10分鍾。計數活細胞,用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基,然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇,
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻,24孔板鋪板培養,每個孔1ml.

5、如何取小鼠骨髓細胞

1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後,拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨,用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚,用眼科剪小心剪開皮膚,並分離兩下肢的皮膚,往下在腳踝處剪斷,往上在髖關節處剪斷,這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉,分別剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(脛骨),剪去兩端軟骨,露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔,沖洗骨髓腔以獲得骨髓,一般用2-3ml培養基沖洗兩次,可沖出絕大部分細胞。
5、過濾:用2OO目的濾網過濾,將濾網的中央插入到離心管裡面25px處,然後用注射器吸取骨髓液,慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中,去除殘渣。
6、離心:將離心管放置離心機中離心10分鍾(1350r/min)
7、去上清,加入1ml紅細胞裂解液ACK,靜置3分鍾,再加9ml HBSS溶液,進行離心10分鍾,棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次,室溫,1350r/min離心10分鍾。計數活細胞,用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基,然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇,
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻,24孔板鋪板培養,每個孔1ml.

6、小鼠B淋巴細胞免疫和獲得 怎麼實驗設計呀?

選擇D。因為骨髓中有B淋巴細胞,可以增殖分化成漿細胞,漿細胞可以產生抗體。但是細胞免疫需要T淋巴細胞參與,已經被破壞,又沒有再提供,所以沒有細胞免疫

7、單克隆抗體制備過程從小鼠什麼中提取

(1)單克隆抗體的制備採用了動物細胞融合技術和動物細胞培養技術,它們的原理依次是細版胞膜的流動性和權動物細胞增殖.
(2)從小鼠體內提取B淋巴細胞之前,需對小鼠注射特異性抗原,使小鼠發生免疫反應產生相應的B淋巴細胞.
(3)誘導原生質體融合的方法有物理法(離心、振動、電激)、化學法(聚乙二醇),而誘導動物細胞融合的方法有物理法(離心、振動、電激)、化學法(聚乙二醇)和生物肥(滅活的病毒).因此,與原生質體誘導融合相比,誘導B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合的特有方法是滅活的病毒.
(4)①細胞是雜交瘤細胞,需要用選擇性培養基篩選出來.
(5)雜交瘤細胞具有既能無限增殖,又能產生特異性抗體的特點.生產的單克隆抗體的優點是特異性強、靈敏度高、可大量制備.
故答案為:
(1)細胞膜的流動性 動物細胞增殖
(2)注射特異性抗原
(3)滅活的病毒
(4)雜交瘤 選擇性
(5)無限增殖 產生特異性抗體 特異性強、靈敏度高、可大量制備

8、骨髓如何抽取?

朋友,詳細介紹給你了, 1.骨髓是人體的造血組織,位於人體許多骨骼內.成年人的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓.紅骨髓能製造紅細胞、血小板和各種白細胞.血小板有止血作用,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,抱括細菌、病毒等;某些淋巴細胞能製造抗體。因此,骨髓不但是制血器官,它還是重要的免疫器官。黃骨髓主要是脂肪組織,當人體貧血時,它可以轉化為紅骨髓。 2.捐獻骨髓會不會影響捐獻者的身體健康? 捐款骨髓不會影響人的健康。許多人認為捐獻骨髓是抽取脊髓,這完全是一種誤解。骨髓移植是需要人體內的紅骨髓——造血幹細胞。一個成年人的造血幹細胞是3公斤,一名捐獻者提拱不到10克的骨髓幹細胞就能救活一名白血患者、因此不會減盡弱其免疫能力和造血能力。骨髓是在生能力很強的組織,對於健康捐獻者,會在10天左右即可補足所捐獻的幹細胞量。 3.健康者在什麼年齡段適合捐獻骨髓? 健康者在18~55歲均可捐獻骨髓。 4.什麼是骨髓移植? 骨髓移植是指把骨髓中的造血幹細胞從一個人體內移植到另一個人體內(一般是通過靜脈輸入)。確切地說,骨髓移植就是造血幹細胞的移植。 5.什麼人需要進行骨髓移植? 人體血液系統及免疫系統的嚴重疾病,如白血病(俗稱血癌)。淋巴瘤、再生障礙性貧血地中海貧血、重病放射病患者,繼續生存的希望就是骨髓移植。我國每年約400萬名各類疾病的患者等待著骨髓移植。 除了對捐獻者的休重、血壓等身體健康程度和獻血條件一樣外,捐獻骨髓者一般要求在18周歲以上、45周歲以下,最好有獻血或捐獻血小板的經歷,一旦抽樣,配對也要求是身體、心理等都較成熟者,以便於救治患者,從嚴格意義上來說,捐髓實際上是捐獻造血幹細胞,一次性捐獻量約20克左右,對身體沒有影響,市民可在義務獻血的同時填寫一張自願捐髓表,這樣醫院將有關資料輸入信息庫後,可隨時約請志願者救死扶傷。 樣捐獻骨髓 1.如何成為志願捐獻者? 如果您年齡在18至55歲之間、身體健康,可撥打中華骨髓庫骨髓捐獻熱線電話:(北京)010-65126600,(上海)021-62478117,或到區縣級以上紅十字會報名,並填寫志願捐獻書及有關表格。 2.捐獻骨髓有哪些步驟? 1)報名後,骨髓庫或紅十字會安排您驗血5毫升,並將化驗的HLA分型結果儲存在中國造血幹細胞捐獻者資料庫中,供患者尋找配對。 2)供者與受者初步配型相同,骨髓庫的工作人員會向您詳細介紹捐獻過程,同時請您接受全身檢查。 3.如何抽取骨髓? 抽取骨髓造血幹細胞有兩種方法:一是醫生在供者的髂骨部位穿刺採集骨髓中的造血幹細胞,術後一兩天內有些疼痛,一周內就可完全恢復。二是用科學的方法有效地動員骨髓和其他部位的造血幹細胞大量釋放到外周血液中去,從供者的手臂靜脈中採集,並通過機器將造血幹細胞分離出來,剩餘的血液回輸到供者體內。 4.捐獻骨髓會不會影響身體健康? 許多人認為捐獻骨髓是抽取脊髓,這完全是一種誤解。骨髓移植需要的是人體內的紅骨髓——造血幹細胞。一個成年人的骨髓重量為3公斤,一名供髓者提供不足10克的骨髓造血幹細胞就能挽救一名白血病患者的生命。骨髓是再生能力很強的組織,一般健康者捐獻造血幹細胞後在十天左右即可補足所捐的幹細胞量。因此,捐獻骨髓不會影響人的身體健康。

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