骨髓rna提取

1、跪謝先，我要收集骨髓液，分離單核細胞提取DNA和RNA。應該怎樣保存骨髓液呢

一般生物樣品都是放在-80冰箱保存，不過如果是蛋白的話，-80冰箱保存兩個月也會降解！RNA時間久更短了。

融化時，打一盒冰 ，樣品放在冰上溶解。

運輸條件一般有兩種，一種是放冰袋到泡沫盒中，另一種就是放乾冰到泡沫盒中，

2、如何從骨組織提取總RNA

可以用專用的試劑盒提取，比如說，有專用的小鼠骨骼RNA提取試劑盒。如果不用專用試劑盒，樣品不好研磨，會導致提取質量降低。

3、RNA提取原理

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:

Trizol是一種總RNA抽提試劑，內含異硫氰酸胍等物質，能迅速裂解細胞，抑制細胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進行提取組織或細胞中的RNA。

Trizol作用原理:

在勻質化或溶解樣品中，Trizol試劑可保持RNA的完整性，同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心後，裂解液分層成水相和有機相。RNA存在於水相中。

水相轉移後，RNA通過異丙醇沉澱回收。移去水相後，用乙醇可從中間相沉澱得到DNA，加入異丙醇沉澱可從有機相得到蛋白質。

(3)骨髓rna提取擴展資料:

抽提RNA的使用目的

RNA用於不同的後續實驗，其質量要求不盡相同。

cDNA文庫構建要求RNA完整而無酶反應抑制物殘留；

Northern對RNA完整性要求較高，對酶反應抑制物殘留要求較低；

RT-PCR對RNA完整性要求不太高，但對酶反應抑制物殘留要求嚴格。因此，明確實驗目的是進行後續實驗的首要條件。

4、血清RNA提取方法

血清RNA提取，biog的具體操作步驟如下： 1. 請自行准備：無水乙醇、無RNA酶1.5mL離心管。2. 取出洗滌液，按以下操作：a) 洗滌液A：21mL加入9mL無水乙醇；35mL加入15mL無水乙醇；42mL加入18mL無水乙醇。b) 洗滌液B：9mL加入21mL無水乙醇；15mL加入35mL無水乙醇；18mL加入42mL無水乙醇。c) 配製好的洗滌液如出現沉澱，可在37℃溶解，搖勻後使用。3. 取無RNA酶的1.5mL離心管，加入200μL樣本，4μLRNA Carrier混合均勻，再加入300μL 裂解液及20μL 消化液，漩渦震盪10秒，充分混勻，56℃水浴10 分鍾至完全裂解。4. 加入1000μL無水乙醇，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響RNA的提取與後續實驗。5. 將吸附柱放入收集管內，將760μL上述溶液轉入吸附柱內，靜置2 分鍾，12,000 rpm 4℃離心1 分鍾，棄收集管內廢液.6. 將剩餘760μL溶液轉移至吸附柱內，重復步驟5。7. 將吸附柱放回收集管內，加500μL 洗滌液A至吸附柱內，12,000 rpm 4℃離心1 分鍾，棄收集管內廢液。8. 將吸附柱放回收集管內，加500μL 洗滌液B至吸附柱內，12,000 rpm 4℃離心1 分鍾，棄收集管內廢液。9. 將吸附柱放回收集管內，12,000 rpm 4℃離心2 分鍾，離去殘留的洗滌液。10. 取出吸附柱，放入新的無RNA酶的1.5 mL 離心管內，加入30-50μL 洗脫液，靜置3 分鍾，12,000 rpm 4℃ 離心2 分鍾，收集RNA溶液。11. -70℃保存，或直接用於下一步實驗。

5、如何選擇正確的RNA提取方法

1. 使用正確的細胞或組織儲存條件
在樣品用液氮瞬間凍結之後，應該儲存在-80°C，千萬不能解凍。即使是置於含有胍鹽的裂解液中作勻漿前的短暫解凍，也會導致RNA的降解和損失。瞬間凍結的組織應該首先在超低溫條件下先研磨成粉，然後置於裂解液中進行勻漿。
RNAfixer使樣品儲存更為便利。儲存在RNAfixer中的細胞或組織可在室溫下穩定保存長達1個星期，在4°C可穩定保存長達1個月，或永久保存在-20°C。
2. 消除環境RNase的污染
為了得到完整的、高品質RNA，在整個RNA制備過程中，當RNA離開強蛋白變性劑（如離液裂解液或酚）的保護時，避免引入新的RNase污染就非常關鍵。由於RNase幾乎是無所不在，所以必須確保與純化的RNA接觸的每一樣東西都是無RNase污染的。所有的表面，包括移液器、工作台、玻璃器皿和制膠設備，都必須用表面去污凈化溶液如RNase噴霧清除劑 來處理過，去除各種溶液或者反應緩沖液中可能存在的RNase污染，可以用RNAsafe。必須保證一直使用無RNase的槍頭、試管和溶液，手套也應經常更換。
3.迅速滅活內源的RNA酶，以防止RNA降解。
以下3個方法均可有效使內源RNA酶失活：
1）、用含離液（如胍鹽）的細胞裂解液收獲樣品，並立即勻漿。
2）、用液氮瞬間凍結樣品。值得特別注意的是：組織塊必須保證足夠小，在浸入液氮的瞬間就能凍結，以確保瞬間令RNA酶失活。
3）、立即將樣品置於RNAfixer無液氮RNA樣品儲存液中。它是一種水相、無毒的收集試劑，能立即穩定並保護完整、未凍結的組織和細胞樣品中的RNA。關鍵要點是組織樣品切片一定要夠薄（<0.5 cm），這樣RNAfixer才能在RNase破壞RNA之前迅速滲入組織塊中。
4. 選擇合適破壁方法
細胞或組織的徹底勻漿對RNA提取來說，是一個很關鍵的步驟，它能夠防止RNA的損失和降解。勻漿的方法應根據細胞或組織的類型來選擇。大部分培養的細胞可以置於細胞裂解液中，通過簡單的渦旋震盪來勻漿；而動物組織、植物組織、酵母和細菌、真菌則常常需要更加劇烈的方法，通常用液氮研磨。比如說細菌（特別是革蘭氏陽性菌）的細胞壁，就需要溶菌酶消化來實現徹底的細胞裂解和RNA的最大回收，酵母提取時加入破壁酶幫助破壁，再用TRIpure或RNApure進行提取。
5. RNA提取少走彎路——不同材料如何選擇最適RNA提取試劑
現有眾多的RNA分離方法也許令人難以取捨。目前最簡單也是最安全的方法是柱式分離，如RNApure 因為操作簡單，時間短，純度高而受到大家的喜愛，RNApure不需要DNA酶消化DNA，節省了時間，避免RNA的降解，從而提高了產量；相對非柱式分離（如TRIzol），去除蛋白及其他雜質干凈，提高了純度，對於細胞、組織、一般植物均非常適合。植物RNA的提取比較難抉擇，植物RNA提取受酚、多糖、蛋白雜質、次生代謝物含量的影響，一般用TRIzol提取純度不高，而且很多植物用TRIzol提取不出來。
這時候可以選擇多糖多酚植物總RNA提取試劑盒（水仙、辣椒、胡蘿卜、玉米、百合、小麥、西紅柿、花菜、油菜等）和通用植物RNA提取試劑盒（適合絕大多數植物提取，包括：各種中草葯、植物種子、蘋果、葡萄、草莓、香蕉、龍眼、荔枝、草坪植物、松樹、杉樹、白樺、紫松果、彩葉草、一品紅、夾竹桃、垂葉榕、紫羅蘭、月季、天竺藍、牽牛花等）；非常值得一提的是血液（包括血清、血漿、腦脊液、各種拭子或其他液體含量高的樣本）RNA的提取用TRIzol和紅細胞裂解的方法效果都不好，因為紅細胞裂解液不含有RNA酶的抑製成分，這個過程RNA很容易降解，推薦使用TRIpure LS (RP1101)或者血液總RNA提取試劑盒（RP4001），該方法適用於表達譜晶元實驗中RNA的提取。
6. 低濃度RNA的沉澱
純化得到的RNA可能需要通過沉澱來濃縮，以滿足一些下游應用的需要。醋酸銨(NH4OAc) 沉澱（加0.1體積的5M 醋酸銨、2-2.5體積的無水乙醇，-20°C放置25分鍾以上）可以很好地回收RNA。如果需要定量回收低濃度的RNA（ng/ml），可以採用共沉澱（如linear acrylamide糖原glycogen,、酵母yeast RNA ）的方法。核酸助沉劑是linear acrylamide，當RNA用於RT-PCR分析時，線性的丙烯醯胺和DNase處理的糖原都可以作為理想的共沉澱劑，因為它們都不含DNA污染，糖原含量高會抑制PCR反應，應注意控制濃度，核酸助沉劑對PCR無影響，成為病毒核酸提取的首選。酵母RNA和未處理的糖原會給樣品帶來核酸污染，有可能影響RT-PCR的結果。沉澱後，注意避免RNA沉澱過分乾燥，因為這可能導致很難重新溶解。
7. 提取好的RNA如何儲存
如果只是短期儲存，重懸的RNA應放置於-20°C；如果是長期儲存的話，就應該放置於-80°C。儲存RNA時，可以加入少量的RNA酶抑制劑（RP5601），避免RNA的降解，RNA可以直接做下游實驗。如果要長期保存RNA，可以加入RNAlong。我們推薦將RNA溶液分裝在幾支管中。這會避免反復凍融損傷RNA，並預防偶然的RNase污染。

6、RNA的提取方法

1、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細胞，消化蛋白，然後用酚和酚-氯萃取，高速離心後取上清，所得DNA大小為100-150kb

2、甲醯胺解聚法：破碎細胞同上，然後用高濃度甲醯胺解聚蛋白質與DNA的結合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。

3、玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細胞，將裂解物鋪於乙醇上，然後用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DNA沉澱液繞於玻棒。生成DNA約80kb。

4、異丙醇沉澱法：基本同1法，僅用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態）

5、表面活性劑快速制備法：用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞，然後用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉澱或透析。

6、加熱法快速制備：加熱96℃-100℃，五分鍾，然後離心後取上清，可用於PCR反應。

7、鹼變性快速制備：先用NaOH作用20分鍾，再加HCI中和，離心後取上清，含少量DNA。

(6)骨髓rna提取擴展資料：

DNA提取原則：

1、保證核酸一級結構的完整性；

2、核酸樣品中不應存在對酶有抑製作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子；

3、其他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染應降低到最低程度；

4、其他核酸分子，如RNA，也應盡量去除。

7、骨髓單個核細胞分離，目的用於RNA的提取

用淋巴細胞分離液就可以了。天津生產的，90元一瓶，200毫升。
1 骨髓液3毫升，用3毫升PBS稀釋混勻；
2 平鋪於6毫升淋巴細胞分離液液面上，保持界面清晰；
3 2000轉/分水平離心30分鍾；
4 1毫升針頭吸取中間雲霧層；
5 用PBS洗滌兩次。
骨髓液用抗凝管收集就可以了，不要放到4度冰箱，避免溶血；淋巴細胞分離液使用前室溫平衡；離心機必須為水平離心，不要突然剎車，應使速度緩慢下降；骨髓液和淋巴細胞分離液必須保持界面清晰。

8、提取血液的RNA怎麼提取

取新鮮的血液（紫管），加入3倍體積紅細胞裂解液，混勻後室溫放置10分鍾，10,000 rpm離心1分鍾。

徹底吸棄上清，收集白細胞沉澱。

每100-200μl血液收集的白細胞沉澱加入1ml TRIzol。室溫放置5min，使樣品充分裂解。

4℃12,000 rpm 離心10分鍾，取上清（）。

每1ml TRIzol加入200μl氯仿，劇烈振盪混勻後室溫放置3-5 min，自然分相。

4℃ 12,000rpm離心10-15min。樣品會分成三層：黃色的有機相，中間層和無色的水相，RNA主要在水相中，把水相轉移到新管中（小心吸取水相）

在上清中加入等體積冰冷的異丙醇（），室溫放置10-20min。

4℃ 12,000 rpm離心10min，棄上清，RNA沉澱於管底。

RNA沉澱中加入1ml 75%乙醇（用RNase-free水配製，），溫和振盪離心管，懸浮沉澱。

4℃5,000-8,000 rpm離心1-2min，棄上清。

室溫放置1-2分鍾晾乾沉澱。 

沉澱中加入50-100μl RNase-free水，輕彈管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存。

檢測純度和濃度（OD260/OD280在2.0左右）

9、骨組織RNA的提取注意事項

RNA提取的時候，一定要注意防止RNA酶作用。
第一點，樣本處理和存放最好都放負80冰櫃。
第二點，實驗過程中你可以使用DEPC水泡過的槍頭，離心管，保持手套干凈，帶好口罩，不要說話。
第三點，假如你用Trizol提取RNA，75%的乙醇也最好採用來菌的DEPC水來配製。晾乾酒精這一步時間不要太長。
第四點：瓊脂糖凝膠電泳，專漕專用，使用新的電泳緩沖液TBE。
還有呢，也可以在實驗前，採用RNase Zap噴噴桌面，也能有一定程度上去除RNA酶的影響。
一般提取的時候多多注意，應該問題不大。
糊弄用可以，但是如果是自己做實驗的話最好還是參考一下比較好的文獻總結會比較好！

10、RNA的提取方法有哪些？

主要有苯酚、異硫氰酸胍、CTAB、LiCl密度梯度、Trizol等方法。
現在常用的是Trizol法。
提前將研缽、研棒、剪刀、鑷子等用錫箔紙包好200度烘烤6小時，與實驗前放到冰箱中預冷。槍頭、離心管等DEPC水浸泡處理12小時後，高溫滅菌30分鍾（也可不用DEPC處理，常規高溫滅菌40分鍾），整個處理過程必須帶手套（最好帶口罩），否則環境中的RNA酶會降解RNA。
1、取鮮樣或者在-80度保存樣品，液氮研磨樣品至細小粉末，0.1g樣品加入1mlTrizol混勻，室溫靜置5分鍾。
2、12000rpm離心十分鍾，取上清至一新的離心管中，加入0.2ml氯仿劇烈晃動15秒，室溫靜置2-3分鍾
3、12000rpm離心十分鍾，取上清至一新的離心管中，加入等體積異丙醇，混勻，室溫靜置10分鍾
4、12000rpm離心十分鍾，去除上清，用70%乙醇清洗2次，7500rpm離心五分鍾，晾乾。（不可過分乾燥否則不易溶解）
5、加入適量DEPC水溶解沉澱