1、如何從小鼠骨髓中分離和培養DC
1、 取骨髓，對倍稀釋
2、 用滴管沿管壁緩慢加入淋巴細胞分離液(45度角傾斜，盡量產生氣泡，起到緩沖作用)
3、 2000轉，離心30分鍾
4、 吸取白膜層，（沿管壁）交替多次吸取，加入5倍體積以上的PBS液
5、 1500轉，離心15分鍾（洗掉血小板）
6、 棄掉上清，留少許迴流液，輕彈管壁，加入PBS液至50ml
7、 800轉，離心10分鍾，（洗掉紅細胞）
8、 重復兩至三次
9、 加入PBS液至50ml，計數:？個細胞
離心後鋪板，1X1076孔板培養液，共鋪20板。無血清1640+DNA酶12h後輕晃培養液，洗板後加入完全培養基和GM—CSF(1000U/ml)和IL—4(500U/lml)
10、 第三天每孔補加等體積的完全培養基和GM—CSF(1000U/ml)和IL—4(500U/lml) ，這時細胞部分懸浮
11、 第五天為imDC，+1LPS(1ug/ml),誘導至第七天，為mDC。
2、如何從小鼠骨髓中分離和培養DC
拉頸處死小鼠，無菌剝離股骨和脛骨，用Hank』S沖出骨髓細胞，PBS洗
滌1次，用0．83％Tris—NH4CL裂解紅細胞，RPMI1640培養液洗滌2次，調整細胞濃度為1×106個／mL，
並加入rmGM—CSF(1000 U／mL)和rmlL－4(500 U／mL)，接種於24孔培養板，置於37~C，5％CO2孵箱中
培養．第3天輕輕搖動培養板，吸走大部分懸浮細胞，加人等量的培養液，並補足細胞因子．隔日半量換液
1次，第7天收集懸浮或稍微貼壁的細胞．
3、小鼠骨髓來源樹突狀細胞 用多大的小鼠
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