1、小鼠骨髓中的細胞為什麼只能通過有絲分裂?
有絲分裂(mitosis)是指一種真核細胞分裂產生體細胞的過程,細胞的有絲分裂是一個連續動態的變化過程,但可以通過它的形態變化,特別是細胞核中的染色體行為,人為地劃分階段,並進行比較研究。在自然狀態下,一大群處於各個分裂期的細胞混雜在一起。必須仔細觀察,尋找有絲分裂過程各期典型形態特徵的細胞,從而建立起細胞周期的概念。
2、制備小鼠骨髓染色體標本過程中有哪幾個主要步驟影響製片結果
在制備小鼠骨髓細胞染色體標本過程中以下幾個步驟需要注意:
提前3-4小時候注射秋水仙素,時間太長或者太短都會影響染色體中期的數目和形態。
在低滲過程中時間和吹打都很重要,低滲過度染色體膨脹,染色後肥肥的,低滲時間不過染色後染色體顏色很深看不出條帶。
滴片,如果是教學的實驗,要求玻片是冰的,而且要傾斜,滴的高度一般在25-30CM,滴完要過酒精燈,讓固定液蒸發。滴的數量不要太多否則會重疊.如果是醫院里的染色體製片有專門的滴片機。
小鼠骨髓細胞染色體標本製作:
原理:
由於小鼠四肢骨內骨髓細胞中的造血幹細胞是生成各種血細胞和原始細胞,具有高度的分裂能力,本實驗採用這一材料,通過前處理,低滲,固定,製片,染色等步驟製得染色體標本,可觀察到許多處於分裂中期的染色體,可以進行染色體組型分析;
試劑、試劑盒:秋水仙素、姬姆薩染液、固定液、低滲液、生理鹽水;
儀器、耗材:天平、離心機、恆溫培養箱、顯微鏡;
實驗步驟
一、材料和方法
1. 材料:小白鼠。
2. 設備:天平,離心機,恆溫培養箱,顯微鏡。
3. 葯品:秋水仙素,姬姆薩染液,固定液,低滲液,生理鹽水。
二、步驟
秋水仙素處理--取骨髓--低滲處理--固定--離心--再固定--再離心--滴片--染色--鏡檢--封片。
3、如何提取小鼠骨髓細胞?
1、頸椎脫臼法處死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分鍾後,拎出後將小鼠鋪於超凈台上一個消毒托盤上。
2、無菌提取小鼠的四肢骨,用眼科鑷小心捏起小鼠兩髖關節之間的腹部皮膚,用眼科剪小心剪開皮膚,並分離兩下肢的皮膚,往下在腳踝處剪斷,往上在髖關節處剪斷,這樣可以游離出小鼠的兩條下肢。
3、小心剝離肌肉,分別剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(脛骨),剪去兩端軟骨,露出紅色的骨髓腔。注意盡可能少的剪走骨髓腔。用紗布將骨頭上的肌肉用紗布擦拭乾凈。
4、拿一支1ml的無菌注射器,每支吸取1mlHBSS液,並用無菌的針頭套管將之輕輕擰彎。輕輕插入骨髓腔,沖洗骨髓腔以獲得骨髓,一般用2-3ml培養基沖洗兩次,可沖出絕大部分細胞。
5、過濾:用2OO目的濾網過濾,將濾網的中央插入到離心管裡面25px處,然後用注射器吸取骨髓液,慢慢將骨髓液經濾網注入離心管中,去除殘渣。
6、離心:將離心管放置離心機中離心10分鍾(1350r/min)
7、去上清,加入1ml紅細胞裂解液ACK,靜置3分鍾,再加9ml HBSS溶液,進行離心10分鍾,棄上清。
8、用HBSS液洗滌骨髓細胞2次,室溫,1350r/min離心10分鍾。計數活細胞,用培養基調整細胞濃度至1X106個細胞/ml.
9、在試管中加入RPMI-1640培養基,然後再加入20ng/ml的細胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巰基乙醇,
10、吸取培養基加入到沉澱中混勻,24孔板鋪板培養,每個孔1ml.
4、小鼠骨髓細胞的染色體標本一般制備成什麼片
小鼠骨髓細胞的染色體標本一般制備成什麼片
首先要提前2小時向小鼠注射秋水仙素,處死小鼠,剪下四肢,剔除肉等,剪碎骨,加生理鹽水,離心取細胞(離心管底部),再經低滲處理,染色,滴冰片,鏡檢.很麻煩,具體的你可以去圖書館查閱相關資料(動物染色體制備).
5、請問一隻小鼠有多少骨髓單個核細胞?
單核細胞(monocytes)是體積最大的白細胞.其細胞核常偏位,呈多形性,如卵圓形、腎形、馬蹄形、不規則形等,常有折疊感;染色質呈疏鬆網狀,著色較淺.胞質較多,嗜鹼性,但因含大量細小的嗜天青顆粒而染成灰藍色,顆粒含過氧化物酶.血塗片,Giemsa染色 .
單個核細胞是指只有一個細胞核的細胞.一般醫學檢驗書上說的是「外周血中單個核的白細胞」包括「淋巴細胞和單核細胞」.外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear
cell,PBMC)即外周血中具有單個核的細胞,包括淋巴細胞和單核細胞.體外檢測淋巴細胞首先要分離外周血單個核細胞,目前主要的分離方法是
Ficoll-hypaque(葡聚糖-泛影葡胺)密度梯度離心法,因為血液中各有形成分的比重存在差異,因此得以分離.紅細胞和
粒細胞密度大於分層液,同時因紅細胞遇到Ficoll而凝集成串錢狀而沉積於管底.血小板則因密度小而懸浮於血漿中,唯有與分層液密度相當的單個核細胞密
集在血漿層和分層液的界面中,呈白膜狀,吸取該層細胞遞經洗滌高心重懸.本法分離單個核細胞純度可達95%,淋巴細胞約佔90%~95%,細胞獲得率可達
80%以上,其高低與室溫有關,超過25℃時會影響細胞獲得率.
6、小鼠骨髓細胞染色實驗中有哪些材料可用作制備染色標本,其基本特性是什麼
在明視野下,若能看清的話就不要染色了。因為在無法觀測清楚時,才會染色。通常染色劑會影響微生物的活性,更多的是使細胞死亡。即使是活性染料也有一定的影響。 根據經驗 不染色完全可以看見顯微結構 細胞膜 細胞壁 液泡 核 基本可以看見 葉綠體隱約可以看見 當然解析度和光圈大小需要調整到最佳狀態 鞭毛可以隱約看見 黴菌放線菌細菌的形態當然是不染色完全可以看 如果想看更細致些 比如線粒體 高爾基體 核膜 微囊體 膜泡等亞顯微結構 需要用特定的分子染料進行染色再進行觀察 如果你不需要做活體實驗而只是觀察的話,染色吧,清晰度好一些。